同时检测多种维生素的方法和检测试剂盒技术

本发明专利技术涉及化学分析和检测技术领域，具体而言，涉及同时检测多种维生素的方法和检测试剂盒。同时检测多种维生素的方法，包括：利用萃取液对血液样本进行预处理，而后，将待测维生素的同位素内标混合液与预处理后的所述血液样本混合，接着，采用液相色谱串联质谱法进行检测，其中，所述萃取液包括质量百分数为1

【技术实现步骤摘要】
同时检测多种维生素的方法和检测试剂盒
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2021年05月14日提交中国专利局的申请号为CN202110526613.9、名称为“同时检测多种维生素的方法和检测试剂盒”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。


[0003]本专利技术涉及化学分析和检测
，具体而言，涉及同时检测多种维生素的方法和检测试剂盒。

技术介绍

[0004]维生素是维持人体正常生理功能、维持细胞内特异代谢反应所必须的一类小分子有机物，是人体健康所必须的一类基本营养物质。其在体内需求量较少，主要由食物供给，并在调节物质代谢过程中发挥重要作用。
[0005]目前，已知人体内含有多种维生素，根据其极性大小可分为脂溶性和水溶性维生素两大类。水溶性维生素包括B族维生素和维生素C，其中B族维生素是对在功能、结构、理化特性上相似的一类维生素的统称，其结构中全部含有氮，均易溶于水，主要以辅酶的形式参与体内多种物质的合成和分解代谢过程，与血细胞的形成及能量的释放有着密切关系。B族维生素缺乏与多种疾病的发生发展密切相关，可导致皮肤病，记忆衰退，乏力失眠，精神衰弱等。如VB1缺乏病俗称脚气病，VB2缺乏症又被称为＂口腔生殖系统综合征＂，VB6缺乏可导致脂溢性皮炎，VB9缺乏可引起高同型半胱氨酸血症，胎儿神经管畸形，VC缺乏可引起坏血症，人体抵抗力下降等。因此，监测人体内水溶性维生素的含量，有助于评价人体营养状况、监测疾病的诊断和治疗过程，具有非常重要的临床意义。
>[0006]临床检测人体内水溶性维生素的方法主要有免疫分析法，液相色谱法及液相色谱串联质谱法等。免疫测定法是利用免疫学原理，以待测物作为抗原或抗体从而测定样品中待测物质含量的方法，通常操作简便，无复杂样本预处理步骤，但是不具备待测物特异性分析与高通量检测；液相色谱法是通过分析物与流动相和固定相之间的相互作用实现分离并检测，与免疫分析法相比，具有更好的分离能力及分析特异性；液相色谱
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串联质谱(LC
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MS/MS)法则结合了色谱分离特性和质谱的定性功能，对复杂混合物的定量分析更为准精准，并能实现高通量一次性测试检测多维生素，但是即使采用液相色谱
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串联质谱检测维生素依然存在时间长和检测效果不够准确等问题。
[0007]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供同时检测多种维生素的方法和检测试剂盒。本专利技术实施例提供一张新的多种维生素的检测方法，其检测速度快，基本可以在5分钟内实现15种维生素的检测，且检测结果准确。
[0009]本专利技术是这样实现的：
[0010]第一方面，本专利技术提供一种同时检测多种维生素的方法，包括：利用萃取液对血液样本进行预处理，而后，将待测维生素的同位素内标混合液与预处理后的所述血液样本混合，接着，采用液相色谱串联质谱法进行检测，其中，所述萃取液包括质量百分数为1
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10％的TCA的醇水溶液。
[0011]第二方面，本专利技术提供一种用于同时检测多种维生素的检测试剂盒，其包括前述实施方式所述的同时检测多种维生素的方法所需要的萃取液包、待测维生素的内标混合溶液包以及液相色谱所用的流动相溶剂包。
[0012]本专利技术具有以下有益效果：本专利技术实施例通过采用1
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10％的TCA的醇水溶液对血液样本进行预处理，能够有效对血液样本中的多种维生素进行萃取，继而提升多种维生素的检测效果，同时，缩短检测时间。
附图说明
[0013]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0014]图1为本专利技术检验例1提供的洗脱梯度1的结果图；
[0015]图2为本专利技术检验例1提供的洗脱梯度2的结果图；
[0016]图3为本专利技术检验例2提供的流动相1的结果图；
[0017]图4为本专利技术检验例2提供的流动相2的结果图；
[0018]图5为本专利技术检验例2提供的流动相3的结果图；
[0019]图6为本专利技术检验例3提供的检测结果图；
[0020]图7为本专利技术检验例4提供的检测结果图；
[0021]图8为本专利技术检验例5提供的B1与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0022]图9为本专利技术检验例5提供的B2与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0023]图10为本专利技术检验例5提供的B3与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0024]图11为本专利技术检验例5提供的B3
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NH2与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0025]图12为本专利技术检验例5提供的B5与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0026]图13为本专利技术检验例5提供的B6
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OH与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0027]图14为本专利技术检验例5提供的B6
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COOH与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0028]图15为本专利技术检验例5提供的B6
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CHO与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0029]图16为本专利技术检验例5提供的B6
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NH2与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0030]图17为本专利技术检验例5提供的B7与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0031]图18为本专利技术检验例5提供的B9与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0032]图19为本专利技术检验例5提供的5
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MTHF与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0033]图20为本专利技术检验例5提供的B12与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0034]图21为本专利技术检验例5提供的VC与内标对比色谱图及标准曲线线性图；
[0035]图22为本专利技术检验例5提供的B13与内标对比色谱图及标准曲线线性图。
具体实施方式
[0036]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0037]本专利技术实施例提供一种同时检测多种维生素的方法，包括：
[0038]利用萃取液对血液样本进行预处理，使得血液样本中的蛋白质沉淀，其中，采用的萃取液包括质量百分数为1
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10％的TCA的醇水溶液，此处的意思是在醇水溶液中TCA的质量含量为1
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10％。采用该萃取液能够保证蛋白质的沉淀效果，继而有利于提升各个维生素的萃取效果，继而提升检测的准确性。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测多种维生素的方法，其特征在于，包括：利用萃取液对血液样本进行预处理，而后，将待测维生素的同位素内标混合液与预处理后的所述血液样本混合，接着，采用液相色谱串联质谱法进行检测，其中，所述萃取液包括质量百分数为1
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10％的TCA的醇水溶液。2.根据权利要求1所述的同时检测多种维生素的方法，其特征在于，所述醇水溶液为体积百分数为35
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75％的醇溶液；优选地，所述醇水溶液为一元醇和水的混溶溶液；优选地，所述一元醇包括甲醇。3.根据权利要求1所述的同时检测多种维生素的方法，其特征在于，液相色谱的条件包括：流动相A：2
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10mM的乙酸铵水溶液；流动相B：2
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10mM的乙酸铵醇溶液，且所述乙酸铵醇溶液中含有体积百分数为0.05
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0.15％的甲酸；洗脱条件包括：0.0
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0.5min，99％A，0.5
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2.6min，10％A，2.6
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3.6min，1％A，3.6
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4.5min，99％A；流速0.3
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0.4mL/min；进样量为2
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10μL；优选地，所述乙酸铵醇溶液为乙酸铵和一元醇的混合溶液，优选地，所述一元醇包括甲醇；优选地，质谱条件：气帘气：20.0kPa，离子源温度：150℃，去溶剂温度：550℃，去溶剂气流速：800L/hr，喷雾电压：5.5kV，锥孔电压：30V，锥孔气流：30L/hr。4.根据权利要求1
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3任一项所述的同时检测多种维生素的方法，其特征在于，所述血液样本包括血浆样本或者血清样本。5.根据权利要求1
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3任一项所述的同时检测多种维生素的方法，其特征在于，所述萃取液与所述血液样本的体积比为1:1
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4:1。6.根据权利要求1
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3任一项所述的同时检测多种维生素的方法，其特征在于，多种所述维生素为水溶性维生素，优选地，多种所述维生素包括B1、B2、B3、B3
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NH2、B5、B6

【专利技术属性】
技术研发人员：孙念，栗琳，肖冰心，高雅，贾子强，王东，张壹芃，张刻，郭树建，丁亮，周立，
申请(专利权)人：北京豪思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：