人源化抗MUCl*抗体制造技术

本申请公开了人源化抗体和抗体样蛋白以及它们的片段。及它们的片段。

【技术实现步骤摘要】
人源化抗MUCl*抗体
[0001]本申请是申请日为2016年02月10日、申请号为201680021263.8、专利技术名称为“人源化抗MUCl*抗体”的中国专利申请(其对应PCT申请的申请日为2016年02月10日、申请号为PCT/US2016/017422)的分案申请。


[0002]本申请涉及人源化抗MUCl*抗体以及制备和使用它们的方法。

技术介绍

[0003]我们以前发现，MUC1(SEQ ID NO:l)跨膜蛋白的切割形式是生长因子受体，其驱动超过75％的所有人癌症的生长。MUC1的切割形式，我们称其为MUCl*(发音为muk 1星)，是强大的生长因子受体。MUC1的胞外结构域的大部分的切割和释放会暴露用于激活配体二聚体NME1、NME6或NME7的结合位点。它是癌症药物的理想的靶，因为它异常表达于超过75％的所有癌症并且可能过度表达于甚至更高百分比的转移性癌症(Fessler SP,Wotkowicz MT,Mahanta SK and Bamdad C.(2009)。在乳腺癌细胞中，MUCl*是曲妥单抗(赫赛汀)抗性的决定子。胸腺癌研究和治疗(Breast Cancer Res Treat.)118(1):113
‑
124)。在MUC1切割以后，大部分的其胞外结构域从细胞表面脱落。剩余部分具有截短的胞外结构域，其至少包含主要生长因子受体序列PSMGFR(SEQ ID NO:2)。
[0004]抗体越来越多地用来治疗人疾病。在非人物种中产生的抗体历来被用作在人类中的治疗剂，如马抗体。最近，设计或选择抗体以致它们主要包含人序列以避免外来抗体的全身性排斥。将非人抗体的识别片段工程化为人抗体的过程一般叫做
‘
人源化
’
。用来代替人抗体序列的非人序列的量决定了它们称为嵌合、人源化或全人。
[0005]存在替代技术，其使得能够生成人源化或全人抗体。这些策略涉及筛选人抗体或抗体片段的库以及识别结合于靶抗原的那些，而不是用抗原来免疫动物。另一种方法是将抗体的可变区工程化为抗体样分子。本专利技术意在还包括这些方法，其用于本专利技术人已经确定的结合于MUC1*的胞外结构域的抗体的识别片段。
[0006]除用抗体来治疗患者之外，最近已经显示，癌症免疫疗法可有效地治疗癌症。基于T细胞的癌症免疫治疗是用来克服癌细胞从免疫系统逃避的有吸引力的方式。第一免疫治疗，称为CAR T(嵌合抗原受体T细胞)疗法依赖于在患者T细胞的表面上CAR的表达，用于过继T细胞疗法(Dai H,Wang Y,Lu X,Han W.(2016)Chimeric Antigen Receptors Modified T
‑
Cells for Cancer Therapy.J Natl Cancer Inst.108(7):djv439)。这种受体由连接于T细胞跨膜和信令结构域(signaling domain)的抗癌scFv组成。在受体与癌症相关抗原的结合以后，信号被发送，导致T细胞激活、增殖以及癌细胞的靶向杀伤。在实践中，患者的T细胞被分离并利用CAR转导、扩增、然后被注射回患者。当患者的CAR T细胞结合于在癌细胞上的抗原时，CAR T细胞扩增和攻击癌细胞。这种方法的缺点是以下风险：当大多数癌症抗原表达在一些健康组织上但过度表达在癌组织上时，会激活患者的免疫系统来破坏携带靶抗原的细胞。为了最小化摆脱肿瘤(off
‑
tumor)/靶向效应的风险，癌症抗原应最低表达在健
康组织上。
[0007]第二癌症免疫治疗涉及BiTE(双特异性T细胞衔接物)。BiTE方法试图消除摆脱肿瘤/靶向效应的CAR T相关风险。不同于CAR T，BiTE是双特异性抗体，其应该不会造成任何比基于常规抗体的治疗更大的风险。然而，不像典型的抗癌抗体，其结合于并阻止癌症抗原，BiTE被设计为结合于在肿瘤细胞上的抗原并同时结合于在免疫细胞如T细胞上的抗原。以这种方式，BiTE募集T细胞到肿瘤。BiTE是工程化蛋白，其同时结合于癌症相关抗原和T细胞表面蛋白如CD3
‑
ε。BiTE是通过基因连接结合于T细胞抗原如抗CD3
‑
ε抗体的scFv至结合于癌症抗原的治疗性单克隆抗体的scFv制备的抗体(Patrick A.Baeuerle,and Carsten Reinhardt(2009)Bispecific T
‑
cell engaging antibodies for cancer therapy.Cancer Res.69(12):4941
‑
4944)。

技术实现思路

[0008]在一方面，本专利技术涉及人或人源化抗MUCl*抗体或抗体片段或抗体样蛋白(antibody
‑
like protein)，其结合于在没有串联重复结构域的MUCl同种型或切割产物(cleavage product)的胞外结构域上的区。人或人源化抗MUCl*抗体或抗体片段或抗体样蛋白可以特异性地结合于
[0009](i)MUC1的PSMGFR区；
[0010](ii)PSMGFR肽；
[0011](iii)具有SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQ YKTEAASRY(SEQ ID NO:620)的氨基酸序列的肽；
[0012](iv)具有SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ ID NO:621)的氨基酸序列的肽；
[0013](v)具有VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY(SEQ ID NO:622)的氨基酸序列的肽；或
[0014](vi)具有SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN(SEQ ID NO:623)的氨基酸序列的肽。
[0015]人或人源化抗体可以是IgGl、IgG2、IgG3、IgG4或IgM。人或人源化抗体片段或抗体样蛋白可以是scFv或scFv
‑
Fc。
[0016]如上所述的人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白可以包含重链可变区和轻链可变区，其源自小鼠单克隆MN
‑
E6抗体，并且与小鼠单克隆MN
‑
E6抗体具有至少80％、90％或95％或98％的序列同一性。重链可变区与SEQ ID NO:13可以具有至少90％或95％或98％的序列同一性并且轻链可变区与SEQ ID NO:66可以具有至少90％或95％或98％的序列同一性。
[0017]根据上述的人或人源化抗体、抗体片段或抗体样蛋白可以包括在重链可变区和轻链可变区中的互补决定区(CDR)，其与具有如下序列的CDR1、CDR2或CDR3区具有至少90％或95％或98％的序列同一性：
[0018]CDR1重链SEQ ID NO:17
[0019]CDR1轻链SEQ ID NO:70，
[0020]CDR2重链SE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.嵌合抗原受体，其包含：(a)抗MUC1*抗体片段，其中所述抗MUC1*抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区中具有如下互补决定区(CDR)：CDR1重链SEQ ID NO:123，CDR1轻链SEQ ID NO:173，CDR2重链SEQ ID NO:127，CDR2轻链SEQ ID NO:177，CDR3重链SEQ ID NO:131，CDR3轻链SEQ ID NO:181；以及(b)T细胞受体共刺激域。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:145具有至少90％序列同一性的氨基酸序列并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:195具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:145具有至少95％序列同一性的氨基酸序列并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:195具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:145具有至少98％序列同一性的氨基酸序列并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:195具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:145的氨基酸序列并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:195的氨基酸序列。6.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述重链可变区和轻链可变区通过接头连接。7.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述接头包含SEQ ID NO：402的氨基酸序列。8.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述抗MUC1*抗体片段包含单链可变片段(scFv)。9.根据权利要求8所述的嵌合抗原受体，其中所述scFv包含与SEQ IDNO：239、241、243或398中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。10.根据权利要求8所述的嵌合抗原受体，其中所述scFv包含与SEQ IDNO：239、241、243或398中的任一个具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。11.根据权利要求8所述的嵌合抗原受体，其中所述scFv包含与SEQ IDNO：239、241、243或398中的任一个具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。12.根据权利要求8所述的嵌合抗原受体，其中所述scFv包含SEQ IDNO：239、241、243或398中任一个的氨基酸序列。13.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述T细胞受体共刺激域包含CD3
‑
zeta、CD27、CD28、4
‑
1BB、OX40、CD30、CD40、PD
‑
1、ICAM
‑
1、LFA
‑
1、ICOS、CD2、CD5、CD7或Fc受体γ域。14.根据权利要求13所述的嵌合抗原受体，其中所述T细胞受体共刺激域包含CD3
‑
zeta
的细胞质结构域。15.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述T细胞受体共刺激域包含CD27、CD28、4
‑
1BB、OX40、CD30、CD40、PD
‑
1、ICAM
‑
1、LFA
‑
1、ICOS、CD2、CD5、CD7或Fc受体γ域。16.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述T细胞受体共刺激域包含CD3
‑
zeta和4
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1BB的细胞质结构...

【专利技术属性】
技术研发人员：辛西娅，
申请(专利权)人：米纳瓦生物技术公司，
类型：发明
国别省市：