一种赶黄草中黄酮类物质的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种赶黄草中黄酮类物质的提取方法,该方法包括：1)将赶黄草粉碎成40目以上的细粉；2)将细粉在60℃‑80℃的环境下干燥4‑6小时；3)加入甲醇溶液，加入纳米金属材料，施加微波，混均后用回流装置在60℃‑80℃提取温度下水浴浸提1.5h，取出减压过滤得到滤液；4)称取预处理后的聚酰胺树脂和大孔树脂，加入步骤3的滤液，置于振荡器，在30℃下振荡12h，用溶剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸干，得到提取物。

A method of Extracting Flavonoids from Huangcao

【技术实现步骤摘要】
一种赶黄草中黄酮类物质的提取方法
本专利技术涉及赶黄草有效成份提取领域，具体是一种赶黄草中黄酮类物质的提取方法。
技术介绍
赶黄草，也被称作扯根菜、水杨柳(四川)、水泽兰(贵州)，是虎耳草科扯根菜亚科扯根菜属植物的一种，为多年生草本植物。最早记载在明代《救荒本草》，现今《中药大辞典》、《全国中草药汇编》、《四川中药志》、《湖南药物志》、《内蒙古植物药志》均有记载。赶黄草生长地方较多，国内主要有云贵川、两广地区、河北、甘肃、湖南以及江西等；国外主要分布在韩国、日本、蒙古、俄罗斯、泰国、越南等，其中又以四川省古蔺县海拔1000m以上为集中地域，是赶黄草的道地产区。嫩苗能作为蔬菜食用，通常以整株为药用部位，性温、味甜、无毒，具备除热疗毒、祛除瘀血、利水退肿、去酶健脾、消黄平肝的作用，可用于经闭、水肿、血崩、跌打损伤的治疗。它是肝苏相关产品、赶黄草饮片、赶黄草茶等的主要原料，应用价值极大。赶黄草含有丰富的黄酮类物质，溶剂提取法是获得黄酮类成分的常用方式。根据所需黄酮成分酸性强弱的差异，可以选用碱提取酸沉淀法；按照化合物极性的差别，使用水或者适当的有机溶剂完成提取。随着现代科技的进步，发展起来其他高效提取手段如超声波辅助提取、超临界流体萃取、酶解法、微波提取法等[50]。这就需要考虑提取效率、生产成本、工艺流程、产品纯度等问题并结合实际情况来选取适合的提取方法。赶黄草总黄酮常用的提取方法有水浴浸提和超声浸提法，采用单因素实验、正交设计或者响应面法进行最后的优化。汪洪武等和曹桦等都运用正交设计实验，比较了水浴浸提和超声浸提两种方法，虽然得到的最优条件有所不同，但都得到超声浸提法要优于水浴浸提法的结论，这与超声波能破坏植物细胞、提高有效成分的溶出率有关。而邓锷等结合使用这两种方法，先将样品用超声波预处理，然后通过单因素和4因素3水平的正交实验确定了最佳提取工艺。徐秀泉等则采用响应面法优化赶黄草总黄酮的超声提取过程，建立的最优提取工艺是加入26倍原料的60％乙醇在50℃下提取20min。现有的水浴浸提还是无法达到较好的提取率。同时，经过上述处理方法获得的提取液依旧含有许多杂质，要想得到有效部位或单体成分，还需继续精制纯化。常用的方法有液液萃取法、色谱法(层析法)、透析法、高速逆流色谱分离技术等。色谱法是目前天然产物分离纯化过程中使用率较高的方式。色谱法有很多种，依据分离原理有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱；依据分离材料有氧化铝色谱、硅胶色谱、聚酰胺色谱、大孔树脂色谱等；依据使用方式有纸色谱(PC)、柱色谱(CC)和薄层色谱(TLC)；依据移动相种类有气相色谱(GC)和液相色谱(LC)。其中，分离效果好、可再生、选择性好、操作简便的聚酰胺色谱[65]和大孔树脂色谱[66]在黄酮类化合物的精制纯化中应用广泛。
技术实现思路
本专利技术的目的在于：针对上述存在的问题，公开了一种赶黄草中黄酮类物质的提取方法,其特征在于，该方法包括：1)将赶黄草粉碎成40目以上的细粉；2)将细粉在60℃-80℃的环境下干燥4-6小时；3)加入甲醇溶液，加入纳米金属材料，搅拌，使得纳米金属悬浮在甲醇溶液当中，形成悬浮液，同时施加微波，混均后用回流装置在60℃-80℃提取温度下水浴浸提1.5h，取出减压微滤后得到滤液；4)称取预处理后的聚酰胺树脂和大孔树脂，加入步骤3的滤液，置于振荡器，在30℃下振荡12h，用溶剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸干，得到提取物。其中施加微波一方面能够使得纳米金属碰撞植物细胞，使得溶解的更加充分，另一方面微波辐射会导致溶液温度过高，纳米金属能够在一定程度提高散热效果，防止溶液温度过高。在一些情况下，纳米铜能够改变溶剂对有效成份的提取性能，进一步的提高提取效果。相对于没有加纳米金属和微波辅助的情况下，本专利技术可将黄酮类物质的有效成份提取率提高20％以上。在一些优选的实施例当中，所述的纳米金属为纳米铜，所述的纳米金属的粒径为20-100nm。在一些优选的实施例当中，步骤3中的提取温度为70℃，甲醇溶液为75％甲醇、料液比为1:20。在一些优选的实施例当中，所述的大孔树脂为HPD600、HPD826、HPD450、NKA-9的一种。在一些优选的实施例当中，所述步骤4的预处理为：取一定量聚酰胺树脂和10种大孔树脂，加入无水乙醇，浸泡过夜，使其彻底溶胀，搅拌或超声除去气泡装柱，装柱时向柱内逐渐倾入树脂悬浮液，开启阀门让溶剂慢慢流下，过程中持续轻轻敲击柱壁，让树脂自由沉降和混合，确保吸附剂均匀平整和柱体无气泡，先用无水乙醇洗脱直到流出液滴入水中不出现浑浊，再以蒸馏水洗至无醇味，接着依次以5％NaOH溶液、蒸馏水和5％盐酸溶液冲洗，除去小分子杂质，最后蒸馏水洗脱至中性。在一些优选的实施例当中，步骤4的上样量为10mL。在一些优选的实施例当中，所述的步骤4的洗脱溶剂为80％的甲醇。在一些优选的实施例当中，所述的步骤4的洗脱流速为6mL/min，柱体积为20mL。在一些优选的实施例当中，所述的步骤4的洗脱PH为6-7。在一些优选的实施例当中，微波频率为400-1000MHz，功率为200-1200w。附图说明图1为芦丁标准曲线；图2为提取时间对提取效果的影响；图3为溶剂浓度对提取效果的影响；图4为提取温度对提取效果的影响；图5为料液比对提取效果的影响；图6上样量对吸附效果的影响；图7水洗体积对解吸效果的影响；图8洗脱溶剂用量对解吸效果的影响。具体实施方式一、赶黄草提取工艺1材料赶黄草(全草、茎、叶、花，产地四川省泸州市古蔺县)；蒸馏水；氢氧化钠(NaOH，分析纯，成都科龙化工试剂厂)；亚硝酸钠(NaNO2，分析纯，成都科龙化工试剂厂)；硝酸铝(Al(NO3)3，分析纯，成都科龙化工试剂厂)；甲醇(工业级，成都科龙化工试剂厂)；芦丁(HPLC＞98％，成都植标化纯生物有限公司)；纳米铜粉(平均粒径80nm、纯度99.9％，比表面积14.5，体积密度0.25g/cm3，密度8.9g/cm3，宁波金雷纳米材料科技有限公司)2制备方法2.1溶液的配制将60℃恒温干燥4小时的赶黄草粉碎成细粉(40目)，精确称取1.0g于50mL三角瓶中，加入20mL50％甲醇溶液，加入纳米铜粉，其中纳米铜粉和赶黄草粉碎成细粉的质量比为1:50，并施加微波，微波频率为1000MHz，功率为1200w，在微波作用下，纳米铜粉能够产生一定振动，进而对赶黄草颗粒施加微观振动，使得其有效成份能够充分的溶解在溶剂当中，混匀后用回流装置在60℃下水浴浸提1.5h，取出经减压过滤得到滤液。将滤液全部转入25mL容量瓶，加50％甲醇溶液定容至刻度，即得到溶液。2.2方法学考察2.2.1标准曲线的绘制精密称取干燥芦丁20mg，用50％甲醇充分溶解，并于100mL容量瓶中准确定容至刻度线，得到对照品原液。依次精确吸取芦丁原液1、2、3、4、5mL加入25mL容量瓶，用蒸馏水补充至6mL，再加入1mL5％NaNO2溶液，摇匀静置6min；然后加入1mL10％Al(NO3)3溶液，摇匀静置6min；加入10mL4％NaOH溶液，再用蒸馏水补足到刻度线，充分混匀后静置15min。以未加芦丁原液的混合试剂作空白对照调零，控制波长510nm测定吸光值。最后以芦丁浓度(mg/mL)为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种赶黄草中黄酮类物质的提取方法,其特征在于，该方法包括：1)将赶黄草粉碎成40目以上的细粉；2)将细粉在60℃‑80℃的环境下干燥4‑6小时；3)加入甲醇溶液，加入纳米金属材料，施加微波，混均后用回流装置在60℃‑80℃提取温度下水浴浸提1.5h，取出减压过滤得到滤液；4)称取预处理后的聚酰胺树脂和大孔树脂，加入步骤3的滤液，置于振荡器，在30℃下振荡12h，用溶剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸干，得到提取物。

【技术特征摘要】
1.一种赶黄草中黄酮类物质的提取方法,其特征在于，该方法包括：1)将赶黄草粉碎成40目以上的细粉；2)将细粉在60℃-80℃的环境下干燥4-6小时；3)加入甲醇溶液，加入纳米金属材料，施加微波，混均后用回流装置在60℃-80℃提取温度下水浴浸提1.5h，取出减压过滤得到滤液；4)称取预处理后的聚酰胺树脂和大孔树脂，加入步骤3的滤液，置于振荡器，在30℃下振荡12h，用溶剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸干，得到提取物。2.根据权利要求1所述的赶黄草中黄酮类物质的提取方法,其特征在于，所述的纳米金属为纳米铁、纳米铜、纳米铝、纳米镍、纳米银的一种或多种的混合物，所述的纳米金属的粒径为20-100nm。3.根据权利要求2所述的赶黄草中黄酮类物质的提取方法,其特征在于，步骤3中的提取温度为70℃，甲醇溶液为75％甲醇、料液比为1:20。4.根据权利要求3所述的赶黄草中黄酮类物质的提取方法,其特征在于，所述的大孔树脂为HPD600、HPD826、HPD450、NKA-9的一种。5.根据权利要求4所述的赶黄草中黄酮类物质的提取方法,其特征在于，所述步骤4的预...

【专利技术属性】
技术研发人员：高平，邓小宽，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川,51