小檗碱在制备抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16表达的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了小檗碱在制备抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16表达的药物中的应用，通过体外机制研究显示，BBR可以调控细胞周期相关蛋白p16，CDK4及CyclinD1的表达，促进细胞周期G1‑S期转换，使进入S期细胞数量增多，进而改善自然衰老细胞系2BS及WI38的复制性衰老状态。还可以抑制蛋白p16表达，对阿霉素引起的早衰或者化疗药引起的副作用起到保护作用，减缓衰老或能够减轻损伤；对小檗碱在开发减轻化疗引起的副作用的药物组合物及延长生物寿命药物研发中有一定的指导作用。

Application of Berberine in the Preparation of Drugs Inhibiting the Expression of Cyclin-dependent Kinase Inhibitor p16

【技术实现步骤摘要】
小檗碱在制备抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16表达的药物中的应用
本专利技术属于生物领域，特别涉及小檗碱在制备抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16表达的药物中的应用。
技术介绍
衰老是随着年龄增长机体组织器官功能退化的过程，与正常胚胎发育、机体老化、衰老相关疾病等都有着密切的联系。近些年对细胞衰老的研究越来越深入，其在抗衰老方面发挥的生物学作用也越来越受到重视。研究表明细胞衰老(cellularsenescence)是指随着时间的推移或面临外界应激压力时，细胞的正常生理功能和增殖能力就会逐渐发生衰退，从而脱离细胞周期，该过程与肿瘤、组织再生及机体衰老等都具有重要的联系。细胞衰老需要借助信号通路转导，其中最主要的两条信号通路是P16Ink4a/Rb(retinoblastomaprotein)途径和P19Arf/P53/P21Cip1途径，这两条途径相互作用但又相互独立地调控细胞周期的进程。小檗碱(Berberine,BBR)又名黄连素在中国拥有悠久的药用历史，可从黄连和黄柏中提取出的一种异喹啉类生物碱，具有多种药理作用，包括抗病原微生物、抗炎、抗肿瘤、心脏保护、降血脂、调节脂质代谢以及免疫抑制等。
技术实现思路
为了细胞分裂次数，延长细胞的寿命，改善老年的人胚肺成纤维细胞的衰老状态，本专利技术提供了小檗碱的应用。本专利技术的第一方面，提供了小檗碱在制备抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16表达的药物中的应用。申请人发现，小檗碱在低浓度能够缓解细胞复制性衰老、在低浓度能够改善细胞复制性衰老形态特征、在低浓度能够增加分裂期细胞数量、在低浓度能够上调细胞周期相关蛋白表达，申请人发现，小檗碱的浓度为0.3125μg/ml，即可实现以上功能。本专利技术的第二方面，提供了小檗碱在制备阿霉素引起的生物衰老药物中的应用。本专利技术的第三方面，提供了本专利技术提供了联合用药物组合物，包括小檗碱和阿霉素，可有效降低阿霉素的毒副作用，延缓阿霉素引起的生物衰老。本专利技术的第四方面，提供了小檗碱在制备提高运动能力药物中的应用。有益效果：本专利技术提供的小檗碱能显著改善早衰小鼠与自然衰老小鼠的衰老状态并延长其寿命，通过体外机制研究显示，BBR可以调控细胞周期相关蛋白p16，CDK4及CyclinD1的表达，促进细胞周期G1-S期转换，使进入S期细胞数量增多，进而改善自然衰老细胞系2BS及WI38的复制性衰老状态。还可以抑制蛋白p16表达，对阿霉素引起的早衰或者化疗药引起的副作用起到保护作用，减缓衰老或能够减轻损伤；对小檗碱在开发减轻化疗引起的副作用的药物组合物及延长生物寿命药物研发中有一定的指导作用。上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例并配合附图详细说明如后。附图说明图1显示BBR能够延长芽殖酵母寿命:其中，(A)芽殖酵母寿命图。(B)芽殖酵母分裂周期图。右上角为酵母平均寿命。图2显示低浓度BBR可以缓解2BS(PD45)和WI38(PD45)细胞的复制性衰老；其中，(A)BBR对老年2BS(左)和WI38(右)细胞活力分析。(B)低浓度BBR对处于PD45的2BS(左)和WI38(右)细胞增殖的影响。给药浓度单位：μg/ml(C)0.3125μg/mlBBR对处于PD45的2BS(左)和WI38(右)细胞分裂代数的影响。Mean±SEM.n＝5-8.*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。图3显示低浓度BBR可以改善老年2BS的细胞衰老形态；其中，(A)年轻(PD30)与老年(PD55)2BS细胞形态对比(放大倍数×400)。(B)年轻(PD30)与老年(PD55)2BS细胞衰老相关蛋白p16表达变化。(C)细胞衰老SA-β-gal染色(放大倍数×400)。(D)细胞衰老SA-β-gal染色定量。(E)给药后细胞衰老相关蛋白p16表达变化。Mean±SEM.n＝3.*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001.PD30组vsPD55组。#p<0.05,##p<0.01，###p<0.001.对照组vs给药组。图4显示低浓度BBR能够增加S期细胞数量；其中，(A)WI38-PD45细胞周期检测。(B)2BS-PD45细胞周期检测。(C)各周期细胞比例统计。Mean±SEM.n＝5-8.*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001.WI38对照组vs给药组。#p<0.05,##p<0.01，###p<0.001.2BS对照组vs给药组。图5显示低浓度BBR能够影响细胞周期相关蛋白水平；其中，(A)细胞周期相关蛋白的表达。(B)细胞周期相关蛋白的定量结果，n＝3。Mean±SEM。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.01，对照组vs给药组。图6显示Doxorubicin可诱导体外早衰；其中，(A)Doxorubicin诱导时间不同造成细胞不同程度早衰。(B)Doxorubicin诱导时间不同造成衰老相关蛋白表达不同。(C)衰老相关蛋白定量分析。n＝3。Mean±SEM。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.01，对照组vs给药组。图7显示BBR能够预防Doxorubicin造成的细胞早衰；(A)BBR预防给药与治疗给药改善细胞早衰SA-β-gal染色(放大倍数×400)。(B)细胞衰老SA-β-gal染色定量。(C)细胞衰老相关蛋白的定量结果，n＝3。Mean±SEM。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.01，对照组vs模型组。#p<0.05,##p<0.01，###p<0.001，预防组vs治疗组。图8显示Doxorubicin诱导C57小鼠早衰；其中，(A)Doxorubicin构建早衰模型流程图。(B)生存曲线。(C)运动能力评估。(D)体重变化。(E)肝肾重量指数。(F)肝肾生化指标，n＝6。AST(U/L),ALT(U/L),BUN(mg/dl),creatinine(μM).Mean±SEM。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，对照组vs模型组。图9显示BBR能够预防Doxorubicin造成的早衰损伤；(A)BBR预防给药流程图。(B)预防给药生存曲线。(C)预防给药运动能力评估。(D)预防给药体重变化。(E)BBR治疗给药流程图。(F)治疗给药生存曲线。(G)预防组与治疗组肝肾生化指标。Mean±SEM。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，模型组vs预防给药组。图10显示BBR可以延长自然衰老小鼠寿命；其中，(A)18月龄小鼠给药流程图。(B)18月龄小鼠生存曲线。(C)体重变化。(D)运动能力评估。(E)毛发密度改变。(F)22月龄小鼠给药期间生存曲线。(G)22月龄小鼠生存曲线。Mean±SEM。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，对照组vs给药组。具体实施方式下面结合附图和实施例，对本专利技术的具本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.小檗碱在制备抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16表达的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.小檗碱在制备抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16表达的药物中的应用。2.如权利要求1所述应用，其特征在于：小檗碱的浓度为0.3125μg/m...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢正伟，杨宝学，党谣，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京,11