壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法技术

本发明专利技术属于中药材指纹图谱领域，具体涉及一种壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法。所述壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法，以白花九里明主要成分咖啡酸为参照物，据此获得壮药白花九里明共有模式指纹图谱。指纹图谱共有色谱峰10个，能够充分反应白花九里明药材中化学成分，信息量较丰富，方法重现性良好，对控制药材质量和鉴别药材优劣提供了更有力的理论依据，提高了壮药白花九里明的质量控制和真伪鉴别水平，实现了快速，准确地鉴别白花九里明的真伪优劣。

Establishment of HPLC Fingerprint of Baihua Jiuliming

【技术实现步骤摘要】
壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法
本专利技术涉及中药材指纹图谱领域，具体涉及一种壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法。
技术介绍
白花九里明为菊科艾纳香属植物Blumeamegacephala(Randeria)ChangetTseng的地上部分，产于云南、四川、贵州、广西、广东、湖南南部、江西南部、福建及台湾等省区。白花九里明在广西壮族民间常用水煎服治疗产后流血过多。中药指纹图谱(fingerprinting)是借用DNA指纹图谱发展而来。最先发展起来的是中药化学成分色谱指纹图谱，特别是高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。HPLC具有很高的分离度，可把复杂的化学成分进行分离而形成高低不同的峰组成一张色谱图，这些色谱峰的高度和峰面积分别代表了各种不同化学成分和其含量。中药指纹图谱的研究和建立，对于提高中药质量，促进中药现代化具有重要意义。目前壮药白花九里明主要进行了性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别和含量测定等，这些方法存在信息量小、样品化学成分体现不全面、鉴别成分数量不足等问题，因此无法表现壮药白花九里明整体质量。如宁小清等(宁小清,卢汝梅,黄丽贞等.壮药白花九里明化学成分研究[J].中药材,2016,39(11):2536-2538.)对白花九里明有效成分进行研究，对儿茶酸、绿原酸和咖啡酸含量进行了测定。其仅以其中几种成分的含量为指标确定药材的质量优劣。然而，壮药(中药)具有复杂的化学成分，有效成分多，未知成分多，不同成分或功效之间相互影响，任何一种活性成分都无法全面的反映该药的总体质量与疗效，所以很难仅依靠一种或几种成分来评价中药的有效性和专属性。美国食品与药品管理局(FDA)在有关植物药物质和植物药产品部分，已将指纹图谱引入质量控制中；世界卫生组织(WHO)在其草药评价指南中指出，不能鉴别的植物药质谱和最终产品的有效成分，可采用色谱指纹图谱鉴别特征成分或混合成分，保证产品质量的一致性。目前国内外对壮药白花九里明指纹图谱的研究尚未见任何报道，本专利技术对壮药白花九里进行高效液相指纹图谱研究，弥补了白花九里明质量标准项下的空白，为白花九里明药材的质量评价提供了依据，并为更加科学、合理、规范地使用白花九里明，提高其临床用药的安全性提供了参考。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法。所述方法能够为白花九里明的鉴别和质量控制提供可靠依据。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品，加甲醇溶解制成对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：精密称取壮药白花九里明药材粗粉，加水，超声提取，放冷至室温，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(3)高效液相色谱测定：分别精密吸取步骤(1)的对照品溶液与步骤(2)的供试品溶液各10-20μl注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，以咖啡酸色谱峰为参照峰，通过分析比较确定特征共有峰，即得所述白花九里明HPLC指纹图谱；其中，色谱条件为：以C18烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以磷酸溶液为流动相B组成的梯度洗脱液进行梯度洗脱；检测波长为300-350nm。进一步地，所述步骤(1)按以下操作进行：取咖啡酸对照品，加甲醇溶解制成每1ml含咖啡酸20μg的对照品溶液。进一步地，所述步骤(2)按以下操作进行：精密称取白花九里明药材粗粉1g，加水20-40ml，密塞，称定重量，超声提取20-40min，放冷至室温，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。优选地，所述步骤(2)按以下操作进行：精密称取白花九里明药材粗粉1g，加水20ml，密塞，称定重量，超声提取30min，放冷至室温，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。进一步地，所述步骤(3)的色谱条件为：以C18烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B组成的梯度洗脱液进行梯度洗脱；柱温为25℃；检测波长为300-350nm；流速为1.0ml/min；分析时间为60min，进样量为10-20μl。进一步地，采用以下梯度洗脱方式洗脱：表1梯度洗脱程序表本专利技术建立白花九里明药材指纹图谱，由10个共有指纹峰构成，所述指纹图谱10个共有指纹峰的相对保留时间及标准偏差如下表2。表2指纹图谱10个共有指纹峰的保留时间及相对标准偏差为提高白花九里明药材质量控制水平，专利技术人采用高效液相色谱，以白花九里明中主要有效成分咖啡酸为参照物，研发白花九里明HPLC指纹图谱建立方法，据此得到壮药白花九里明共有模式的指纹图谱，指纹图谱共有色谱峰10个，能充分反应白花九里明药材共有模式指纹图谱，指纹图谱共有色谱峰10个，能充分反应白花九里明中化学成分，信息丰富，方法重现性良好，对控制药材质量和鉴别药材优劣提供理论依据。综上所述，由于采用了上述技术方案，本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术白花九里明药材指纹图谱方法对供试品处理方法简单，特征性成分保留完整，供试品溶液稳定。(2)本专利技术高效液相色谱法精密度较高，重现性良好，专属性强。(3)本专利技术建立标准指纹图谱有10个共有峰，信息量较大，较完整保留供试液中化学成分。(4)经过相似度评价，所选择的广西不同县市白花九里明指纹图谱相似度都大于0.90，具有良好的相关性。(5)本专利技术确立白花九里明药材指纹图谱方法，通过该方法可获得白花九里明药材标准指纹图谱，比较共有峰有无，能有效控制白花九里明质量，完善白花九里明药材质量评价体系，为白花九里明药材质量全面、有效控制提供理论和时间基础。【附图说明】图1为对照品溶液的HPLC指纹图谱，图中：6为咖啡酸；图2为白花九里明药材的HPLC指纹图谱；图3为各批壮药白花九里明药材HPLC指纹图谱整合叠加图；图4为白花九里明供试品HPLC指纹图谱精密度考察叠加图；图5为白花九里明供试品HPLC指纹图谱稳定性考察叠加图；图6为白花九里明供试品HPLC指纹图谱重复性考察叠加图。【具体实施方式】专利技术人将13批不同来源白花九里明药材在同指纹图谱条件下分别建立指纹图谱，然后将指纹图谱融合，确定共用指纹特征图，增加指纹图谱信息量，从而提高指纹鉴定能力，实现指纹图谱全面整体评价。下面通过具体实施例对本专利技术作进一步说明，这些实施例仅用于说明本专利技术，并不限制本专利技术范围。实施例11实验材料和仪器1.1药材：产地及采收时间如表3。表3白花九里明药材产地及采收时间药材编号药材来源(产地)采收时间1蒙山2014.112南宁高峰2014.113巴马2014.114南宁高峰2014.035天等2015.116巴马2015.117北流2015.118那坡2013.069崇左2013.1110南宁老虎岭2015.1111北流2016.1012防城2015.1113陆川2016.101.2仪器：Agilent1260高效液相色谱仪(包括G1311C四元泵,G1329B自动进样器，G1316A柱温箱，G1315DDAD检测器，Agilengt1260色谱工作站(美国安捷伦科技公司))；中型超声波清洗器(ElmaSchmidbauerGmbH，P300H)；电子天平(赛多利斯科本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品，加甲醇溶解制成对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：精密称取壮药白花九里明药材粗粉，加水，超声提取，放冷至室温，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(3)高效液相色谱测定：分别精密吸取步骤(1)的对照品溶液与步骤(2)的供试品溶液各10‑20μl注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，以咖啡酸色谱峰为参照峰，通过分析比较确定特征共有峰，即得所述白花九里明HPLC指纹图谱；其中，色谱条件为：以C18烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以磷酸溶液为流动相B组成的梯度洗脱液进行梯度洗脱；检测波长为300‑350nm。

【技术特征摘要】
1.壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品，加甲醇溶解制成对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：精密称取壮药白花九里明药材粗粉，加水，超声提取，放冷至室温，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(3)高效液相色谱测定：分别精密吸取步骤(1)的对照品溶液与步骤(2)的供试品溶液各10-20μl注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，以咖啡酸色谱峰为参照峰，通过分析比较确定特征共有峰，即得所述白花九里明HPLC指纹图谱；其中，色谱条件为：以C18烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以磷酸溶液为流动相B组成的梯度洗脱液进行梯度洗脱；检测波长为300-350nm。2.根据权利要求1所述的壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(1)按以下操作进行：取咖啡酸对照品，加甲醇溶解制成每1ml含咖啡酸20μg的对照品溶液。3.根据权利要求1所述的壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(2)按以下操作进行：精密称取白花九里明药材粗粉1g，加水20-40ml，密塞，称定重量，超声提取20-40min，放冷至室温，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。4.根据权利要求1所述的壮药白花九里明HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(2)按以下操作进行：精...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁小清，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：广西,45