一种稳定液体谷氨酰胺转氨酶酶活的制剂制造技术

本发明专利技术公开了一种稳定液体谷氨酰胺转氨酶酶活的制剂，其组成成分包括谷氨酰胺转氨酶、糖类和/或醇类、抗氧化剂、水活度调节剂和酸度调节剂。本发明专利技术解决了谷氨酰胺转氨酶液体酶在室温较高时(30℃)极不稳定、难以长期保存的技术问题。本发明专利技术实现了液体谷氨酰胺转氨酶制剂30℃下保存3个月酶活剩余85％以上，常温下保存6个月酶活剩余90％以上且溶液状态稳定。本发明专利技术具有广泛应用前景，其推广应用及发展具有重大意义。

A preparation for stabilizing the activity of liquid glutamine transaminase

【技术实现步骤摘要】
一种稳定液体谷氨酰胺转氨酶酶活的制剂
本专利技术属于酶制剂领域和食品添加剂领域，涉及一种使液体谷氨酰胺转氨酶酶活保持稳定的制剂。专利技术背景谷氨酰胺转氨酶在食品加工行业有着广泛应用和前景，但是目的大部分的谷氨酰胺转氨酶还是以粉末制剂的形式生产和使用。粉末制剂已经实现规模化生产但是存在着生产成本偏高，保存受限制和使用不便的缺陷，而液体酶制剂则可以解决以上的问题。目前虽然已有商品化的液体酶制剂，但是仍然存在着多方面的问题，其中最突出的问题就是市售的液体酶制剂只能在室温(25℃，下同)下长期保存，但在实际的运输，贮存过程中，很难保证稳定的室温条件，在夏季或是气候炎热地区，其应用效果可能会受到很大的影响。因此开发一种可在较高温度下(30℃，下同)长期稳定保存的液体谷氨酰胺转氨酶制剂是推广液体酶制剂的关键。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可以使谷氨酰胺转氨酶液体酶酶活在较高温度长期保存下保持稳定的制剂，该制剂使液体谷氨酰胺转氨酶(即谷氨酰胺转氨酶液体酶)可在30℃保存三个月剩余酶活不低于85％且在室温(25℃)下保存6个月剩余酶活不低于90％。本专利技术提出了一种稳定液体谷氨酰胺转氨酶酶活的制剂，其组成成分包括糖类和醇类、抗氧化剂、谷氨酰胺转氨酶、水活度调节剂和酸度调节剂。优选地，所述制剂的组成成分及含量包括：150-200U的谷氨酰胺转氨酶/每毫升制剂，20％-100％(w/v)重量体积比的糖类和/或醇类，0.01％-2％(w/v)重量体积比的抗氧化剂，以及0.01％-1％(w/v)重量体积比的酸度调节剂。其中，所述糖类和/或醇类的含量为20％-100％(w/v)；优选地，为20％、27％和29％。所述抗氧化剂的含量为0.01％-2％(w/v)；优选地，为0.2％。所述谷氨酰胺转氨酶的含量为150-200U/毫升，即1毫升液体酶制剂中包含150-200U的谷氨酰胺转氨酶。所述酸度调节剂的含量为0.01％-1％(w/v)；优选地，为0.1％。所述水活度调节剂的含量为30％-40％(w/v)；优选地，为30％、33％和40％。本专利技术制剂中，所述制剂的理化性质：pH范围在5.5-9.0，水活度范围在0.5-0.89，电导率范围在0.1-5ms/cm，氧化还原电位范围在-350-100mV；优选地，pH为6.5，水活度为0.61，电导率为1.2ms/cm，氧化还原电位为-200mV。本专利技术制剂中，所述糖类和/或醇类为：海藻糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖、低聚异麦芽糖、环糊精、麦芽糊精、可溶性淀粉、山梨糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、聚乙二醇、甘露糖醇、丙二醇、丙三醇中的一种或多种。优选地，为木糖醇、山梨糖醇、葡萄糖、海藻糖、蔗糖中的一种或多种。本专利技术制剂中，所述抗氧化剂是：茶多酚、茶多酚棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、甘草抗氧化物、L-抗坏血酸及其盐、磷脂、没食子酸丙酯、迷迭香提取、山梨酸钾、乳酸钙、L-半胱氨酸及其盐、乙二胺四乙酸二钠、还原型谷胱甘肽、大豆蛋白水解物、酵母水解物、竹叶抗氧化物、植酸等的一种或多种。优选地，为没食子酸丙酯，谷胱甘肽，茶多酚棕榈脂，L-半胱氨酸和亚硫酸钠的一种或多种。本专利技术制剂中，所述酸度调节剂为：乙酸钠、DL-苹果酸及其钠盐、柠檬酸及其盐、葡萄糖酸钠、乳酸及其钠盐、碳酸盐、富马酸及其钠盐、DL-酒石酸、硫酸钙、氢氧化钙、盐酸、氢氧化钠等的一种或多种。优选地，为柠檬酸及柠檬酸钠的一种或两种。本专利技术制剂中，所述水活度调节剂优选为甘油三醇。本专利技术制剂中，所述液体谷氨酰胺转氨酶的酶活在30℃下保存三个月后的剩余酶活不低于85％，且在25℃室温下保存六个月后的剩余酶活不低于90％。本专利技术有益效果在于：本专利技术提供的稳定酶活的制剂实现了谷氨酰胺转氨酶液体酶在30℃条件下储存3个月酶活剩余率85％以上；常温条件下存储6个月，酶活剩余率90％以上且溶液性状均一稳定，达到了市场商业化要求，生产工艺简单、使用效果良好，在较高温度的运输和储存条件下不影响液体酶的品质。本专利技术具有广泛应用前景，其推广应用和发展具有重大意义。具体实施方式结合以下具体实施例，对本专利技术作进一步的详细说明，本专利技术的保护内容不局限于以下实施例。在不背离专利技术构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本专利技术中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本专利技术的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本专利技术没有特别限制内容。为获得满足条件的液体酶制剂，需要根据谷氨酰胺转氨酶的具体生化性质，本专利技术创新地提出了研究和筛选液体谷氨酰胺转氨酶添加物的思路：首先，研究发现对液体酶长期保存存在影响的因素有：温度，pH，微生物，电导率和氧化还原电位，通过针对不同因素对液体酶长期保存的影响的原因，从GB2760-2014(食品安全国家标准食品添加剂使用标准)中有目的的选择添加物，初步筛选得到效果较好的添加物组成初始配方，再通过实际液体酶保存实验来验证配方的效果，从中筛选出所需的液体酶配方。实施例1：温度对谷氨酰胺转氨酶液体酶保存的影响将纯化除菌后的酶液装在密封的离心管中，置于不同温度的培养箱中，放置7天，观察溶液状态并检测剩余酶活。结果如表1所示。表1.谷氨酰胺转氨酶液体酶置于不同温度下7天后的酶活剩余情况温度初始酶活剩余酶活酶活剩余率溶液状态4℃100U/mL99.8U/mL99.8％澄清25℃100U/mL97.2U/mL97.2％澄清30℃100U/mL84.8U/mL84.8％混浊37℃100U/mL51.6U/mL51.6％浑浊45℃100U/mL7.8U/mL7.8％浑浊从表1的数据中可以发现，当温度低于25℃时，酶活保存较好，随着温度的升高，酶活剩余率不断降低，在30℃时，溶液出现了浑浊的现象，当温度在45℃时，酶活剩余率仅有7.8％，说明谷氨酰胺转氨酶的热稳定性较差，需要添加能提高液体酶热稳定性的添加物。实施例2不同保护剂对液体酶热稳定性的提高效果选择对在高温下对蛋白有保护作用的物质进行实验，将其与液体酶混合，在60℃水浴锅中处理10min，观察其对液体酶的热稳定性是否有提高。结果见表2。表2.不同添加物在高温下对液体酶的保护作用从表2中可以发现，部分糖类和醇类物质对液体酶在高温下的保护作用比较明显，无机盐保护作用一般。继续观察添加保护剂的液体酶在30℃下保存七天后的剩余酶活，结果见表3。表3.不同添加物在30℃对液体酶的保护作用添加物添加物浓度初始酶活处理后酶活酶活剩余率无-100U/mL23.15U/mL23.15％甘油20％100U/mL51.14U/mL51.14％蔗糖20％100U/mL78.03U/mL78.03％葡萄糖20％100U/mL63.54U/mL63.54％麦芽糖20％100U/mL68.66U/mL68.66％氯化钠20％100U/mL43.29U/mL43.29％氯化钙20％100U/mL41.50U/mL41.50％山梨糖醇20％100U/mL75.28U/mL75.28％海藻糖20％100U/mL83.16U/mL80.16％从表3结果可以得出，在高温下对液体酶有保护作用的物质，在30℃条本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种稳定液体谷氨酰胺转氨酶酶活的制剂，其特征在于，所述制剂的组成成分及含量包括：150‑200U的谷氨酰胺转氨酶/每毫升制剂，20％‑100％w/v重量体积比的糖类和/或醇类，0.01％‑2％w/v重量体积比的抗氧化剂，以及0.01％‑1％w/v重量体积比的酸度调节剂。

【技术特征摘要】
1.一种稳定液体谷氨酰胺转氨酶酶活的制剂，其特征在于，所述制剂的组成成分及含量包括：150-200U的谷氨酰胺转氨酶/每毫升制剂，20％-100％w/v重量体积比的糖类和/或醇类，0.01％-2％w/v重量体积比的抗氧化剂，以及0.01％-1％w/v重量体积比的酸度调节剂。2.如权利要求1所述的液体酶制剂，其特征在于，所述制剂的理化性质：pH为5.5-9.0，水活度为0.5-0.89，电导率为0.1-5ms/cm，氧化还原电位为-350-100mV。3.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述糖类和/或醇类为：海藻糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖、低聚异麦芽糖、环糊精、麦芽糊精、可溶性淀粉、山梨糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、聚乙二醇、甘露糖醇、丙二醇、丙三醇中的一种或多种。4.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述抗氧化剂是...

【专利技术属性】
技术研发人员：任越舟，金明飞，王玲转，贺小杰，张玉如，步国建，张晓健，
申请(专利权)人：泰兴市东圣生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32