装载了肿瘤裂解物的微粒制造技术

本发明专利技术涉及装载了肿瘤裂解物的微粒，具体地，本发明专利技术制备了包含装载了肿瘤裂解物的微粒的树突状细胞。树突状细胞递呈了肿瘤抗原来引发主要组织相容性复合体I类途径并可被用作疫苗来治疗癌症，包括眼黑色素瘤。包括眼黑色素瘤。包括眼黑色素瘤。

【技术实现步骤摘要】
装载了肿瘤裂解物的微粒
[0001]本申请是2013年10月02日提交的申请号为201380057518.2、专利技术名称为“装载了肿瘤裂解物的微粒”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]专利技术背景
[0003]肿瘤细胞存在在某种程度上是因为其选择了一种或多种突变使得其部分或全部逃离体内的免疫监控。
[0004]在引发对肿瘤细胞的免疫应答的尝试中，之前的研究者已使用树突状细胞，其为专业的抗原呈递细胞，对免疫系统递呈肿瘤抗原。举例来说，用肽或肿瘤裂解物脉冲的树突状细胞已被用于为黑色素瘤患者接种疫苗。
[0005]然而，由于这些抗原仅由树突状细胞内吞且通常通过只诱导辅助T细胞而并不提供强免疫应答的主要组织相容性复合体(MHC)II类途径呈递，因此以之前的方式简单地向免疫系统提供肿瘤抗原并不有效。
[0006]相反地，经由MHC I类途径递呈肿瘤抗原可通过激活CD8+T细胞促成更强的抗肿瘤免疫力。之前的研究者已尝试通过使用基因转移方法由MHC I类途径递呈肿瘤抗原。然而，这些方法具有劣势，包括(1)局限的识别全部重要的肿瘤特异性抗原的能力，(2)局限的对特异性肿瘤抗原基因定位的能力，(3)只有一种或少数的已知肿瘤抗原基因可以被引入树突状细胞以及(4)所述方法费时且繁琐。
[0007]专利技术概述
[0008]一些实施方案涉及分离的树突状细胞，其包含基本上由(i)微粒和(ii)微粒内装载的肿瘤裂解物所组成的吞噬组分。在特定的实施方案中，所述肿瘤裂解物以约200μg至约500μg的量存在。在特定的实施方案中，所述肿瘤裂解物以约200μg的量存在。
[0009]在一些实施方案中，所述肿瘤裂解物是选自癌症的裂解物，所述癌症选自下组：乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、肾母细胞瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、肝癌、胰腺癌、黑色素瘤、前列腺癌和眼黑色素瘤。
[0010]在一些实施方案中，所述微粒是酵母细胞壁微粒。在一些实施方案中，所述树突状细胞是已分离不超过8天的未成熟细胞。
[0011]另一实施方案涉及疫苗，其包含前文所述的分离的树突状细胞。
[0012]一些实施方案涉及用于产生分离的包含装载了肿瘤裂解物的微粒的树突状细胞的方法，其包括：(i)将所述肿瘤裂解物装载入微粒来产生装载了肿瘤裂解物的微粒；(ii)冻干所述装载了肿瘤裂解物的微粒；以及(iii)将所述装载了肿瘤裂解物的微粒与树突状细胞共同孵育，其中所述孵育引起所述树突状细胞吞噬所述装载了肿瘤裂解物的微粒。
[0013]在特定的实施方案中，前文所述方法进一步包括(a)在溶液中重悬所述装载了肿瘤裂解物的微粒以及(b)在步骤(iii)之前冻干所述重悬溶液。在特定的实施方案中，所述肿瘤裂解物通过冷冻和融化所述肿瘤生成。在特定的实施方案中，前文所述方法进一步包括重复所述冷冻和融化步骤。在特定的实施方案中，前文所述方法进一步包括在
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150℃冷冻保存所述肿瘤裂解物。
[0014]在特定的实施方案中，步骤(iii)包括：(a)将肿瘤裂解物加入酵母细胞壁微粒，
(b)孵育所述酵母细胞壁微粒，(c)冻干所述酵母细胞壁微粒以及(d)洗涤所述酵母细胞壁，其中重复步骤(b)
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(c)至少一次且在重复步骤(b)之前伴随将水加入所述酵母细胞微粒的步骤。
[0015]在特定的实施方案中，步骤(iii)包括：(a)将装载了肿瘤裂解物的微粒与树突状细胞以约100:1的比例接触，(b)将所述装载了肿瘤裂解物的微粒与所述树突状细胞孵育1至2小时以及(c)收集所述树突状细胞并洗涤所述细胞。
[0016]在优选的实施方案中，将少量的一种或多种增强免疫应答的佐剂添加至肿瘤裂解缓冲液中，然后与树突状细胞孵育。一种或多种佐剂的添加增加了肿瘤裂解物对树突状细胞的作用同时显著减少任何来自这类佐剂的全身作用。通常使用的佐剂包括但不限于蛋白质、肽、核酸和碳水化合物。
[0017]示例性佐剂包括但不限于单磷酰脂质A、GpC寡核苷酸(如GpC DNA)、Poly I:C、Poly ICLC、有效的MHC II表位肽、β葡聚糖，和树突状细胞刺激细胞因子如IL
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12。合适的佐剂是那些已知与树突状细胞上的受体相互作用由此激活树突状细胞并进一步刺激T细胞(如CD4+和CD8+T细胞)更强的生成的分子。
[0018]在一些实施方案中，一种或多种增强免疫应答的佐剂的量是至少约5μg、至少约10μg、至少约15μg、至少约20μg、至少约25μg、至少约30μg、至少约35μg、至少约40μg、至少约45μg、至少约50μg、至少约60μg、至少约70μg、至少约80μg、至少约80μg、至少约90μg，或至少约100μg。在一个实施方案中，佐剂的量占总裂解物的量的1
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10％之间。佐剂的量足以刺激树突细胞上的受体，如toll
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样受体。
[0019]一些实施方案涉及用于治疗癌症的方法，其包括施用包含前文所述的分离的树突状细胞的疫苗。在特定的实施方案中，所述癌症选自下组：乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、肾母细胞瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、肝癌、胰腺癌、黑色素瘤、前列腺癌和眼黑色素瘤。
[0020]附图简述
[0021]图1描述了用于产生树突状细胞的方法。
[0022]图2描述了用于产生肿瘤裂解物的方法。
[0023]图3描述了用于产生酵母细胞壁微粒的方法。
[0024]图4描述了用于将肿瘤裂解物装载入酵母细胞壁微粒的方法。
[0025]图5描述了用于产生装载了肿瘤裂解物微粒的树突状细胞的方法。
[0026]图6是装载了肿瘤裂解物微粒的树突状细胞与抗原脉冲的树突状细胞对B3Z细胞作用的比较图。
[0027]图7A展示了受B16F0小鼠黑色素瘤困扰的对照小鼠的肺。图7B展示了受B16F0小鼠黑色素瘤困扰但用肿瘤裂解物微粒装载的树突状细胞治疗的小鼠的肺。
[0028]优选实施方案的详述
[0029]本领域的普通技术人员已知的多种方法学作为本文的参考文献。作为参考文献的描述这些已知的方法学的发表物和其他材料在本文如阐述全文般通过提述以其全文并入。
[0030]除非明确表明仅指代单数，否则本文所用单数形式“一个”、“一种”以及“所述”指单数以及复数两者。同样的，除非明确表明仅指代单数，术语的单数形式指单数和复数两者。举例来说，“疫苗”意为“一种疫苗”或“多种疫苗”。
[0031]术语“约”与数值和范围有关时意为包括的数字不限于本文阐述的精确数字，且意在指基本上在引用范围内但不脱离本专利技术的保护范围的范围。本文所用术语“约”可被本领域的普通技术人员理解且将在其使用的语境中有一定程度的变化。
[0032]本文所用“受试者”或“患者”指任何需要用疫苗治疗的动物。举例来说，受试者可能承受或有风险发展出可被疫苗治疗或预防的病症。本文使本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的树突状细胞，其包含基本上由(i)微粒和(ii)微粒内装载的肿瘤裂解物组成的吞噬组分。2.权利要求1的树突状细胞，其中所述肿瘤裂解物以约200μg至约500μg的量存在。3.权利要求1的树突状细胞，其中所述肿瘤裂解物以约200μg的量存在。4.权利要求1的树突状细胞，其中所述肿瘤裂解物是选自癌症的裂解物，所述癌症选自下组：乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、肾母细胞瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、肝癌、胰腺癌、黑色素瘤、前列腺癌和眼黑色素瘤。5.权利要求1的树突状细胞，其中所述微粒是酵母细胞壁微粒。6.权利要求1的树突状细胞，其中所述树突状细胞是已...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：奥比思健康解决方案有限责任公司，
类型：发明
国别省市：