一种增加基因menA拷贝数提高MK-7的产量的方法技术

本发明专利技术公开了一种增加基因menA拷贝数提高MK‑7的产量的方法，属于遗传工程领域。本发明专利技术确定menA基因是七烯甲萘醌(MK‑7)的合成途径中的关键基因，并发现menA基因的自身的启动子对menA的活性具有重要作用，利用P43启动子替换枯草芽孢杆菌168染色体上menA基因的天然启动子，得到的菌株发酵产MK‑7的产量比出发菌株明显减少。在枯草芽孢杆菌基因组的ganA、thrC、dacA位点整合表达menA的整个开放阅读框，分别获得重组菌株BS15，BS16和BS17，使MK‑7的产量分别提高到40mg/L、59mg/L、75mg/L。

A Method of Increasing the Copy Number of MenA Gene to Increase the Yield of MK-7

【技术实现步骤摘要】
一种增加基因menA拷贝数提高MK-7的产量的方法
本专利技术涉及一种增加基因menA拷贝数提高MK-7的产量的方法，属于遗传工程领域。
技术介绍
七烯甲萘醌(MK-7)是一类重要的脂溶性维生素，作为γ-谷氨酸羧化酶的辅因子，在调节钙的分配、促进骨骼发育逆转骨质疏松以及在保护血管，防止动脉粥样硬化和心血管疾病反应中起到重要作用。由于七烯甲萘醌对人体具有更好的亲和性和更长的半衰期，得到人们更多的关注。七烯甲萘醌的产量在原始枯草芽孢杆菌中产量非常低，液体发酵也仅有9mg/L。在枯草芽孢杆菌中，分支酸可以在menF，menD，ytxM，menC，menE，menB，yuxO7个酶的作用下形成骨架结构甲萘醌，然后在1,4-二羟基-2-萘甲酸七戊烯基转移酶(menA)的作用下生成去甲基甲萘醌-7，最后在甲萘醌甲基转移酶(menH)的作用下生成七烯甲萘醌。在专利《基因过表达及获得的菌株、应用》(CN108715825A)(公开日：2018.10.30)中，采用组成型启动子PlapS在B.subtilis染色体的yxlA位点过表达自身的menA基因，确定menA是影响MK-7合成的关键基因，最后使本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高七烯甲萘醌的产量的方法，其特征在于，将menA开放阅读框整合到出发菌株的染色体上；所述menA开放阅读框的序列如SEQ ID NO.8所示。

【技术特征摘要】
1.一种提高七烯甲萘醌的产量的方法，其特征在于，将menA开放阅读框整合到出发菌株的染色体上；所述menA开放阅读框的序列如SEQIDNO.8所示。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述出发菌株为枯草芽孢杆菌。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述整合为单位点或多位点整合。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述整合是在ganA(genebankID：936313)、thrC(genebankID：936660)或dacA(genebankID：940000)位点进行整合。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述整合具体步骤为：(1)将整合位点的上游同源臂序列、menA开放阅读框序列、整合位点的下游同源臂序列依次融合得到融合基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘龙，杨陈亮，崔世修，吕雪琴，李江华，堵国成，陈坚，唐波，
申请(专利权)人：江南大学，南通励成生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32