枯草芽孢杆菌菌株NH-6及其应用制造技术

本发明专利技术涉及芽孢杆菌领域，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌菌株NH‑6及其应用。一种枯草芽孢杆菌菌株NH‑6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC 17815。本发明专利技术的枯草芽孢杆菌菌株NH‑6具有培养方法简单、生长速度快、抗菌谱广和抗逆性强等优点。由该枯草芽孢杆菌菌株NH‑6制备的生物防治制剂，可以作为生物农药或者生物肥料，防治根结线虫病害和多种植物病原真菌，包括黑斑病菌、纹枯病菌和灰霉病菌等。

Bacillus subtilis strain nh-6 and its application

The invention relates to the field of Bacillus, in particular to a Bacillus subtilis strain NH \u2011 6 and its application. A Bacillus subtilis strain NH \u2011 6 was deposited in the general microbiology center of China microbial species preservation and Management Committee with the preservation number of CGMCC 17815. The Bacillus subtilis strain NH \u2011 6 of the invention has the advantages of simple culture method, fast growth speed, wide antibacterial spectrum, strong stress resistance, etc. The biological control preparation prepared by the Bacillus subtilis strain NH \u2011 6 can be used as biological pesticide or biological fertilizer to control root knot nematode disease and a variety of plant pathogenic fungi, including black spot, sheath blight and gray mould.

【技术实现步骤摘要】
枯草芽孢杆菌菌株NH-6及其应用
本专利技术涉及芽孢杆菌领域，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌菌株NH-6及其应用。
技术介绍
枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，枯草芽孢杆菌广泛应用于饲料、肥料及作为杀菌剂使用。其制剂是无毒、无残留、无污染的绿色菌剂，具有广阔的发展前景，显示出巨大的社会效益和生态效益。然而现有的枯草芽孢杆菌很多只能单一的对某种植物病害起到防治作用，而有些虽然能够防治多种植物病害，但是作用效果不太理想。因此，继续专利技术一种新的能够高效防治多种植物病害的枯草芽孢杆菌。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于高效防治多种植物病害和根结线虫病害的新的细菌-枯草芽孢杆菌菌株NH-6，本专利技术的菌株具有生长速度快、抗菌谱广和抗逆性强等优点。本专利技术所提供的枯草芽孢杆菌菌株NH-6，是从土壤中分离筛选得到，已于2019年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC17815，其具有以下形态学特征：枯草芽孢杆菌菌株NH-6的革兰氏染色呈阳性，菌体为杆状，PYS培养基培养26℃培养24h后产生芽孢，芽孢呈椭圆形，中生。培养初期菌落为圆环形、乳白色，边缘整齐，菌落隆起呈馒头状，表面湿润；培养后期菌落为淡黄色，边缘呈小齿状，表面干燥有褶皱。在液体培养基中静止培养时，菌体在培养基表面形成白色菌膜结合《常见细菌系统鉴定手册》，该菌应为芽孢杆菌属。枯草芽孢杆菌菌株NH-6的常规培养方法或者繁殖方法包括：将枯草芽孢杆菌菌株NH-6接种于PBGA培养基进行常规培养，培养温度为25-30摄氏度，培养基配方包括胰蛋白胨、牛肉浸膏、葡糖糖和琼脂。本专利技术第二个方面公开了枯草芽孢杆菌菌株NH-6在防治根结线虫和防治植物病原真菌中的应用。所述植物病原真菌包括黑斑病菌、纹枯病菌和灰霉病菌。应该理解，本专利技术并不限于根结线虫、黑斑病菌、纹枯病菌和灰霉病菌任何能够利用本专利技术方法枯草芽孢杆菌菌株NH-6进行防治目的虫类或者病菌都在本专利技术的保护范围之内。本专利技术第三个方面公开了一种生物防治制剂，该生物防治制剂包括上述的枯草芽孢杆菌菌株NH-6。本专利技术第四个方面公开了一种制备上述的生物防治制剂的方法，包括以下步骤：S1：制备枯草芽孢杆菌菌株NH-6的种子液；S2：将S1中的得到的种子液接种到培养基中进行发酵培养即得到生物防治制剂。本专利技术第五个方面公开了一种用于防治农作物的根结线虫病害的方法，包括向根部有根结线虫的农作物施用上述的枯草芽孢杆菌菌株NH-6或者上述的生物防治制剂。优选的，所述农作物为番茄。应当理解，本专利技术的保护范围农作物并不限于番茄，本领域技术人员在本专利技术的教导之下，本领域技术人员能够采用其他合适的农作物，并且在本专利技术的保护范围之内。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点或者有益效果：本专利技术的枯草芽孢杆菌菌株NH-6具有培养方法简单、生长速度快、抗菌谱广和抗逆性强等优点。由该枯草芽孢杆菌菌株NH-6制备的生物防治制剂，可以作为生物农药或者生物肥料，防治根结线虫病害和多种植物病原真菌，包括黑斑病菌、纹枯病菌和灰霉病菌等。附图说明利用附图对本专利技术作进一步说明，但附图中的实施例不构成对本专利技术的任何限制。图1为本专利技术实施例中枯草芽孢杆菌菌株NH-6对纹枯病菌拮抗作用示意图；图2为本专利技术实施例中枯草芽孢杆菌菌株NH-6对黑斑病菌拮抗作用示意图；图3为本专利技术实施例中枯草芽孢杆菌菌株NH-6对灰霉病菌拮抗作用示意图；图4为本专利技术实施例中枯草芽孢杆菌菌株NH-6对根结线虫生长具有拮抗作用的示意图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例1枯草芽孢杆菌菌株NH-6的分离与纯化本实施例中的枯草芽孢杆菌菌株NH-6是从土壤中采用稀释平板法和平板划线法分离获得的，分离方法为：在根结线虫发病设施番茄中，选取健康根部采集土壤，无菌水溶解，上清液依次稀释涂布平板，挑取单菌落斜面培养，以纹枯病原菌为指示菌，进行初筛、复筛和定量筛选。分离得到的枯草芽孢杆菌菌株NH-6的革兰氏染色呈阳性，菌体为杆状，PYS培养基培养26℃培养24h后产生芽孢，芽孢呈椭圆形，中生。培养初期菌落为圆环形、乳白色，边缘整齐，菌落隆起呈馒头状，表面湿润；培养后期菌落为淡黄色，边缘呈小齿状，表面干燥有褶皱。在液体培养基中静止培养时，菌体在培养基表面形成白色菌膜结合《常见细菌系统鉴定手册》，该菌应为芽孢杆菌属。分离得到的枯草芽孢杆菌菌株NH-6具体生理生化特性如表1所示。表1NH-6的生理生化特性其中，表1中的接触酶具体是过氧化氢酶。该枯草芽孢杆菌菌株NH-6已经保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC17815。实施例2NH-6菌株16SrDNA鉴定将实施例1中提取得到的NH-6菌株的DNA,进行PCR扩增，扩增基因片段克隆分析，测序结果表明，菌株16SrDNA序列长度为l510bp，将测序结果(GenBank登陆号为DF520956)与NCBI中芽抱杆菌16SrDNA基因序列进行同源性比较，菌株16SrDNA序列与枯草芽孢杆菌16SrDNA序列同源性达到99％。综合NH-6菌株形态特征、生理生化指标测定结果，初步确定NH-6为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。实施例3NH-6菌株对多种植物病害具有拮抗作用NH-6菌株挑取移植到PBGA斜面，26℃下培养36h。以纹枯病菌、黑斑病菌和灰霉病菌为指示菌进行抑菌试验，拮抗作用必须在环境条件一致的情况下进行。将供试病原菌移植活化PDA平板上，26℃下培养48h，然后用打孔器在带菌PDA平板上打孔，在不带菌PDA平板上呈对角点接NH-6菌株，生长10h后在平板中央移入供试病菌菌块，26℃下培养48h，放置病原菌块但不接NH-6的平板作对照，当对照长满平板，测量拮抗带宽度，每个病原菌株3个重复处理。结果如图1-图3所示，图中A图为对照组，B组为处理图。通过分析比较图1-图3的实验结果，可以得出NH-6菌株对多种植物病害具有拮抗作用。实施例4NH-6菌株对根结线虫生长具有拮抗作用番茄苗移栽3d后，接种NH-6菌株。随机抽取移栽好的番茄苗，灌根接种NH-6菌悬液(1010CFU/mL)25mL；灌根处理3d后，将5mL(90条/mL)线虫悬浮液稀释滴注到番茄的根部，以直接接种线虫悬浮液5mL(90条/mL)的处理作为对照。NH-6和清水作为处理组。每一处理20株苗，重复3次。温度26℃、相对湿度50％条件下，培养5周。取出接种植株，统计病害发生情况，计算病害严重度和防效。结果如图4所示，图中A图为对照组，B组为处理图，从图中可以得出NH-6菌株对根结线虫生长具有拮抗作用。以上对本专利技术的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本专利技术并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本专利技术进行的等同修改和替代也都在本专利技术的范畴之中。因此，在不脱离本专利技术的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本专利技术的范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种枯草芽孢杆菌菌株NH‑6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC 17815。

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌菌株NH-6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC17815。2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌菌株NH-6在防治根结线虫中的应用。3.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌菌株NH-6在防治植物病原真菌中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述植物病原真菌包括黑斑病菌、纹枯病菌和灰霉病菌。5.一种生物防治制剂，包括权利要求1所述的枯草芽孢杆菌菌株NH-6...

【专利技术属性】
技术研发人员：李德全，邓自发，曹云英，谈蓉，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32