靶向肿瘤的珠载体及其使用方法技术

所公开的珠载体直接进入单核细胞来源的细胞并引起PD‑1的细胞外结构域、抗CTLA4抗体或对检查点蛋白特异的抗体的表达。该珠载体可包含核酸组分、溶酶体归避组分和能被吞噬的珠颗粒。所公开的载体可用于癌症疗法、治疗和预防的各种方法。由于单核细胞靶向肿瘤的能力，所公开的载体特别适用于抗肿瘤应用和指导靶基因在肿瘤相关巨噬细胞中的表达。

Bead carriers targeting tumors and their application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向肿瘤的珠载体及其使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2016年8月17日提交的美国临时申请号62/376,033的权益和优先权，其内容通过引用整体并入本文。专利
本公开文本总体上涉及癌症治疗领域，并且特别涉及使用单核细胞特异性珠载体的靶向癌症治疗。本公开文本提供了通过激活肿瘤相关巨噬细胞以表达程序性死亡蛋白1(PD-1)的细胞外结构域或抗检查点蛋白抗体或其结合片段(例如与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)结合的单结构域抗体)来有效治疗肿瘤的组合物和方法。
技术介绍
仅提供以下讨论以帮助读者理解本公开文本，并且不承认其描述或构成针对其的现有技术。单核细胞通常在体内巡逻以寻找外来的非自身抗原，例如细菌。单核细胞吞噬细菌，然后将其消化成溶酶体中较小的抗原部分。得到的细菌抗原循环回到这些细胞的细胞表面，以呈递给免疫系统的体液和细胞武器。单核细胞在从血流迁移到特定组织后可以分化成巨噬细胞或树突细胞。重要的是，许多实体瘤在肿瘤床内存在大量巨噬细胞。这些肿瘤相关巨噬细胞(TAM)被吸引到肿瘤的缺氧和/或坏死微环境中，在那里它们可以通过各种途径(例如核因子-κB(NF-κB)的激活和促血管生成信号(例如VEGF)的释放)促进肿瘤生长和进展。因此，按以下方式利用TAM将是有益的，即通过使它们表达治疗性蛋白质来逆转它们固有的促肿瘤活性。
技术实现思路
本文描述了使用单核细胞特异性珠载体处理肿瘤以指导治疗性蛋白表达的组合物和方法。在一方面，本公开文本提供珠载体，其包含(i)编码PD-1细胞外结构域或结合细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)的单结构域抗体的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)能被吞噬的珠颗粒。另一方面，本公开文本提供用于定向进入单核细胞的珠载体，其包含(i)编码PD-1细胞外结构域或结合CTLA4的单结构域抗体的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)约0.5至约2.5微米并允许组合物被单核细胞吞噬的珠颗粒。另一方面，本公开文本提供了治疗患者癌症的方法，该方法包括向患有癌症的患者给予珠载体，该珠载体包含(i)编码PD-1细胞外结构域或结合CTLA4的单结构域抗体的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)约0.5至约2.5微米的珠颗粒(例如酵母细胞壁颗粒)，其中给予该珠载体治疗该患者的癌症。另一方面，本公开文本提供珠颗粒载体，其包含(i)编码抗检查点蛋白抗体或其结合片段的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)能被吞噬的珠颗粒。另一方面，本公开文本提供了用于定向进入单核细胞的珠载体，其包含(i)编码抗检查点蛋白抗体或其结合片段的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)约0.5至约2.5微米并允许组合物被单核细胞吞噬的珠颗粒。另一方面，本公开文本提供了治疗患者癌症的方法，该方法包括向患有癌症的患者给予珠载体，该珠载体包含(i)编码抗检查点蛋白抗体或其结合片段的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)约0.5至约2.5微米的珠颗粒(例如酵母细胞壁颗粒)，其中给予该珠载体治疗该患者的癌症。在一些实施方案中，溶酶体归避组分可以是非感染性病毒或病毒的非感染性组分。例如，非感染性病毒可以是腺病毒或重组腺病毒。另外，在一些实施方案中，非感染性病毒或病毒的非感染性组分可以是非复制性的。在一些实施方案中，编码PD-1细胞外结构域或结合CTLA4的单结构域抗体的核酸可以选自DNA和RNA。在一些方面，抗检查点蛋白抗体或其结合片段是抗PD-L1抗体或其结合片段，而在一些实施方案中，抗检查点蛋白抗体是抗CTLA4抗体或其结合片段。在一些实施方案中，抗检查点抗体可以是单结构域抗体。在一些实施方案中，PD-1细胞外结构域包含哺乳动物PD-1细胞外结构域，如人或鼠PD-1细胞外结构域。在一些实施方案中，编码PD-1细胞外结构域、结合CTLA4的单结构域抗体、或抗检查点蛋白抗体或其结合片段的核酸可以在表达载体中被编码。在一些实施方案中，表达载体可包含核启动子，如CMV启动子。在一些实施方案中，表达载体可包含缺氧诱导的启动子，如HREx3+BasalSV40启动子的嵌合启动子。在一些实施方案中，表达载体可包含T7启动子、FSV非结构蛋白基因和/或FSV亚基因组启动子。在一些实施方案中，珠载体可包含核酸保护组分，例如鱼精蛋白、聚精氨酸、聚赖氨酸、组蛋白、组蛋白样蛋白、合成聚阳离子聚合物或具有包括在核酸序列(例如，DNA或RNA序列)中的适当包装序列的病毒的核心颗粒。在一些实施方案中，编码PD-1细胞外结构域、结合CTLA4的单结构域抗体、或抗检查点蛋白抗体或其结合片段的核酸和溶酶体归避组分可通过链霉抗生物素蛋白和生物素之间的相互作用连接至珠颗粒。在一些实施方案中，编码PD-1细胞外结构域、结合CTLA4的单结构域抗体、或抗检查点蛋白抗体或其结合片段的核酸和溶酶体归避组分可通过抗体连接与珠颗粒连接。在一些实施方案中，珠颗粒可包含铁磁性颗粒、微珠、微球或酵母细胞壁颗粒(YCWP)。在一些实施方案中，吞噬珠载体的单核细胞是巨噬细胞，例如肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。在一些实施方案中，所治疗的癌症表达PD-1配体或CTLA4。并且在一些实施方案中，癌症包含至少一种可具有缺氧微环境的肿瘤，并且还可包含肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。在一些实施方案中，所公开的珠载体是皮内或皮下给予的。例如，在一些实施方案中，所公开的珠载体可以在靶淋巴结(即，最接近待治疗的肿瘤的淋巴结)附近皮内或皮下给予。前面的一般描述和以下的详细描述是示例性和说明性的，而非对本公开文本的限制。附图说明图1显示了人PD-1(A)和鼠PD-1(B)的全长氨基酸序列。每种蛋白质的细胞外结构域以粗体表示。图2显示了用于表达小鼠PD-1胞外域的示例性病毒进入载体。图3显示了用于将重组病毒载体连接到珠颗粒上以形成示例性珠颗粒载体递送系统的示例性逐步方案。图4显示了用于产生重组病毒颗粒以连接至所公开的珠颗粒的示例性逐步方案。图5显示肿瘤内注射对照颗粒(用于表达GFP)和用于表达PD-1细胞外结构域的颗粒后具有B16鼠黑素瘤异种移植物的小鼠的肿瘤体积。图6显示了在单次肿瘤内注射对照颗粒(用于表达GFP)和用于表达PD-1细胞外结构域的颗粒后四周具有B16黑素瘤异种移植物的示例性小鼠。图(A)中的小鼠是对照小鼠，而图(B)中的小鼠接受用于表达PD-1细胞外结构域的珠颗粒。图7显示了用于表达抗CTLA4单结构域抗体的示例性载体。图8显示了用于表达抗CTLA4单结构域抗体的示例性载体的全长序列。具体实施方式通常，本公开文本提供了新的靶向基因递送载体和使用它们的方法。特别地，本公开文本提供了基于珠或酵母细胞壁颗粒(YCWP)的递送载体，其用于表达结合CTLA4的单结构域抗体或用于在肿瘤相关巨噬细胞(TAM)细胞和肿瘤的微环境中表达PD-1的胞外域或细胞外结构域，并且可以通过肿瘤微环境中的缺氧诱导抗体或PD-1胞外域或细胞外结构域的表达。贯穿本公开文本，各种出版物、专利和公开的专利说明书通过识别引用来引用。特此将这些出版物、专利和公开的专利说明书的公开内容通过引用结合到本公开文本中，以更全面地描述本公开文本所属领域的现有技术。定义除非另外定义，否则本文使用的技术和科学术语具有本领域本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种珠载体，其包含(i)编码抗CTLA4抗体的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)能被吞噬的珠颗粒。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.17 US 62/376,0331.一种珠载体，其包含(i)编码抗CTLA4抗体的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)能被吞噬的珠颗粒。2.权利要求1的珠载体，其中该溶酶体归避组分是非感染性病毒或病毒的非感染性组分。3.权利要求2的珠载体，其中该非感染性病毒是腺病毒。4.权利要求3的珠载体，其中该腺病毒是重组腺病毒。5.权利要求2的珠载体，其中该非感染性病毒或病毒的非感染性组分是非复制性的。6.权利要求1的珠载体，其中该编码抗CTLA4抗体的核酸选自DNA和RNA。7.权利要求1的珠载体，其中该编码抗CTLA4抗体的核酸在表达载体中被编码。8.权利要求7的珠载体，其中该表达载体包含核启动子。9.权利要求8的珠载体，其中该核启动子包含T7启动子。10.权利要求7的珠载体，其中该表达载体包含缺氧诱导的启动子。11.权利要求10的珠载体，其中该缺氧诱导的启动子包含HREx3+BasalSV40启动子的嵌合启动子。12.权利要求7的珠载体，其中该表达载体包含图8中所示的序列。13.权利要求1的珠载体，其中该抗CTLA4抗体是单结构域抗体。14.权利要求1的珠载体，其还包含核酸保护组分。15.权利要求14的珠载体、其中该核酸保护组分选自鱼精蛋白、聚精氨酸、聚赖氨酸、组蛋白、组蛋白样蛋白、合成聚阳离子聚合物和具有包括在核酸序列中的适当包装序列的逆转录病毒的核心颗粒。16.权利要求1的珠载体，其中该编码抗CTLA4抗体的核酸和该溶酶体归避组分通过链霉抗生物素蛋白和生物素之间的相互作用与该珠颗粒连接。17.权利要求1的珠载体，其中该编码抗CTLA4抗体的核酸和该溶酶体归避组分通过抗体连接与该珠颗粒连接。18.权利要求1的珠载体，其中该溶酶体归避组分包含腺病毒五邻体蛋白。19.权利要求1的珠载体，其中该珠颗粒包含铁磁性颗粒。20.权利要求1的珠载体，其中该珠颗粒包含微珠或微球。21.权利要求1的珠载体，其中该珠颗粒包含酵母细胞壁颗粒(YCWP)。22.一种用于定向进入单核细胞的珠载体，其包含(i)编码抗CTLA4抗体的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)约0.5至约2.5微米并允许组合物被单核细胞吞噬的珠颗粒。23.权利要求22的珠载体，其中该单核细胞是巨噬细胞。24.权利要求23的珠载体，其中该巨噬细胞是肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。25.权利要求22的珠载体，其中该珠颗粒包含铁磁性颗粒。26.权利要求22的珠载体，其中该珠颗粒包含微珠或微球。27.权利要求22的珠载体，其中该珠颗粒包含酵母细胞壁颗粒(YCWP)。28.权利要求22的珠载体，其中该溶酶体归避组分是非感染性病毒或病毒的非感染性组分。29.权利要求22的珠载体，其中该非感染性病毒或病毒的非感染性组分是非复制性的。30.权利要求22的珠载体，其中该编码抗CTLA4抗体的核酸在表达载体中被编码。31.权利要求31的珠载体，其中该表达载体包含图8中所示的序列。32.权利要求22的珠载体，其中该抗CTLA4抗体是单结构域抗体。33.一种治疗患者癌症的方法，该方法包括向患有癌症的患者给予珠载体，该珠载体包含(i)编码抗CTLA4抗体的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)约0.5至约2.5微米的珠颗粒，其中给予该珠载体治疗该患者的癌症。34.权利要求33的方法，其中该癌症表达CTLA4配体。35.权利要求33的方法，其中该癌症包括至少一种包含缺氧微环境的肿瘤。36.权利要求35的方法，其中该至少一种肿瘤还包含肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。37.权利要求33的方法，其中该珠颗粒包含铁磁性颗粒。38.权利要求33的方法，其中该珠颗粒包含微珠或微球。39.权利要求33的方法，其中该珠颗粒包含酵母细胞壁颗粒(YCWP)。40.权利要求33的方法，其中所述溶酶体归避组分是非感染性病毒或病毒的非感染性组分。41.权利要求33的方法，其中该非感染性病毒或病毒的非感染性组分是非复制性的。42.权利要求33的方法，其中该编码抗CTLA4抗体的核酸在表达载体中被编码。43.权利要求42的方法，其中该表达载体包含T7启动子。44.权利要求42的方法，其中该表达载体包含图8中所示的序列。45.权利要求33的方法，其中该抗CTLA4抗体是单结构域抗体。46.权利要求33的方法，其中该珠载体是皮内或皮下给予。47.权利要求46的方法，其中该珠载体是在靶淋巴结附近给予。48.一种珠载体，其包含(i)编码PD-1细胞外结构域的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)能被吞噬的珠颗粒。49.权利要求48的珠载体，其中该溶酶体归避组分是非感染性病毒或病毒的非感染性组分。50.权利要求49的珠载体，其中该非感染性病毒是腺病毒。51.权利要求50的珠载体，其中该腺病毒是重组腺病毒。52.权利要求49的珠载体，其中该非感染性病毒或病毒的非感染性组分是非复制性的。53.权利要求48的珠载体，其中该编码PD-1细胞外结构域的核酸选自DNA和RNA。54.权利要求48的珠载体，其中该编码PD-1细胞外结构域的核酸在表达载体中被编码。55.权利要求54的珠载体，其中该表达载体包含核启动子。56.权利要求55的珠载体，其中该核启动子包含CMV启动子。57.权利要求54的珠载体，其中该表达载体包含缺氧诱导的启动子。58.权利要求57的珠载体，其中该缺氧诱导的启动子包含HREx3+BasalSV40启动子的嵌合启动子。59.权利要求48的珠载体，其中该PD-1细胞外结构域包含哺乳动物PD-1细胞外结构域。60.权利要求59的珠载体，其中该PD-1细胞外结构域包含人PD-1细胞外结构域。61.权利要求59的珠载体，其中该PD-1细胞外结构域包含鼠PD-1细胞外结构域。62.权利要求48的珠载体，其还包含核酸保护组分。63.权利要求62的珠载体、其中该核酸保护组分选自鱼精蛋白、聚精氨酸、聚赖氨酸、组蛋白、组蛋白样蛋白、合成聚阳离子聚合物和具有包括在核酸序列中的适当包装序列的逆转录病毒的核心颗粒。64.权利要求48的珠载体，其中该编码PD-1细胞外结构域的核酸和该溶酶体归避组分通过链霉抗生物素蛋白和生物素之间的相互作用与该珠颗粒连接。65.权利要求48的珠载体，其中该编码PD-1细胞外结构域的核酸和该溶酶体归避组分通过抗体连接与该珠颗粒连接。66.权利要求48的珠载体，其中该溶酶体归避组分包含腺病毒五邻体蛋白。67.权利要求48的珠载体，其中该珠颗粒包含铁磁性颗粒。68.权利要求48的珠载体，其中该珠颗粒包含微珠或微球。69.权利要求48的珠载体，其中该珠颗粒包含酵母细胞壁颗粒(YCWP)。70.一种用于定向进入单核细胞的珠载体，其包含(i)编码PD-1细胞外结构域的核酸，(ii)溶酶体归避组分，和(iii)约0.5至约2.5微米并允许组合物被单核细胞吞噬的珠颗粒。71.权利要求70的珠载体，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·E·瓦格纳，
申请(专利权)人：奥比思健康解决方案有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US