一种构建高产辅酶Q10工程菌的方法及其应用技术

技术编号:22097386 阅读:56 留言:0更新日期:2019-09-14 01:55
本发明专利技术公开了构建高产辅酶Q10工程菌的方法及其应用,属于基因工程技术领域,解决了现有辅酶Q10生产方法产量较低的问题。本发明专利技术包括以下步骤:从含有编码异戊烯基焦磷酸异构酶IDI的基因的亲本菌株中提取基因组DNA;用聚合酶链式反应扩增出异戊烯基焦磷酸异构酶IDI的同源基因;用扩增出的同源基因与质粒载体连接,构建重组载体;重组载体导入至宿主细胞中从而得到目标工程菌。本发明专利技术提供一种构建高产辅酶Q10工程菌的方法在生产辅酶Q10中的应用。本发明专利技术通过构建工程菌过表达异戊烯基焦磷酸异构酶IDI,使辅酶Q10合成前体物质增加,可极大提高辅酶Q10的合成能力,显著提升其产量,可用于辅酶Q10的大规模工业化生产。

A Method for Constructing High-yield Coenzyme Q10 Engineering Bacteria and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种构建高产辅酶Q10工程菌的方法及其应用
本专利技术属于基因工程
,具体涉及一种构建高产辅酶Q10工程菌的方法及其应用。
技术介绍
辅酶Q10(CoQ10)又名泛醌、癸烯醌,化学名称为2,3-二甲氧基-5-甲基-6-癸异戊烯苯醌。辅酶Q10的生物活性来自于其醌环的氧化还原特性及其侧链的理化性质,它是细胞自身产生的天然抗氧化剂和细胞代谢激活剂,其具有抗氧化、消除自由基、提高机体免疫力、抗衰老等功能,临床上广泛应用于各类心脏病、癌症、糖尿病、急慢性肝炎、帕金森症等疾病的治疗,而且在食品、化妆品及抗衰老保健品方面也有很多的应用。辅酶Q10的制备方法主要有三种,即动植物组织提取法、化学合成法和微生物发酵法。动植物组织提取法中动植物辅酶Q10含量低,而且各种化学成份复杂,并受原料和来源限制,因此产品成本高,价格昂贵,规模化生产受到了一定限制。化学合成法技术上比较成熟,以来源较丰富的茄尼醇为主要原料,但其产物为顺反异构体的混合物,生物活性低。微生物发酵法是目前辅酶Q10的主要生产方式,其合成的辅酶Q10成本低、无光学异构体、生物学活性高,大规模生产应用前景好。已报道的辅酶Q10生产技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种构建高产辅酶Q10工程菌的方法,其特征在于包括以下步骤:A、从含有编码异戊烯基焦磷酸异构酶IDI的基因的亲本菌株中提取基因组DNA;B、用聚合酶链式反应扩增出异戊烯基焦磷酸异构酶IDI的同源基因;C、用扩增出的同源基因与质粒载体连接,构建重组载体;D、重组载体导入至宿主细胞中从而得到目标工程菌。

【技术特征摘要】
1.一种构建高产辅酶Q10工程菌的方法,其特征在于包括以下步骤:A、从含有编码异戊烯基焦磷酸异构酶IDI的基因的亲本菌株中提取基因组DNA;B、用聚合酶链式反应扩增出异戊烯基焦磷酸异构酶IDI的同源基因;C、用扩增出的同源基因与质粒载体连接,构建重组载体;D、重组载体导入至宿主细胞中从而得到目标工程菌。2.根据权利要求1所述的一种构建高产辅酶Q10工程菌的方法,其特征在于:在步骤A中,所述亲本菌株包括荚膜红假单胞菌、热带假丝酵母、醋酸杆菌属、红螺菌属、放射型根瘤菌、类球红细菌中的一种或多种;在步骤D中,所述宿主细胞选用细菌或真菌。3.根据权利要求1或2所述的一种构建高产辅酶Q10工程菌的方法,其特征在于:步骤B还包括目的基因引物设计,以从亲本菌株中提取的基因组DNA为模板,采用PCR法合成编码异戊烯基焦磷酸异构酶IDI的基因。4.根据权利要求3所述的一种构建高产辅酶Q10工程菌的方法,其特征在于:步骤C包括启动子替换,成功构建重组载体后,将重组载体上的控制编码异戊烯基焦磷酸异构酶IDI的基因表达的启动子敲除后插入其他不同的启动子,进一步调控编码异戊烯基焦磷酸异构酶IDI的基因的表...

【专利技术属性】
技术研发人员:高维东谢小冬弥超秦云刘恭骆小军张调调刘慧琴
申请(专利权)人:兰州天禾生物催化技术有限公司
类型:发明
国别省市:甘肃,62

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