一种乳腺组织RNA提取的方法技术

本发明专利技术提供了一种乳腺组织RNA提取的预处理方法，它是先制作乳腺组织冰冻切片材料，再通过HE染色鉴定切片材料中乳腺腺体组织，切取乳腺腺体组织。将前述乳腺腺体组织直接用于细胞裂解和RNA提取，即可获得高质量、高浓度的RNA。本发明专利技术能够解决由RNA提取的乳腺组织稀缺的而引起的RNA提取质量低的问题。

A Method for RNA Extraction from Breast Tissues

【技术实现步骤摘要】
一种乳腺组织RNA提取的方法
本专利技术涉及RNA提取纯化领域。
技术介绍
随着现代医学的发展，生物标志物逐渐成为疾病诊断和治疗的重要参考指标。在乳腺癌的检测中，需要提取和检测癌变的以及正常的乳腺腺体组织(而非脂肪和结缔组织)中的RNA。癌变乳腺腺体组织相对较容易获得，但正常的乳腺腺体组织则很稀缺。原因是：需要做保乳手术的乳腺癌患者，正常乳腺组织本就较少，不可能大量取样；而需要做全切乳腺及新辅助化疗全切乳腺的案例也不多见。用于RNA提取的正常乳腺腺体组织稀缺，人们使用常规RNA提取方法经常得到质量低、浓度低的RNA，有时甚至提取不到RNA。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种乳腺组织RNA提取预处理方法和RNA提取方法。本专利技术的技术方案包括：一种乳腺组织RNA提取的样本预处理方法，它是先制作乳腺组织冰冻切片，再通过HE染色鉴定冰冻切片中乳腺腺体组织，切取乳腺腺体组织。一种乳腺癌组织RNA提取方法，包括：1)用前述方法进行样本预处理；2)将切片材料置入细胞裂解液中；3)提取RNA。如前述的RNA提取方法，步骤2)的细胞裂解液是QIAGANRNeasyMiniKit的裂解液。如前述的RNA提取方法，步骤3)是使用QIAGANRNeasyMiniKit提取RNA。如前述的RNA提取方法，步骤3)最终使用体积为10～40微升的水或溶解缓冲液溶解RNA。如前述的RNA提取方法，步骤3)最终使用体积为30微升的水或溶解缓冲液溶解RNA。本专利技术具有如下有益效果：1)本专利技术的前处理方法包括制作乳腺组织的冷冻切片，可避免新鲜乳腺组织的反复冻融；2)本专利技术使用冷冻切片进行RNA提取，可以减少组织使用量，并能准确地确定组织使用量；3)本专利技术使用冷冻切片进行RNA提取，其组织用量少的同时，能避免堵塞试剂盒的洗脱柱，提高提取的RNA的质量；4)本专利技术使用冷冻切片直接用于RNA提取的裂解步骤，可以使组织充分裂解；5)本专利技术的前处理方法包括染色鉴定腺体组织，排除了大量的脂肪及结缔组织，可以保证提取到的RNA的浓度。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过具体实施方式对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。具体实施方式实施例1本专利技术的乳腺组织RNA提取方法1组织裂解前处理：冰冻切片机切片鉴定及切片取样1)从-80度冰箱取出乳腺组织(含有乳腺腺体组织、脂肪组织和结缔组织)样本；2)样本置于冰冻切片机中包埋，制作冷冻切片；3)切片鉴定：HE染色确定组织中乳腺细胞所处区域，切取带有乳腺腺体组织的切片区域。4)称量，确定单次提取所用组织量不大于30mg。2组织样本裂解和RNA提取将前述切片组织材料放入RNA提取用的细胞裂解液(QIAGANRNeasyMiniKit中的裂解液)中，移液器吹散。使用RNA提取试剂盒(QIAGANRNeasyMiniKit)提取RNA，最后溶解RNA用的水(或溶解缓冲液)的量可以按需求确定，通常10～40微升均可，本实施例用30微升。3检测RNA的含量和质量使用thermo公司的NANODROP2000检测RNA的含量和质量。对比例1乳腺组织RNA提取的效果对比1.方法取乳腺癌组织和正常乳腺组织的冰冻切片，乳腺癌组织随机分为A1组和A2组，正常乳腺组织随机分为B1组和B2组。A1组和B1组切片按照实施例1中的方法提取RNA并检测RNA的含量和质量；A2组和B2组切片不经过切片鉴定的步骤，随机切取不大于30mg的组织即采用实施例1步骤2～3的方法提取RNA并检测RNA的含量和质量。2.结果RNA溶液在280、260nm下的吸光度(A280和A260)分别代表了核酸、蛋白(或其它有机物)的含量。A260/A280是RNA质量的最主要评价指标。当A260/A280值大于2.2时，很可能RNA已经水解成为单核酸；当A260/A280小于1.8时，则蛋白(或其它有机物)的污染比较明显；纯净RNA溶液的A260/A280为2。由表1可知，本专利技术的方法所提取RNA的A260/A280接近纯净RNA溶液，质量可靠。另外，本专利技术的乳腺组织提取方法相比传统方法(未经切片鉴定)，能够提取出更多的RNA。表1RNA质量和浓度检测结果综上，本专利技术由于采取了切片染色鉴定的方法，精确切取乳腺腺体组织用于RNA提取，可以大大提高RNA的得率。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乳腺组织RNA提取的样本预处理方法，其特征在于，它是先制作乳腺组织冰冻切片，再通过HE染色鉴定冰冻切片中乳腺腺体组织，切取乳腺腺体组织。

【技术特征摘要】
1.一种乳腺组织RNA提取的样本预处理方法，其特征在于，它是先制作乳腺组织冰冻切片，再通过HE染色鉴定冰冻切片中乳腺腺体组织，切取乳腺腺体组织。2.一种乳腺癌组织RNA提取方法，其特征在于，包括：1)用权利要求1的方法进行样本预处理；2)将切片材料置入细胞裂解液中；3)提取RNA。3.如权利要求2所述的RNA提取方法，其特征在于，步骤2)的细胞裂解液是QIAGANRN...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈洁，王竹，贺涛，王艳萍，王宇，范园，胡靖睿，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川,51