一种磁珠悬浮溶液及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种磁珠悬浮溶液及其使用方法，要解决的是现有国产磁珠核酸纯化试剂盒的质量良莠不齐的问题。本产品包括以下原料：终浓度为0.1‑2mol/L的生物缓冲剂、终浓度为10‑500ng/μL的硅羧基磁珠、终浓度为1‑20mol/L的氯化钠、体积分数为0.1‑5％的分散剂和体积分数为10‑50％的聚乙二醇，磁珠悬浮溶液的pH值为6‑9。本产品价格低廉，对比市场占有率最高的XP磁珠，相同纯化比例下，本产品的纯化回收率与其接近；相同纯化比例下，本产品的回收片段大小与其一致；本产品仅用到磁力架，因此相较于其他传统方法，通量得到了显著提高；本产品操作简单，对仪器要求不高，操作时间短。

A Magnetic Bead Suspension Solution and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠悬浮溶液及其使用方法
本专利技术涉及核酸纯化和片段筛选领域，具体是一种磁珠悬浮溶液。
技术介绍
高通量测序技术(NGS)涵盖文库构建、上机测序、数据分析、医学解读四个模块。其中文库构建是高通量测序技术的基石，也是高通量测序技术中的实验(WETLAB)端。文库构建包括以下步骤：核酸片段化(化学酶切或物理打断)、末端修复反应、片段筛选与纯化、末端加A反应、片段筛选与纯化、连接接头反应、片段筛选与纯化、PCR扩增富集反应、PCR产物纯化、文库质检、(后面过程在涉及到探针捕获才需进行)杂交捕获、再次PCR扩增富集反应、PCR产物纯化、文库质检等过程。由上可知，文库构建过程中涉及到大量的核酸纯化及片段筛选的工作。针对核酸纯化及片段筛选的传统方法有切胶回收法及离心过柱法等。切胶回收法的简要步骤如下：制备琼脂糖凝胶、点样电泳、切胶回收；该过程操作繁琐、对电泳缓冲液要求高，UV时长易对DNA造成损伤。离心柱法的简要步骤如下：滤膜吸附、洗液洗涤、干燥滤膜、洗脱核酸；该过程操作繁琐，回收率普遍偏低，无法实现高通量。针对核酸纯化及片段筛选的现代方法有磁珠法。最具代表性的磁珠产品当属德国BeckMan公司的AgencourtAMPureXP，是一种能够获得高质量DNA产物的磁珠核酸纯化试剂盒。市面上也有国内产出的相似试剂盒，但品质良莠不齐，人们也在进行相关方面的研究。
技术实现思路
本专利技术实施例的目的在于提供一种磁珠悬浮溶液，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：一种磁珠悬浮溶液，包括以下原料：终浓度为0.1-2mol/L的生物缓冲剂、终浓度为10-500ng/μL的硅羧基磁珠、终浓度为1-20mol/L的氯化钠、体积分数为0.1-5％的分散剂和体积分数为10-50％的聚乙二醇，磁珠悬浮溶液的pH值为6-9。作为本专利技术实施例进一步的方案：分散剂采用吐温20，生物缓冲剂采用三羟甲基氨基甲烷，市场易购得，使用效果好。作为本专利技术实施例进一步的方案：聚乙二醇的相对分子量为1000-10000，可以将其他溶质充分溶解，使用效果好。所述磁珠悬浮溶液进行DNA纯化的使用方法，具体步骤如下：步骤一，将磁珠悬浮溶液从2-8℃冰箱中取出，室温下孵育25-35分钟；步骤二，将待纯化的核酸样本加入磁珠悬浮溶液中，然后混合均匀，在室温下孵育2-10分钟，静置直至液体澄清，分离得到上清液和沉淀；步骤三，将沉淀转移至新试管中并且用乙醇清洗2-3次，弃残液，晾干磁珠，勿干裂，然后洗脱DNA，室温静置2-6分钟，然后放置在磁力架上，得到的上清液即纯化后的DNA产物。作为本专利技术实施例进一步的方案：磁珠悬浮溶液在使用前采用涡旋混匀器混合均匀，便于得到纯化度高的DNA产物。作为本专利技术实施例进一步的方案：步骤三中乙醇的体积分数为80％。所述磁珠悬浮溶液进行DNA片段筛选的使用方法，具体步骤如下：步骤一，将磁珠悬浮溶液从2-8℃冰箱中取出，室温下孵育25-35分钟；步骤二，将待纯化的核酸样本加入磁珠悬浮溶液中，然后混合均匀，在室温下孵育2-10分钟，静置直至液体澄清，分离得到上清液和沉淀；步骤三，将沉淀转移至新试管中并且加入磁珠悬浮液，混匀并且在室温下孵育2-10分钟，静置直至澄清，将上清液转移至新试管中并且加入磁珠悬浮溶液，混匀并且在室温下孵育2-10分钟，再用乙醇清洗2-3次，弃残液，晾干磁珠，勿干裂，然后洗脱DNA，室温静置2-6分钟，然后放置在磁力架上，得到的上清液即纯化后的DNA产物。作为本专利技术实施例进一步的方案：步骤三中采用低盐溶液或无核酸酶水洗脱DNA。与现有技术相比，本专利技术实施例的有益效果是：本产品采用带有硅羧基的磁珠，价格低廉，市场占有率最高的XP磁珠，1ml价位在150-200元人民币，本产品批量生产下，价位可实现仅为XP磁珠价格的四分之一；本产品对比市场占有率最高的XP磁珠，相同纯化比例下，本产品的纯化回收率与其接近；相同纯化比例下，本产品的回收片段大小与其一致；本产品仅用到磁力架(16孔或96孔)，因此相较于其他传统方法，通量得到了显著提高；本产品操作简单，对仪器要求不高，操作时间短，应用前景广阔。附图说明图1为磁珠悬浮溶液与XP产品进行一轮纯化在0.5-1.2倍加入量时的结果对比图。图2为磁珠悬浮溶液与XP产品进行一轮纯化在1.8倍加入量时的结果对比图。图3为磁珠悬浮溶液与XP产品进行两轮纯化在不同加入量时的第一结果对比图。图4为磁珠悬浮溶液与XP产品进行两轮纯化在不同加入量时的第二结果对比图。图5为磁珠悬浮溶液与XP产品进行两轮纯化在不同加入量时的第三结果对比图。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。实施例1一种磁珠悬浮溶液，包括以下原料：终浓度为0.2mol/L的三羟甲基氨基甲烷、终浓度为80ng/μL的硅羧基磁珠、终浓度为10mol/L的氯化钠、体积分数为2.3％的分散剂和体积分数为30％的聚乙二醇，磁珠悬浮溶液的pH值为6-9。所述磁珠悬浮溶液进行DNA纯化的使用方法，具体步骤如下：1.将磁珠溶液从5℃冰箱中取出，室温下孵育30分钟。2.使用前请涡旋混匀。3.将待纯化的核酸样本加入至磁珠悬浮液中，按照样本，磁珠的体积比为表1进行纯化；表1样本11111磁珠0.5×0.8×1×1.2×1.8×4.加入后，涡旋混匀，在室温下孵育2-10分钟。5.静置于磁力架上至液体澄清，弃上清。6.使用体积分数为80％的乙醇清洗两次，弃残液。7.晾干磁珠，勿干裂，使用无核酸酶水洗脱DNA，室温静置3分钟。8.放置磁力架上，上清液即纯化后的DNA产物。所述磁珠悬浮溶液进行DNA片段筛选的使用方法，具体步骤如下：1.将磁珠溶液从4℃冰箱中取出，室温下孵育30分钟。使用前请涡旋混匀。2.将待纯化的核酸样本加入至磁珠悬浮液中，按照表2第一轮磁珠溶液的加入量和第二轮磁珠溶液的加入量进行操作；表2表2中×表示核酸样品的体积。若样本体积为50μL，以第一种为例，则第一轮磁珠溶液使用体积为0.8×50μL＝40μL；第二轮磁珠溶液使用体积为0.2×50μL＝10μL。3.第一轮加入后，涡旋混匀，在室温下孵育8分钟。4.静置于磁力架上至液体澄清，将上清转移至新管中，并加入第二轮所需的磁珠体积，涡旋混匀，在室温下孵育6分钟。5.使用乙醇清洗两次，弃残液。6.晾干磁珠，勿干裂。使用无核酸酶水洗脱DNA，室温静置4分钟。7.放置磁力架上，上清液即纯化后的DNA产物。将实施例1的产品与XP磁珠进行DNA纯化和片段筛选，对结果进行拍照，结果见图1-5，从图1-5中可以看出，本产品与XP磁珠的效果大致相当。本专利技术实施例的工作原理是：通过外表面有硅羧基官能基团的磁珠，在较高浓度的聚乙二醇和NaCl缓冲液中形成磁珠悬浮液。DNA样本加入至磁珠悬浮液中，其构象随之改变，带负电荷的磷酸基团大量暴露在外面，通过Na+与羧基形成“电桥”，使得DNA被特异吸附到带硅羧基的磁珠表面，因此，DNA样本在不同比例下的磁珠悬浮液中，可以被特异性并选择性的筛选出所需DNA片段。由于磁珠还具有超顺磁性，可将已结合DNA的磁珠在外加磁场作用下进行凝集，弃去上清，用乙醇清洗并晾干磁珠(勿干裂)，再用低盐溶液或无核酸酶水洗脱DNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种磁珠悬浮溶液，其特征在于，包括以下原料：终浓度为0.1‑2mol/L的生物缓冲剂、终浓度为10‑500ng/μL的硅羧基磁珠、终浓度为1‑20mol/L的氯化钠、体积分数为0.1‑5％的分散剂和体积分数为10‑50％的聚乙二醇，磁珠悬浮溶液的pH值为6‑9。

【技术特征摘要】
1.一种磁珠悬浮溶液，其特征在于，包括以下原料：终浓度为0.1-2mol/L的生物缓冲剂、终浓度为10-500ng/μL的硅羧基磁珠、终浓度为1-20mol/L的氯化钠、体积分数为0.1-5％的分散剂和体积分数为10-50％的聚乙二醇，磁珠悬浮溶液的pH值为6-9。2.根据权利要求1所述的磁珠悬浮溶液，其特征在于，所述分散剂采用吐温20，生物缓冲剂采用三羟甲基氨基甲烷。3.根据权利要求1或2所述的磁珠悬浮溶液，其特征在于，所述聚乙二醇的相对分子量为1000-10000。4.一种如权利要求1-3任一所述的磁珠悬浮溶液进行DNA纯化的使用方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤一，将磁珠悬浮溶液从2-8℃冰箱中取出，室温下孵育25-35分钟；步骤二，将待纯化的核酸样本加入磁珠悬浮溶液中，然后混合均匀，在室温下孵育2-10分钟，静置直至液体澄清，分离得到上清液和沉淀；步骤三，将沉淀转移至新试管中并且用乙醇清洗2-3次，弃残液，然后洗脱DNA，室温静置2-6分钟，然后放置在磁力架上，得到的上清液即纯化后的DNA产物。5.根据权利要求4...

【专利技术属性】
技术研发人员：包文静，金安娜，高伙妮，龚伟，
申请(专利权)人：上海睿璟生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31