铜蓝蛋白的应用制造技术

本发明专利技术属于生物药品应用领域，具体涉及铜蓝蛋白在制备预防或/和改善或/和治疗阿尔茨海默症的药物中的应用；或/和铜蓝蛋白在制备益智类补充剂或药物方面的应用。本发明专利技术中，铜蓝蛋白可以起到增强记忆力、提高认知功能的作用。发明专利技术人发现铜蓝蛋白能够显著促进神经细胞的生长，并且能够显著改善痴呆动物模型的学习记忆能力。细胞实验结果表明铜蓝蛋白可以有效抑制Aβ对神经元造成的损伤，对神经元具有保护作用。筑巢实验结果表明铜蓝蛋白能够提高痴呆动物模型的筑巢能力，提示痴呆动物的自理能力提高。水迷宫实验结果表明铜蓝蛋白能够提高痴呆动物模型的学习记忆能力。

Application of ceruloplasmin

The invention belongs to the application field of biological medicine, in particular to the application of ceruloplasmin in the preparation of drugs for prevention or / and improvement or / and treatment of Alzheimer's disease; or / and the application of ceruloplasmin in the preparation of tonic supplements or drugs. In the invention, ceruloplasmin can enhance memory and cognitive function. The inventor found that ceruloplasmin can significantly promote the growth of nerve cells, and can significantly improve the learning and memory ability of dementia animal models. The results of cell experiments show that ceruloplasmin can effectively inhibit the damage of a \u03b2 to neurons and protect them. The results of nesting experiment showed that ceruloplasmin could improve the nesting ability of dementia animal model, suggesting that the ability of self-care of dementia animal was improved. The results of water maze experiment show that ceruloplasmin can improve the learning and memory ability of dementia animal model.

【技术实现步骤摘要】
铜蓝蛋白的应用
本专利技术属于生物药品应用领域，具体涉及铜蓝蛋白在制备预防或/和改善或/和治疗阿尔茨海默症的药物中的应用；或/和铜蓝蛋白在制备益智类补充剂或药物方面的应用。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)又称老年性痴呆，是一种由神经元丢失导致的脑中枢神经系统退行性疾病，在老年人群中该病的发病率约为4％-8％。1906年，德国神经病理学家阿尔茨海默首次报告了一例具有进行性记忆力下降表现的51岁女性患者。1910年，以命名和分类大脑疾病著称的精神病学家EmilKraepelin提议将此病命名为阿尔茨海默病。该病常见的临床表现为进行性记忆力和认知力减退、语言障碍、精神运动异常等，对患者的正常生活造成严重影响，同时也给家庭和社会带来沉重的负担。2010年，WHO报道全球痴呆患者为3500万，中国为540万。自2010年起，全世界痴呆总人口每20年将翻一倍。《世界阿尔茨海默病2015报告》指出，到2050年，全球AD的患病人数将增加至1.3亿。AD的发病机制复杂，包括淀粉样蛋白沉淀，脑内金属离子动态失衡，线粒体功能障碍等引起的神经递质减少以及神经元凋亡，涉及多种分子信号通路，目前已上市的治疗药物仅4种(多奈哌齐，加兰他敏，卡巴拉汀以及美金刚)，均以延缓AD中早期病状进展和改善早期AD临床病状为主，迄今尚无逆转或阻止病情进展的有效药物。近年来有研究把来自于年轻小鼠的血浆重复的注射进老年小鼠，发现血浆可以通过调节参与海马认知的经典分子通路而提高记忆功能。而血浆组成极其复杂，包括蛋白质、脂类、无机盐、糖、氨基酸、代谢废物以及大量的水。因此，目前的科研和实践中，需要找出血浆中具有改善学习记忆能力以及治疗老年性痴呆的成分。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种铜蓝蛋白的应用。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：铜蓝蛋白在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆和/或认知功能障碍的药物中的应用；或/和铜蓝蛋白在制备益智类补充剂或药物方面的应用。在优选的实施方式中，所述铜蓝蛋白来自哺乳动物。在优选的实施方式中，所述铜蓝蛋白来自健康人。在优选的实施方式中，所述铜蓝蛋白的制备原料包括健康人血清。在优选的实施方式中，所述痴呆和/或认知功能障碍为阿尔茨海默症或轻度认知障碍。相比于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术中，铜蓝蛋白可以起到增强记忆力、提高认知功能的作用。专利技术人发现铜蓝蛋白能够显著促进神经细胞的生长，并且能够显著改善痴呆动物模型的学习记忆能力。细胞实验结果表明铜蓝蛋白可以有效抑制Aβ对神经元造成的损伤，对神经元具有保护作用。筑巢实验结果表明铜蓝蛋白能够提高痴呆动物模型的筑巢能力，提示痴呆动物的自理能力提高。水迷宫实验结果表明铜蓝蛋白能够提高痴呆动物模型的学习记忆能力。附图说明图1：检测1中光镜检测不同浓度的铜蓝蛋白处理原代培养海马神经元作用图，A部分为海马神经元数量柱状图，B部分为海马神经元突起长度柱状图。图2：检测2中MTT法检测不同浓度的铜蓝蛋白处理原代培养海马神经元后改善Aβ25-35对原代培养海马神经元的损伤。图3：检测3中筑巢行为学实验检测铜蓝蛋白处理小鼠前后筑巢行为得分。图4：检测4中水迷宫行为学实验检测铜蓝蛋白处理小鼠的记忆改善情况。其中，A部分为小鼠在隐藏平台训练阶段上台时间，B部分为小鼠在测试阶段在目标象限所处时间百分比。具体实施方式为了更好地对本专利技术的技术特征和效果进行说明，下面采用具体实施方式对本专利技术进行详细说明，但本专利技术并不限于此。本专利技术提供铜蓝蛋白(英文名ceruloplasmin或covellinealbumen，简写为CP)在制备痴呆和/或认知功能障碍的药物中的应用；或/和铜蓝蛋白在制备益智类补充剂或药物方面的应用。本专利技术所述铜蓝蛋白来自哺乳动物；优选为来自健康人的血浆。所述痴呆和/或认知功能障碍为阿尔茨海默症或轻度认知障碍。阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。轻度认知障碍(MCI)是介于正常衰老和痴呆之间的一种中间状态，是一种认知障碍症候群。本专利技术在细胞水平验证了不同浓度铜蓝蛋白对原代培养海马神经元生长的影响，并通过MTT法检测不同浓度的铜蓝蛋白处理原代培养海马神经元后改善Aβ25-35对原代培养海马神经元的损伤，试验结果表明，在0.5-2mg/ml的浓度范围内，铜蓝蛋白促进海马突起长度增长的作用明显；在1-4mg/ml的浓度范围内，铜蓝蛋白可以显著改善Aβ25-35对原代培养海马神经元的毒性损伤。另外，专利技术人从动物试验水平检测了铜蓝蛋白对5×FAD转基因(APP)小鼠的记忆力改善情况，结果表明，铜蓝蛋白明显改善痴呆模型小鼠的记忆力。本专利技术所用铜蓝蛋白由健康人血清为原料，根据论文《铜蓝蛋白的分离纯化及其性质与功能基团研究》(褚波，2006)中描述的方法所得。所得铜蓝蛋白活性为1.02unit/mg。下面通过实施例对本专利技术铜蓝蛋白的制备、鉴定和应用进行说明。以下实施例中涉及的分子生物学操作如未注明具体试验条件和方法，请参照SambrookJ等主编，科学出版社，2017，分子克隆实验指南(第四版)或相应产品的说明书。以下实施例中使用的原代海马细胞是按照如下参考文献培养的：Guo,W.,Y.Ji,etal.(2014)."NeuronalactivityaltersBDNF-TrkBsignalingkineticsanddownstreamfunctions."JCellSci127(Pt10):2249-2260。实施例1本实施例的铜蓝蛋白是参考上述论文第17-32页的方法得到，将3.1.5.1的猪血清替换为健康人的血清，得到透析液；再将透析液经过DEAE-Sepharose(方法如3.1.5.2所述)、羟基磷灰石吸附层析(方法如3.1.5.3所述)、Superdex-200凝胶过滤层析(方法如3.1.5.4所述)后获得的比活性最高的组分作为铜蓝蛋白纯品。再将该铜蓝蛋白纯品采用过滤除菌，滤膜为0.22μm低蛋白吸附的PVDF膜，压力为5bar，得到灭菌后的铜蓝蛋白。灭菌后的铜蓝蛋白(CP溶液)对原代培养海马神经元生长的作用检测，对铜蓝蛋白处理原代培养海马神经元后改善Aβ25-35对原代培养海马神经元的损伤的检测，以及对铜蓝蛋白治疗后5xFAD模型鼠筑巢能力和学习记忆能力的检测。检测1：原代海马神经元培养及铜蓝蛋白处理。(1)利用0.1％(W/V)的poly-L-lysine包被48孔培养板，放入37℃培养箱中包被2小时以上。(2)在冰的HBSS-buffer中解剖0天初生小鼠，取出海马体。用1×PBS清洗3次。加0.25％trypsin，37℃消化15分钟。(3)用完全DMEM终止消化，并用1ml枪轻吹吸海马细胞16-20次，没有明显组织块即可，再用40mM滤网过滤，1000rpm本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.铜蓝蛋白在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆和/或认知功能障碍的药物中的应用；或/和铜蓝蛋白在制备益智类补充剂或药物方面的应用。/n

【技术特征摘要】
1.铜蓝蛋白在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆和/或认知功能障碍的药物中的应用；或/和铜蓝蛋白在制备益智类补充剂或药物方面的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述铜蓝蛋白来自哺乳动物。


3.根据权利要求2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：栗琳，崔雅轩，谢蓝，张丽丽，娄玉霞，管书丽，石浩威，
申请(专利权)人：北京豪思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11