一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法，从原始出发菌种中挑取1‑2环菌体，接种到种子培养基中培养，作为备选菌株待用；备选菌株接种于筛选培养基上摇床培养发酵筛选，作为种子菌株；种子菌株接种1‑2环菌液至斜面培养基上活化，作为活化菌种；活化菌种挑取1‑2环菌体接种至固体培养基上，送往太空搭载进行空间诱变。培养并筛选出优质菌株，并进行活化，从而提高了诱变时的突变率和活性，且诱变的均为筛选后的优质菌株，不盲目诱变，提高诱变效率。

A Method for Improving Space Mutagenesis Efficiency of Yeast Strains

【技术实现步骤摘要】
一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法
本专利技术涉及微生物
，具体为一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法。
技术介绍
酿酒酵母是酵母菌中最重要、应用最广泛的一类，在发酵、功能性营养源和生物领域等有重要作用，酵母菌株发酵生产功能性物质，一般由两方面的特性决定：一是菌株的生长能力；二是菌株产功能性物质的能力。由于微生物变异快，因此微生物发酵工程一直受到生物工程学科的重视，是微生物发酵工程领域的重点研究方向之一，诱变方法一直是一个只有更好，没有最好的研究课题；如何高效的诱变方法以及从众多的突变菌株中筛选出高产功能性物质的菌株，一直是微生物诱变工作的难点，为此我们提出一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法用于解决上述问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)菌株的培养从原始出发菌种中挑取1-2环菌体，接种到种子培养基中，在28-33℃温度下，150-170rpm，摇床培养16-22小时，作为备选菌株待用；(2)菌株的筛选将步骤(1)中的备选菌株接种于筛选培养基上摇床培养发酵，最终选出OD600＝0.7-0.9的菌株，作为种子菌株；(3)活化将步骤(2)中的种子菌株接种1-2环菌液至斜面培养基上，在温度为26-28℃的条件下培养18-22小时，停止培养，作为活化菌种；(4)样品准备将步骤(3)中活化菌种挑取1-2环菌体接种至固体培养基上，将接完种的斜面放入培养箱中，25～35℃条件下进行培养3-7小时，在无菌条件下，刮取一块培养好的斜面加入2mL搭载小管中，用封口膜封口，置于4℃温度下保存；(5)空间诱变将样品送往太空搭载，太空搭载时间为15-19天，辐射剂量0.1-0.9mGy，诱变后进行突变率分析及活性分析。优选的一种实施案例，步骤(1)中，所述种子培养基按质量百分比计，其原料组成包括：葡萄糖0.5-1.0％、乳糖0.3-0.5％、甘油0.3-0.5％、蛋白胨0.5-1.0％、酵母膏0.5-1.0％，加无菌蒸馏水至100％。优选的一种实施案例，步骤(2)中，所述筛选培养基按质量百分比计，其原料组成包括：酵母膏0.5-1.0％、蛋白胨1-2％、葡萄糖1-2％、酵母代谢物0.5-1.0％，加无菌蒸馏水至100％.优选的一种实施案例，所述酵母代谢物为乙酸乙酯、庚酸乙酯、乙酸、丁酸和己酸中的一种或几种。优选的一种实施案例，步骤(3)中斜面培养基按质量百分比计，其原料组成包括：玉米浆0.3-0.5％、葡萄糖0.5-1.0％、蛋白胨0.3-0.5％、酵母膏0.5-1.0％、琼脂粉1.4-1.8％，加无菌蒸馏水至100％，并在自然PH下经过120-125℃湿热灭菌25min。优选的一种实施案例，步骤(4)中，所述固体培养基按质量百分比计，其原料组成包括：葡萄糖1-2％，蛋白胨1-2％，酵母浸出粉0.5-1％，琼脂1.5-2.0％，加无菌蒸馏水至100％。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：首先是利用单因素实验和响应面分析得到酿酒酵母发酵培养基的各组分，即碳源、氮源、无机离子和酶激活剂，通过种子培养基培养并酵母菌株；然后通过筛选培养基筛选出生长迅速、单菌落大的菌株继续培养，最终进行诱变的都是生长更快速、代谢效率更高的优良菌株，从而提高菌株在进行空间诱变后的成活率，避免进行盲目的诱变，提高效率；通过斜面培养基活化酵母酵母菌株，便于菌株接受空间辐射时进行突变，最终经过空间诱变后大大提高了菌株生长速率和活性，提高空间诱变效率；本方法操作过程简单，所需试剂和材料均为实验室常见的普通试剂，可实现工业副产物废啤酒酵母的综合利用，增加工业副产物的利用率和附加价值，具有重大的经济效益和环保意义。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例一本专利技术提供一种技术方案：一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)菌株的培养从原始出发菌种中挑取1-2环菌体，接种到种子培养基中，在30℃温度下，155rpm，摇床培养18小时，作为备选菌株待用；(2)菌株的筛选将步骤(1)中的备选菌株接种于筛选培养基上摇床培养发酵，最终选出OD600＝0.7的菌株，作为种子菌株；(3)活化将步骤(2)中的种子菌株接种1-2环菌液至斜面培养基上，在温度为26℃的条件下培养19小时，停止培养，作为活化菌种；(4)样品准备将步骤(3)中活化菌种挑取1-2环菌体接种至固体培养基上，将接完种的斜面放入培养箱中，28℃条件下进行培养5小时，在无菌条件下，刮取一块培养好的斜面加入2mL搭载小管中，用封口膜封口，置于4℃温度下保存；(5)空间诱变将样品送往太空搭载，太空搭载时间为17天，辐射剂量0.5mGy，诱变后进行突变率分析及活性分析。步骤(1)中，种子培养基原料组成包括：葡萄糖5g、乳糖3g、甘油3g、蛋白胨5g、酵母膏5g，无菌蒸馏水1L，倒入无菌三角瓶中，制成种子液体培养基。步骤(2)中，筛选培养基原料组成包括：酵母膏5g、蛋白胨10g、葡萄糖10g、酵母代谢物5g，无菌蒸馏水1L.进一步的，酵母代谢物为乙酸乙酯:己酸按质量比1:10的混合液。步骤(3)中，斜面培养基原料组成包括：玉米浆3g、葡萄糖5g、蛋白胨3g、酵母膏5g、琼脂粉14g，无菌蒸馏水1L，并在自然PH下经过120-125℃湿热灭菌25min。步骤(4)中，固体培养基原料组成包括：葡萄糖10g，蛋白胨10g，酵母浸出粉5g，琼脂15g，无菌蒸馏水1L。实施例二本专利技术提供如下技术方案：一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)菌株的培养从原始出发菌种中挑取1-2环菌体，接种到种子培养基中，在32℃温度下，165rpm，摇床培养20小时，作为备选菌株待用；(2)菌株的筛选将步骤(1)中的备选菌株接种于筛选培养基上摇床培养发酵，最终选出OD600＝0.8的菌株，作为种子菌株；(3)活化将步骤(2)中的种子菌株接种1-2环菌液至斜面培养基上，在温度为27℃的条件下培养21小时，停止培养，作为活化菌种；(4)样品准备将步骤(3)中活化菌种挑取1-2环菌体接种至固体培养基上，将接完种的斜面放入培养箱中，32℃条件下进行培养6小时，在无菌条件下，刮取一块培养好的斜面加入2mL搭载小管中，用封口膜封口，置于4℃温度下保存；(5)空间诱变将样品送往太空搭载，太空搭载时间为18天，辐射剂量0.4mGy，诱变后进行突变率分析及活性分析。步骤(1)中，种子培养基原料组成包括：葡萄糖8g、乳糖4g、甘油4g、蛋白胨8g、酵母膏8g，无菌蒸馏水1L。步骤(2)中，筛选培养基原料组成包括：酵母膏7g、蛋白胨15g、葡萄糖15g、酵母代谢物8g，无菌蒸馏水1L。.酵母代谢物为庚酸乙酯：乙酸：丁酸按质量比1：5：1的混合液。步骤(3)中，斜面培养基原料组成包括：玉米浆8g、葡萄糖8g、蛋白胨4g、酵母膏8g、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)菌株的培养从原始出发菌种中挑取1‑2环菌体，接种到种子培养基中，在28‑33℃温度下，150‑170rpm，摇床培养16‑22小时，作为备选菌株待用；(2)菌株的筛选将步骤(1)中的备选菌株接种于筛选培养基上摇床培养发酵，最终选出OD600＝0.7‑0.9的菌株，作为种子菌株；(3)活化将步骤(2)中的种子菌株接种1‑2环菌液至斜面培养基上，在温度为26‑28℃的条件下培养18‑22小时，停止培养，作为活化菌种；(4)样品准备将步骤(3)中活化菌种挑取1‑2环菌体接种至固体培养基上，将接完种的斜面放入培养箱中，25～35℃条件下进行培养3‑7小时，在无菌条件下，刮取一块培养好的斜面加入2mL搭载小管中，用封口膜封口，置于4℃温度下保存；(5)空间诱变将样品送往太空搭载，太空搭载时间为15‑19天，辐射剂量0.1‑0.9mGy，诱变后进行突变率分析及活性分析。

【技术特征摘要】
1.一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)菌株的培养从原始出发菌种中挑取1-2环菌体，接种到种子培养基中，在28-33℃温度下，150-170rpm，摇床培养16-22小时，作为备选菌株待用；(2)菌株的筛选将步骤(1)中的备选菌株接种于筛选培养基上摇床培养发酵，最终选出OD600＝0.7-0.9的菌株，作为种子菌株；(3)活化将步骤(2)中的种子菌株接种1-2环菌液至斜面培养基上，在温度为26-28℃的条件下培养18-22小时，停止培养，作为活化菌种；(4)样品准备将步骤(3)中活化菌种挑取1-2环菌体接种至固体培养基上，将接完种的斜面放入培养箱中，25～35℃条件下进行培养3-7小时，在无菌条件下，刮取一块培养好的斜面加入2mL搭载小管中，用封口膜封口，置于4℃温度下保存；(5)空间诱变将样品送往太空搭载，太空搭载时间为15-19天，辐射剂量0.1-0.9mGy，诱变后进行突变率分析及活性分析。2.根据权利要求1所述的一种提高酵母菌株空间诱变效率的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述种子培养基按质量百分比计，其原料组成包括：葡萄糖0.5-1.0％、乳糖0.3-0.5％、甘油0...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶明强，邝哲师，周鹏飞，黄静，潘木水，丘银清，
申请(专利权)人：广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44