人源化抗MUC1*抗体和切割酶的用途制造技术

本申请公开了人源化抗体和抗体样蛋白及其片段和切割酶的用途。

Uses of humanized anti-MUC1* antibodies and cleavage enzymes

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人源化抗MUC1*抗体和切割酶的用途
本申请涉及人源化和非人抗MUC1*抗体及其制备和使用方法。本申请还涉及使用用切割酶转染或转导的免疫细胞来治疗癌症。本专利技术还涉及使用用CAR和另一种蛋白转染或转导的免疫细胞来治疗癌症。
技术介绍
我们以前发现切割形式的MUC1(SEQIDNOS：1)跨膜蛋白是生长因子受体，其驱动超过75％的全部人类癌症的生长。切割形式的MUC1，我们称之为MUC1*(发音为muk1star)，是一种强大的生长因子受体。MUC1的大部分细胞外结构域的切割和释放揭示了用于激活配体二聚体NME1、NME6、NME7、NME7AB、NME7-X1或NME8的结合位点。它是癌症药物的理想靶标，因为它在超过75％的全部癌症中异常表达，并且可能在更高比例的转移性癌症中过表达(Mahantaetal.(2008)AMinimalFragmentofMUC1MediatesGrowthofCancerCells.PLoSONE3(4):e2054.doi:10.1371/journal.pone.0002054；Fessleretal.(2009),“MUC1*isadeterminantoftrastuzumab(Herceptin)resistanceinbreastcancercells,”BreastCancerResTreat.118(1):113-124)。在MUC1切割后，其大部分细胞外结构域从细胞表面脱落。剩余部分具有截短的细胞外结构域，包含称为PSMGFR(SEQIDNOS：2)的大部分或全部主要生长因子受体序列。抗体越来越多地用于治疗人类疾病。在非人物种中产生的抗体历来被用作人类的治疗剂，例如马抗体。最近，对抗体进行工程化或选择，使得它们主要含有人序列，以避免外来抗体的广泛排斥。将非人抗体识别片段工程为人抗体的过程通常称为“人源化”。用于替换人抗体序列的非人序列的量决定它们被称为嵌合的、人源化的还是全人的。存在能够产生人源化或全人抗体的替代技术。这些策略涉及筛选人抗体或抗体片段的文库并鉴定与靶抗原结合的那些，而不是用抗原免疫动物。另一种方法是将抗体的可变区设计到抗体样分子里面。另一种方法涉及免疫人源化动物。本专利技术还旨在包括这些用抗体识别片段的使用方法，专利技术人已确定这些片段与MUC1*的细胞外结构域结合。除了用抗体治疗患者之外，最近已经显示癌症免疫疗法在治疗血癌方面是有效的。一种称为CART(嵌合抗原受体T细胞)疗法的癌症免疫疗法，设计一种T细胞，使其表达具有识别肿瘤抗原的细胞外结构域的嵌合受体，以及T细胞的跨膜和胞质尾区(DaiH,WangY,LuX,HanW.(2016)ChimericAntigenReceptorsModifiedT-CellsforCancerTherapy.JNatlCancerInst.108(7):djv439)。这种受体由识别肿瘤抗原的单链抗体片段(scFv)组成，与T细胞跨膜和信号传导结构域连接。在受体与癌症相关抗原结合后，传递信号，导致T细胞激活、增殖和靶向杀死癌细胞。在实践中，将患者的T细胞分离并用CAR转导、扩增，然后注射回患者体内。当患者的CART细胞与癌细胞上的抗原结合时，CART细胞扩增并攻击癌细胞。该方法的缺点是，当大多数癌抗原在一些健康组织上表达但在癌组织上过表达时，激活患者的免疫系统而破坏携带靶抗原的细胞的风险。为了最小化肿瘤外/靶上作用的风险，癌抗原应该在健康组织上最低限度地表达。另一种癌症免疫疗法涉及BiTE(双特异性T细胞接合剂(Engagers))。BiTE方法试图消除CART相关的肿瘤外/靶上效应风险。与CART不同，BiTE是双特异性抗体，不应该比常规的基于抗体的疗法造成更大的风险。然而，与结合并阻断癌抗原的典型抗癌抗体不同，BiTE被设计成与肿瘤细胞上的抗原结合并同时与免疫细胞(例如T细胞)上的抗原结合。以这种方式，BiTE将T细胞募集到肿瘤中。BiTE是工程化蛋白，其同时结合癌相关抗原和T细胞表面蛋白，例如CD3ε。BiTE是通过将结合T细胞抗原的抗体的scFv(如抗CD3ε)与结合癌抗原的治疗性单克隆抗体的scFv遗传连接而制备的抗体(PatrickA.Baeuerle,andCarstenReinhardt(2009)BispecificT-cellengagingantibodiesforcancertherapy.CancerRes.69(12):4941-4944)。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术涉及结合MUC1同种型的细胞外结构域或缺乏串联重复结构域的切割产物的非人、人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白。非人、人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白可以特异性结合(i)MUC1的PSMGFR区域；(ii)PSMGFR肽；(iii)具有SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQIDNOS：620)的氨基酸序列的肽；(iv)具有SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQIDNOS：621)的氨基酸序列的肽；(v)具有VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY(SEQIDNOS：622)的氨基酸序列的肽；或(vi)具有SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN(SEQIDNOS：623)的氨基酸序列的肽。非人、人或人源化抗体可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM。人或人源化抗体片段或抗体样蛋白可以是scFv或scFv-Fc。如上所述的人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白可包含重链可变区和轻链可变区，重链可变区和轻链可变区衍生自小鼠单克隆MN-E6抗体，并且与小鼠单克隆MN-E6抗体具有至少80％、90％或95％或98％序列同一性。重链可变区可以与SEQIDNOS：13具有至少90％或95％或98％的序列同一性，并且轻链可变区可以与SEQIDNOS：66具有至少90％或95％或98％的序列同一性。根据上文的人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白可以包括重链可变区和轻链可变区中的互补决定区(CDR)，所述互补决定区与具有如下序列的CDR1、CDR2或CDR3区具有至少90％或95％或98％序列同一性：CDR1重链SEQIDNOS：17CDR1轻链SEQIDNOS：70，CDR2重链SEQIDNOS：21CDR2轻链SEQIDNOS：74，CDR3重链SEQIDNOS：25CDR3轻链SEQIDNOS：78。上述人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白可包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区和轻链可变区衍生自小鼠单克隆MN-C2抗体并且与小鼠单克隆MN-C2抗体具有至少80％、90％或95％或98％的序列同一性。重链可变区可以与SEQIDNOS：119具有至少90％或95％或98％的序列同一性，并且轻链可变区与SEQIDNOS：169具有至少90％或95％或98％的序列同一性。重链可变区和轻链可变区中的互补决定区(CDR)可以与具有如下序列的CDR1、CDR2或CDR3区具有至少90％或95％或98％的序列同一性：CDR1重链SEQIDNOS：123CDR1轻链SEQIDN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人或人源化抗MUC1

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.11 US 62/406,878;2017.02.20 US 62/461,170;1.人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其结合MUC1同种型的细胞外结构域或缺乏串联重复结构域的切割产物上的区域。2.根据权利要求1所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其特异性结合(i)MUC1的PSMGFR区域；(ii)PSMGFR肽；(iii)具有SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQIDNOS：620)的氨基酸序列的肽；(iv)具有SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQIDNOS：621)的氨基酸序列的肽；(v)具有VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY(SEQIDNOS：622)的氨基酸序列的肽；或(vi)具有SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN(SEQIDNOS：623)的氨基酸序列的肽。3.根据权利要求1所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM。4.根据权利要求1所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体片段或抗体样蛋白是scFv或scFv-Fc。5.根据权利要求1所述的人源或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白，其包含衍生自小鼠单克隆MN-E6抗体的重链可变区和轻链可变区，并且与小鼠单克隆MN-E6抗体具有至少80％、90％或95％或98％的序列同一性。6.根据权利要求5所述的人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白，其中重链可变区与SEQIDNOS：13具有至少90％或95％或98％的序列同一性，轻链可变区与SEQIDNOS：66具有至少90％或95％或98％的序列同一性。7.根据权利要求5所述的人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白，其包含重链可变区和轻链可变区中的互补决定区(CDR)，与具有如下序列的CDR1、CDR2或CDR3区域具有至少90％或95％或98％的序列同一性：CDR1重链SEQIDNOS：17CDR1轻链SEQIDNOS：70，CDR2重链SEQIDNOS：21CDR2轻链SEQIDNOS：74，CDR3重链SEQIDNOS：25CDR3轻链SEQIDNOS：78。8.根据权利要求5所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM。9.根据权利要求5所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体片段或抗体样蛋白是scFv或scFv-Fc。10.根据权利要求1所述的人源或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白，其包含衍生自小鼠单克隆MN-C2抗体的重链可变区和轻链可变区，并且与小鼠单克隆MN-C2抗体具有至少80％、90％或95％或98％的序列同一性。11.根据权利要求10所述的人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白，其中重链可变区与SEQIDNOS：119具有至少90％或95％或98％的序列同一性，轻链可变区与SEQIDNOS：169具有至少90％或95％或98％的序列同一性。12.根据权利要求10所述的抗体，其包含重链可变区和轻链可变区中的互补决定区(CDR)，与具有如下序列的CDR1、CDR2或CDR3区域具有至少90％或95％或98％的序列同一性：CDR1重链SEQIDNOS：123CDR1轻链SEQIDNOS：173，CDR2重链SEQIDNOS：127CDR2轻链SEQIDNOS：177，CDR3重链SEQIDNOS：131CDR3轻链SEQIDNOS：181。13.根据权利要求10所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM。14.根据权利要求10所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体片段或抗体样蛋白是scFv或scFv-Fc。15.根据权利要求1所述的人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白，其包含衍生自小鼠单克隆MN-C3抗体的重链可变区和轻链可变区，并且与小鼠单克隆MN-C3抗体具有至少80％、90％或95％或98％的序列同一性。16.根据权利要求15所述的人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白，其中重链可变区与SEQIDNOS：414具有至少90％或95％或98％的序列同一性，并且轻链可变区与SEQIDNOS：459具有至少90％或95％或98％的序列同一性。17.根据权利要求15所述的抗体，其包含重链可变区和轻链可变区中的互补决定区(CDR)，与具有如下序列的CDR1、CDR2或CDR3区域具有至少90％或95％或98％的序列同一性：CDR1重链SEQIDNOS：418CDR1轻链SEQIDNOS：463，CDR2重链SEQIDNOS：422CDR2轻链SEQIDNOS：467，CDR3重链SEQIDNOS：426，CDR3轻链SEQIDNOS：471。18.根据权利要求15所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM。19.根据权利要求15所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体片段或抗体样蛋白是scFv或scFv-Fc。20.根据权利要求1所述的人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白，其包含衍生自小鼠单克隆MN-C8抗体的重链可变区和轻链可变区，并且与小鼠单克隆MN-C8抗体具有至少80％、90％或95％或98％的序列同一性。21.根据权利要求20所述的人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白，其中重链可变区与SEQIDNOS：506具有至少90％或95％或98％的序列同一性，轻链可变区与SEQIDNOS：544具有至少90％或95％或98％的序列同一性。22.根据权利要求20所述的抗体，其包含重链可变区和轻链可变区中的互补决定区(CDR)，与具有如下序列的CDR1、CDR2或CDR3区域具有至少90％或95％或98％的序列同一性：CDR1重链SEQIDNOS：508CDR1轻链SEQIDNOS：546，CDR2重链SEQIDNOS：510CDR2轻链SEQIDNOS：548，CDR3重链SEQIDNOS：512，CDR3轻链SEQIDNOS：550。23.根据权利要求20所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM。24.根据权利要求20所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体片段或抗体样蛋白是scFv或scFv-Fc。25.一种抗MUC1*细胞外结构域抗体，其包括与人源化κ轻链或人源化λ轻链配对的人源化IgG2重链或人源化IgG1重链所代表的人源化MN-E6的序列。26.根据权利要求25所述的抗体，其中人源化IgG2重链是SEQIDNOS：53，人源化IgG1重链是SEQIDNOS：57，人源化κ轻链是SEQIDNOS：108，并且人源化λ轻链是SEQIDNOS：112，或具有其90％、95％或98％序列同一性的序列。27.一种抗MUC1*细胞外结构域抗体，其包括与人源化λ轻链和人源化κ轻链配对的人源化IgG1重链、人源化IgG2重链代表的人源化MN-C2的序列。28.根据权利要求27所述的抗体，其中所述人源化IgG1重链MN-C2(SEQIDNOS：159)或IgG2重链(SEQIDNOS：164)与λ轻链(SEQIDNOS：219)或κ轻链(SEQIDNOS：213)、或具有其90％、95％或98％的序列同一性的序列配对。29.一种抗MUC1*细胞外结构域抗体，其包含与人源化λ轻链或人源化κ轻链配对的人源化IgG1重链或人源化IgG2重链所代表的人源化MN-C3的序列。30.根据权利要求29所述的抗体，其中所述人源化MN-C3IgG1重链是SEQIDNOS：454，IgG2重链是SEQIDNOS：456，λ轻链是SEQIDNOS：501，并且κ轻链是SEQIDNOS：503，或具有其90％、95％或98％的序列同一性的序列。31.一种抗MUC1*细胞外结构域抗体，其包括与人源化λ轻链或人源化κ轻链配对的人源化IgG1重链或人源化IgG2重链所代表的人源化MN-C8的序列。32.根据权利要求31所述的抗体，其中所述人源化MN-C8IgG1重链是SEQIDNOS：540，IgG2重链是SEQIDNOS：542，λ轻链是SEQIDNOS：580，并且κ轻链是SEQIDNOS：582，或具有其90％、95％或98％的序列同一性的序列。33.根据权利要求1所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其抑制NME蛋白与MUC1*的结合。34.根据权利要求33所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中NME是NME7或NME1。35.根据权利要求33所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中NME是NME6或NME8。36.根据权利要求33所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM。37.根据权利要求33所述的人或人源化抗MUC1*抗体或抗体片段或抗体样蛋白，其中人或人源化抗体片段或抗体样蛋白是scFv或scFv-Fc。38.一种单链可变片段(scFv)，其包含通过接头连接的重链和轻链可变区，还包含与MUC1*细胞外结构域结合的抗体的CDR。39.根据权利要求38所述的scFv，其中抗MUC1*抗体的CDR衍生自MN-E6、MN-C2、MN-C3或MN-C8抗体。40.根据权利要求39所述的scFv，其中所述抗MUC1*抗体的CDR衍生自人源化MN-E6、MN-C2、MN-C3或MN-C8抗体。41.根据权利要求38所述的scFv，其选自SEQIDNOS：233、235和237(E6)的组。42.根据权利要求38所述的scFv，其选自SEQIDNOS：239、241和243(C2)的组。43.根据权利要求38所述的scFv，其选自SEQIDNOS：245、247和249(C3)的组。44.根据权利要求38所述的scFv，其选自SEQIDNOS：251、253和255(C8)的组。45.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含结合缺乏串联重复的MUC1的细胞外结构域的scFv或人源化可变区抗体片段、接头分子、跨膜结构域和细胞质结构域。46.根据权利要求45所述的CAR，其中所述单链抗体片段结合(包含来自？的至少12个连续氨基酸的肽)：(i)MUC1的PSMGFR区域，(ii)PSMGFR肽，(iii)具有氨基酸序列SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQIDNOS：620)的肽；(v)具有SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQIDNOS：621)的氨基酸序列的肽；(v)具有VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY(SEQIDNOS：622)的氨基酸序列的肽；或(vi)具有SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN(SEQIDNOS：623)的氨基酸序列的肽。47.根据权利要求46所述的CAR，其包含在细胞外结构域中的权利要求25至32中所述的任何可变区的部分或其组合、跨膜区和包含信令免疫系统激活的序列基序的胞质尾区。48.根据权利要求45所述的CAR，其中细胞外结构域包括MN-E6scFv、MN-C2scFv、MN-C3scFv或MN-C8scFv的人源化单链抗体片段。49.根据权利要求48所述的CAR，其中细胞外结构域包括MN-E6scFv，如SEQIDNOS：233,235或237所示)、MN-C2scFv(SEQIDNOS：SEQIDNOS：239、241或243)、MN-C3scFv(SEQIDNOS：245、247或249)或MN-C8scFv(SEQIDNOS：251、253或255)的人源化单链抗体片段。50.根据权利要求45所述的CAR，其中所述胞质尾区包括信号传导序列基序CD3-ζ、CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、ICAm-1、LFA-1、ICOS、CD2、CD5或CD7中的一种或多种。51.根据权利要求45所述的CAR，其中其序列是CARMN-E6CD3z(SEQIDNOS：295)、CARMN-E6CD28/CD3z(SEQIDNOS：298)、CARMN-E64-1BB/CD3z(SEQIDNOS：301)、CARMN-E6OX40/CD3z(SEQIDNOS：617)、CARMN-E6CD28/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：304)、CARMN-E6CD28/OX40/CD3z(SEQIDNOS：619)、CAR-MN-E6Fc/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：311)、CAR-MN-E6IgD/Fc/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：771)、CAR-MN-E6FcH/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：316)、CAR-MN-E6IgD/FcH/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：773)、CAR-MN-E6IgD/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：324)、CAR-MN-E6X4/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：331)、CARMN-C2CD3z(SEQIDNOS：607)、CARMN-C2CD28/CD3z(SEQIDNOS：609)、CARMN-C24-1BB/CD3z(SEQIDNOS：611)、CARMN-C2OX40/CD3z(SEQIDNOS：613)、CARMN-C2CD28/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：307)、CARMN-C2CD28/OX40/CD3z(SEQIDNOS：615)、CAR44huMNC2-CD8-4-1BB-CD3z(SEQIDNOS：719)、CAR-MN-C2Fc/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：NOS：733)、CAR-MN-C2IgD/Fc/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：735)、CAR-MN-C2FcH/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：737)、CAR-MN-C2IgD/FcH/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：739)、CAR-MN-C2IgD/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：741)、CAR-MN-C2X4/4-1BB/CD3z(SEQIDNOS：743)。52.一种细胞，其包含具有细胞外结构域的CAR，所述细胞外结构域结合MUC1*转染或转导细胞。53.根据权利要求52所述的细胞，其中包含CAR的细胞是免疫系统细胞。54.根据权利要求53所述的细胞，其中包含CAR的免疫系统细胞是T细胞或NK细胞。55.根据权利要求53所述的细胞，其中包含CAR的免疫系统细胞是树突细胞。56.根据权利要求53所述的细胞，其中包含CAR的免疫系统细胞是肥大细胞。57.一种CAR分子，其中细胞外结构域单元识别肽。58.根据权利要求57所述的CAR分子，其中所述肽是PSMGFR(SEQIDNOS：2)。59.根据权利要求57所述的CAR分子，其中所述肽是衍生自NME7的肽。60.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·巴姆达德，B·斯马格，L·迪尔利，
申请(专利权)人：米纳瓦生物技术公司，
类型：发明
国别省市：美国,US