一种表达人促卵泡生长激素（FSH）的方法技术

本发明专利技术公开了一种表达人促卵泡生长激素(FSH)的方法。本发明专利技术将人促卵泡生长激素目的基因克隆到腺病毒载体，包装得到的重组人促卵泡生长激素腺病毒感染动物乳腺上皮细胞可以高效表达得到具备体外生物活性的重组人促卵泡生长激素蛋白。本发明专利技术提供了一种利用重组人促卵泡生长激素腺病毒感染动物乳腺上皮细胞制备重组人促卵泡生长激素的方法，该方法利用动物泌乳功能的乳腺上皮细胞制备了可分泌到细胞外且具备体外生物活性的重组人促卵泡生长激素蛋白，为动物乳腺上皮细胞用于制备重组人促卵泡生长激素蛋白可提供了可靠的方法，对将来利用转基因羊、牛等大动物乳腺生产重组人促卵泡搜生长激素提供可靠的技术依据。

A method for expression of human follicle stimulating hormone (FSH)

【技术实现步骤摘要】
一种表达人促卵泡生长激素（FSH）的方法
本专利技术涉及生物医药与基因工程
，特别是涉及一种表达人促卵泡生长激素(FSH)的方法。
技术介绍
人促卵泡生长激素(FSH)是由下丘脑控制的垂体前叶嗜碱性细胞合成和分泌的糖蛋白类促性腺激素，它是一种由FSHα亚基与FSHβ亚基通过非共价键结合形成的异源二聚体糖蛋白。其中FSHα亚基基因编码了92个氨基酸，包含10个半胱氨酸，形成5个二硫键；FSHβ亚基基因编码了111个氨基酸，其中包含12个半胱氨酸，形成6个二硫键。人促卵泡生长激素在女性体内的主要功能是促进子宫内膜的生长、卵泡的发育和排卵等，临床上主要用于辅助生殖方面超数排卵等功能。目前市场对于人促卵泡生长激素产品的需求巨大，市面上主要有两种人促卵泡生长激素产品，一种是尿源的人促卵泡生长激素，另外一种是国外进口的基因工程重组人促卵泡生长激素(rhFSH)蛋白，其中在国内市场的临床应用上进口重组人促卵泡生长激素占据主要市场。尿源FSH蛋白药物如瑞士Serono公司的Tertinex/metrodin，以及我国丽珠集团的丽申宝。进口的重组促卵泡生长激素目前主要是利用基因工程技术和细胞培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达人促卵泡生长激素(FSH)的方法，其特征在于，该方法是利用腺病毒载体在动物乳腺上皮细胞表达人促卵泡生长激素，包括以下步骤：(1)构建重组人促卵泡生长激素腺病毒载体以pAdTrack‑CMV为腺病毒穿梭载体，将人促卵泡生长激素基因克隆到pAdTrack‑CMV载体构建pAdTrack‑CMV‑FSH腺病毒穿梭载体，腺病毒穿梭载体pAdTrack‑CMV‑FSH与骨架载体pAdEasy‑1通过转化到大肠杆菌体内重组后获得了重组腺病毒载体pAdEasy‑FSH；(2)重组人促卵泡生长激素腺病毒的包装、扩增将重组腺病毒载体pAdEasy‑FSH转染到人胚胎肾细胞中，10‑14d后得到第一代...

【技术特征摘要】
1.一种表达人促卵泡生长激素(FSH)的方法，其特征在于，该方法是利用腺病毒载体在动物乳腺上皮细胞表达人促卵泡生长激素，包括以下步骤：(1)构建重组人促卵泡生长激素腺病毒载体以pAdTrack-CMV为腺病毒穿梭载体，将人促卵泡生长激素基因克隆到pAdTrack-CMV载体构建pAdTrack-CMV-FSH腺病毒穿梭载体，腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-FSH与骨架载体pAdEasy-1通过转化到大肠杆菌体内重组后获得了重组腺病毒载体pAdEasy-FSH；(2)重组人促卵泡生长激素腺病毒的包装、扩增将重组腺病毒载体pAdEasy-FSH转染到人胚胎肾细胞中，10-14d后得到第一代重组人促卵泡生长激素腺病毒，收集第一代重组人促卵泡生长激素腺病毒，通过感染人胚胎肾细胞后继续扩增得到滴度更高的腺病毒，收集得到第三代重组人促卵泡生长激素腺病毒，测定第三代重组人促卵泡生长激素病毒的滴度；(3)重组人促卵泡生长激素腺病毒感染动物乳腺上皮细胞将重组人促卵泡生长激素腺病毒加入到培养了24-30h的动物乳腺上皮细胞中，24h-48h后收集动物乳腺上皮细胞蛋白；(4)重组人促卵泡生长激素的鉴定及纯化收集动物乳腺上皮细胞蛋白，通过蛋白质免疫印迹法(Westernblotting)鉴定目的蛋白的表达，利用亲合层析方法纯化动物乳腺上皮细胞表达的重组人促卵泡生长激素；(5)重组人促卵泡生长激素活性检测将动物乳腺...

【专利技术属性】
技术研发人员：李青旺，华荣茂，李媛，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61