【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物化学，具体涉及一种十五元环缩肽类化合物及其制备方法与应用。
技术介绍
1、链霉菌是世界药物研发新型先导化合物的重要资源宝库，能产生支架多样、结构复杂的新颖代谢产物。新抗霉素(neoantimycin，nat)是由链霉菌产生的一种缩酚肽类天然产物，其结构特征表现为：其母核骨架是十五元环的内酯，四个酯(肽)基上分别连接着一个3-n-甲酰氨基水杨酸基团、两个烷基和一个苄基侧链。已报道的新抗霉素类似物的结构差别主要集中在于分子母环c1位的羟基化或酮基化修饰、酯(肽)基c4/c9位上烷基侧链的长短、水杨酸酰基上的氨基是否被n-甲酰化修饰或者被羟基取代(lin,x.；et al.applyingmolecular networking fortargeted isolation of depsipeptides.rsc adv.2021,11(5),2774-2782；lin,x.；et al.compound discovery and structure-activityrelationship study of neoantimycins against drug-resistant cancercells.front.chem.2019,7,481.)。新抗霉素类化合物普遍具有重要的药用活性，如sw-163a和sw-163b具有免疫抑制和抗真菌活性(takahashi,k.；et al.sw-163a and b,novelimimmosuppressants produced by streptomyces sp
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供了一种十五元环缩肽类化合物及其制备方法与应用。
2、第一目的在于公开八种由链霉菌s.conglobatusatcc 31005发酵产生的新结构新抗霉素衍生物unantimycin f1～j(uat-f1～j)。新抗霉素分子结构中c-6位普遍含有3-n-甲酰氨基水杨酸基团，而本专利技术涉及的的十五元环缩肽类化合物其特征在于，c-6位由非3-n-甲酰氨基水杨酸基团取代，其结构式如下：
3、
4、本专利技术的第二目的在于还提供如上所述新型十五元环缩肽类化合物的制备方法。本专利技术所述的新型十五元环缩肽类化合物可由链霉菌s.conglobatus发酵得到或者通过化学合成获得。
5、1)若由链霉菌s.conglobatus发酵制备，较佳的，所用的链霉菌s.conglobatus优选市售菌株atcc 31005。
6、较佳的，发酵制备包括以下步骤：
7、a)投喂前体化合物a～d的制备：所述的前体化合物a～d可由以下路线制备：
8、
9、上述制备路线中各中间体的具体制备和分离过程可参考现有文献(kusebauch,bjoern et al chembiochem,12(15),2284-2288；2011)相同或相似结构化合物的制备和纯化过程，本专利技术中不再赘述。
10、b)菌株发酵及前体投喂：将链霉菌s.conglobatus接种在固体培养基上，27～32℃培养4～6天后收集孢子；取孢子接种至一级液体培养基，27～32℃摇瓶培养3～4天得种子液；取种子液接种至二级液体培养基，27～32℃摇瓶培养3～4天得二级种子液；取二级种子液接种至发酵培养基，27～32℃摇瓶培养2天后按1.0mmol/l的浓度投喂化合物a～d，继续摇瓶培养3～4天后收集发酵液；从发酵液中提取分离本专利技术所述的新型十五元环缩肽类化合物1～8。
11、较佳的，所述固体培养基含有1.5～2.5％大豆粉，1.5～2.5％d-甘露醇，1.5～2.5％琼脂。所述一级液体培养基含有2～4％胰酶大豆肉汤，9～11％蔗糖，0.4～0.6％酵母提取物。所述二级液体培养基含有2～4％大豆粉，4～6％葡萄糖，0.4～0.6％caco3，4～6mg/l cocl2·6h2o，0.15～0.25％(v/v)消泡剂。所述发酵培养基含有2～4％大豆粉，4～6％葡萄糖，0.4～0.6％caco3，0.15～0.25％(v/v)消泡剂。
12、c)化合物提取、分离、纯化
13、所述色谱分离包括两次减压硅胶柱色谱分离、一次反相中压ods柱色谱分离和高效液相色谱法分离。
14、较佳的，从发酵液中提取含十五元环缩肽类化合物的步骤包括：向发酵液中加入0.1～0.2％(v/v)的甲酸，然后用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物经30～45℃减压浓缩后得浸膏：用甲醇重溶浸膏，过滤去渣后用正己烷萃取，去除正己烷层；甲醇溶液经浓缩后，通过柱色谱分离得到化合物uat-f1～j。
15、进一步的，柱色谱分离包括：经正向硅胶柱分离，洗脱溶剂为二氯甲烷/甲醇，洗脱溶剂配比梯度为50/1(v/v)；经正向硅胶柱分离，洗脱溶剂为石油醚/乙酸乙酯，洗脱溶剂配比梯度为5/1至0/1(v/v)，具体指先采用石油醚-乙酸乙酯(5/1，v/v)洗脱，随后逐渐增加溶剂极性，逐步增加乙酸乙酯含量；取目标馏分经ods柱分离，洗脱溶剂梯度为30％-100％乙腈；具体指先采用含30％的乙腈水溶液洗脱，随后逐渐减小溶剂极性，乙腈含量梯度增加至100％。
16、取目标馏分用制备型hplc进行最终分离；
17、uat-f1,uat-f2分离条件为：78％乙腈-0.1％甲酸水本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种十五元环缩肽化合物，其特征在于，其为下列八种化合物中的一种：
2.如权利要求1所述的十五元环缩肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述其由链霉菌S.conglobatus发酵得到或者通过化学合成获得。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，其包括步骤：投喂前体化合物a～d的制备；将链霉菌S.conglobatus接种在固体培养基上，27～32℃培养4～6天后收集孢子；
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述固体培养基含有1.5～2.5％大豆粉，1.5～2.5％D-甘露醇，1.5～2.5％琼脂；所述一级液体培养基含有2～4％胰酶大豆肉汤，9～11％蔗糖，0.4～0.6％酵母提取物；所述二级液体培养基含有2～4％大豆粉，4～6％葡萄糖，0.4～0.6％CaCO3，4～6mg/L CoCl2·6H2O，0.15～0.25％(v/v)消泡剂；所述发酵培养基含有2～4％大豆粉，4～6％葡萄糖，0.4～0.6％CaCO3，0.15～0.25％(v/v)消泡剂。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述前体化合物a～d可由以下路
6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，从发酵液中提取分离如权利要求1所述的十五元环缩肽类化合物的步骤为：向发酵液中加入0.1～0.2％(v/v)的甲酸，然后用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物经30～45℃减压浓缩后得浸膏：
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，柱色谱分离包括：经正向硅胶柱分离，洗脱溶剂为二氯甲烷/甲醇，洗脱溶剂配比梯度为50/1(v/v)；
8.如权利要求1所述的十五元环缩肽类化合物的制备方法，其特征在于，其制备过程如下：
9.如权利要求1所述的十五元环缩肽类化合物在制备抗肿瘤药物中应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤选自肺癌、结肠癌中的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种十五元环缩肽化合物，其特征在于，其为下列八种化合物中的一种：
2.如权利要求1所述的十五元环缩肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述其由链霉菌s.conglobatus发酵得到或者通过化学合成获得。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，其包括步骤：投喂前体化合物a～d的制备；将链霉菌s.conglobatus接种在固体培养基上，27～32℃培养4～6天后收集孢子；
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述固体培养基含有1.5～2.5％大豆粉，1.5～2.5％d-甘露醇，1.5～2.5％琼脂；所述一级液体培养基含有2～4％胰酶大豆肉汤，9～11％蔗糖，0.4～0.6％酵母提取物；所述二级液体培养基含有2～4％大豆粉，4～6％葡萄糖，0.4～0.6％caco3，4～6mg/l cocl2·6h2o，0.15～0.25％(v/v)消泡剂；所述发酵培养基含有2～4％大豆粉，4...
【专利技术属性】
技术研发人员：林霄，柴玲，韦金锐，李正媛，薛培英，周永军，林厚文，唐振洲，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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