【技术实现步骤摘要】
一种高产β-法尼烯突变菌株的复合诱变育种方法
本专利技术涉及生物诱变育种
，尤其是一种高产β-法尼烯突变菌株的复合诱变育种方法。
技术介绍
β-法尼烯(β-Farnesene，又称β-金合欢烯)是一种由三个异戊二烯组成的链状倍半萜烯化合物，在日化、农业、化工、能源和医药等领域有着广泛应用。尤其在医药领域，β-法尼烯是合成维生素E的前体物质异植物醇的重要原料。维生素E是全球市场容量最大的维生素类产品之一，每年全球约生产6万吨，维生素E前体异植物醇的原料供应一直被德国巴斯夫和荷兰帝斯曼所垄断，他们以柠檬醛作为中间体合成异植物醇，进而采用全化学合成工艺将三甲基氢醌和异植物醇进行环合反应生成维生素E。但全化学合成技术具有污染大，成本高的问题，人们一直试图寻找一种更节能环保的方法来生产维生素E，而采用微生物法合成β-法尼烯，能够使得维生素E的生产过程具有高转化率、低成本、低能耗等优势，在很大程度上降低了维生素E的生产成本具有，并且生产过程也更加绿色环保，可减少碳排放60％，因此高产β-法尼烯菌种的选育是企业降低发酵成本、提高产品市场竞争力的有效手段之一。传统菌种选育方...
【技术保护点】
1.一种高产β‑法尼烯突变菌株的复合诱变育种方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)菌悬液的制备：选取恒温培养箱内37℃下培养2天的EC‑16斜面菌苔，用10mL无菌生理盐水将菌苔洗下，放入盛有玻璃珠的无菌锥形瓶中，无菌锥形瓶置于震荡装置中，在30℃、220‑300r/min的条件下震荡5‑15min，使菌体分散，菌体分散后于2500‑5000r/min条件下离心10‑20min，弃上清液，将菌体用生理盐水悬浮并洗涤2‑3次，采用细菌计数板计数，调整菌悬液浓度约为10
【技术特征摘要】
1.一种高产β-法尼烯突变菌株的复合诱变育种方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)菌悬液的制备：选取恒温培养箱内37℃下培养2天的EC-16斜面菌苔，用10mL无菌生理盐水将菌苔洗下，放入盛有玻璃珠的无菌锥形瓶中，无菌锥形瓶置于震荡装置中，在30℃、220-300r/min的条件下震荡5-15min，使菌体分散，菌体分散后于2500-5000r/min条件下离心10-20min，弃上清液，将菌体用生理盐水悬浮并洗涤2-3次，采用细菌计数板计数，调整菌悬液浓度约为106-109个/mL，备用；(2)等离子体-紫外线复合诱变：在超净工作台中取3mL步骤(1)制得的菌悬液加入到直径60mm带有磁力搅拌转子的无菌平皿中，在搅拌状态下用紫外灯照射20-120s，紫外灯功率为18W，灯距为30cm，紫外线诱变结束后，立即用移液枪移取20μL诱变后的菌悬液，涂布在无菌不锈钢载片上，并按照ARTP-M型诱变育种仪的操作流程进行处理，以氮气为工作气体，设定功率为120W，处理温度为室温，通气量为10SLPM，等离子体发射源与样品间的距离为5-20mm，处理时间设置为20-70s；(3)平板初筛：将经过等离子体-紫外复合诱变处理的菌悬液用无菌的生理盐水稀释至10-6-10-8稀释度，然后涂布于含0.3-2.0g/L的异戊烯焦磷酸的分离筛选培养基上，置于37℃，避光培养1-2天，挑取平板上最先生长出的大肠杆菌单菌落接种于斜面培养基上，置于37℃，培养1-2天；(4)摇瓶复筛：用接种铲刮取平板筛选出的EC-16的斜面菌苔1-2cm2接种于种子培养基中，37℃、220-300r/min条件下培养12-20h，取5mL培养菌液接种于100mL的发酵培养基中，37℃、220-300r/min条件下震荡培养至OD600为0.6-0.8时，加入终浓度为0.1mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷，随后加入正十二烷作为β-法尼烯的萃取剂，萃取剂的用量达到体积分数为10-35％(v/v)，设定培养温度为30℃，发酵72-96h，测定β-法尼烯的含量，然后挑选出发酵产物含量最高的突变株进行发酵罐验证；(5)发酵罐验证：...
【专利技术属性】
技术研发人员：寇凤雨，王一然，刘伟，马杰希，
申请(专利权)人：山东泓达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37
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