抗CD-3抗体，与CD3及CD20结合的双特异性抗原结合分子，及其用途制造技术

本发明专利技术提供与CD3结合的抗体及其使用方法。根据某些实施方式，本发明专利技术抗体以高亲和力与人类CD3结合并诱导人类T细胞增殖。本发明专利技术包括与CD3结合并诱导T细胞介导的肿瘤细胞杀伤的抗体。根据某些实施方式，本发明专利技术提供双特异性抗原结合分子，其包括特异性与人类CD3结合的第一抗原结合结构域及特异性与人类CD20结合的第二抗原结合分子。在某些实施方式中，本发明专利技术的双特异性抗原结合分子能抑制表达CD20的B‑细胞肿瘤的生长。本发明专利技术的抗体及双特异性抗原结合分子可用于治疗其中上调的或诱导的靶向的免疫反应为希望的及/或治疗上有利的疾病和病症。例如，本发明专利技术的抗体可用于治疗多种癌症以及其他CD20相关的疾病和病症。

Anti-CD-3 Antibody, Bispecific Antigen Binding Molecule Binding to CD 3 and CD20, and Its Application

【技术实现步骤摘要】
抗CD-3抗体，与CD3及CD20结合的双特异性抗原结合分子，及其用途本申请为2013年9月19日提交的，专利技术名称为“抗CD-3抗体，与CD3及CD20结合的双特异性抗原结合分子，及其用途”的PCT申请PCT/US2013/060511的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2015年3月20日，申请号为201380048967.0。专利
本专利技术关于对CD3具特异性的抗体及其抗原结合片段，及其使用方法。本专利技术亦关于与CD3及目标分子例如CD20结合的双特异性抗原结合分子，及其使用方法。背景CD3为与T细胞受体复合物(TCR)关联表达在T细胞上的同源二聚性或异源二聚性抗体，且为T细胞活化所需。功能性CD3由四条不同链中的二条链二聚结合所形成：ε、ζ、δ和γ。CD3二聚体排列包括γ/ε、δ/ε和ζ/ζ。抗CD3抗体已显现将CD3丛聚在T细胞上，藉此以类似TCR被肽-承载的MHC分子所吸引的方式，使T细胞活化。因此，抗-CD3抗体己被提出作为涉及T细胞活化作用的治疗目的。此外，能与CD3和靶抗原结合的双特异性抗体己被提出作为涉及将T细胞免疫反应靶向表达靶抗原细胞的组织和细胞的治疗用途。CD20为表达在成熟B细胞的细胞膜上的非糖基化磷蛋白。CD20被视为B-细胞肿瘤相关抗原，因为有超过95％的B-细胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)和其他B-细胞恶性肿瘤表达CD20，但其在前体B-细胞、树突细胞和浆细胞中则无。靶向CD20的治疗癌症的方法已为本领域所知。例如，嵌合抗-CD20单克隆抗体利妥昔单抗(rituximab)已用于或建议用于治疗癌症，例如NHL、慢性淋巴性白血病(CLL)和小淋巴性淋巴瘤(SLL)。认为CD20通过补体依赖的细胞毒性(CDC)、抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)/或引发细胞凋亡和对化学治疗的敏感性，杀死CD20-表达的肿瘤细胞。虽然抗-CD20肿瘤靶向策略在临床情况已显现很大的潜力，但并非所有的患者皆对抗-CD20治疗有反应，且某些患者显示对抗-CD20治疗发生抗性或出现不完全反应(例如，对利妥昔单抗具有抗性)。与CD3和靶抗原(例如CD20)结合的双特异性抗原结合分子应可用于其中期望特异性靶向和T细胞介导的杀死表达靶抗原的细胞的治疗情况。专利技术简述在第一方面本专利技术提供与人类CD3结合的抗体及其抗原-结合片段。根据本专利技术此方面的抗体可用于，特别地，靶向表达CD3的T细胞，及用于刺激T细胞活化，例如在其中T细胞介导的致死为有利或所欲的情况下。可包括本专利技术的抗-CD3抗体或其抗原-结合部分作为双特异性抗体的部分，所述双特异性抗体针对具体细胞类型诸如肿瘤细胞或感染剂的CD3介导的T细胞活化。本专利技术的示例性抗-CD3抗体列于文中的表1和表2。表1列出示例的抗-CD3抗体的重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)，以及重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标示符。表2列出编码示例的抗-CD3抗体的HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的核酸分子的序列标示符。本专利技术提供包括HCVR的抗体或其抗原结合片段，该HCVR包括选自由表1所列的任何HCVR氨基酸序列的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其实质上类似的序列。本专利技术也提供包括LCVR的抗体或其抗原结合片段，该LCVR包括选自由表1所列的任何LCVR氨基酸序列的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其实质上类似的序列。本专利技术亦提供包括HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)的抗体或其抗原结合片段，该HCVR和LCVR氨基酸序列对包括表1所列的任何HCVR氨基酸序列与表1所列的任何LCVR氨基酸序列配对。根据某些实施方式，本专利技术提供包括包含在任何表1所列的示例性抗-CD3抗体中的HCVR/LCVR氨基酸序列对的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，HCVR/LCVR氨基酸序列对由下列组成的组中选出：SEQIDNO：2/10(例如H1H2712N)；114/122(例如H2M2609N)；514/522(例如H2M3563N)；770/778(例如H1H5778P)；1050/1234(例如H1H7195B)；及1090/1234(例如H1H7208B)。本专利技术亦提供包括重链CDR1(HCDR1)的抗体或其抗原结合片段，该重链CDR1包括由表1所列的任何HCDR1氨基酸序列中选出的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其实质上类似的序列。本专利技术亦提供包括重链CDR2(HCDR2)的抗体或其抗原结合片段，该重链CDR2包括由表1所列的任何HCDR2氨基酸序列中选出的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其实质上类似的序列。本专利技术亦提供包括重链CDR3(HCDR3)的抗体或其抗原结合片段，该重链CDR3包括由表1所列的任何HCDR3氨基酸序列中选出的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其实质上类似的序列。本专利技术亦提供包括轻链CDR1(LCDR1)的抗体或其抗原结合片段，该轻链CDR1包括由表1所列的任何LCDR1氨基酸序列中选出的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其实质上类似的序列。本专利技术亦提供包括轻链CDR2(LCDR2)的抗体或其抗原结合片段，该轻链CDR2包括由表1所列的任何LCDR2氨基酸序列中选出的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其实质上类似的序列。本专利技术亦提供包括轻链CDR3(LCDR3)的抗体或其抗原结合片段，该轻链CDR3包括由表1所列的任何LCDR3氨基酸序列中选出的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其实质上类似的序列。本专利技术亦提供包括HCDR3和LCDR3氨基酸序列对(HCDR3/LCDR3)的抗体或其抗原结合片段，该HCDR3和LCDR3氨基酸序列对包括表1所列的任何HCDR3氨基酸序列与表1所列的任何LCDR3氨基酸序列配对。根据某些实施方式，本专利技术提供包括包含在任何表1所列的示例性抗-CD3抗体中的HCDR3/LCDR3氨基酸序列对的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，HCDR3/LCDR3氨基酸序列对由下列组成的组中选出：SEQIDNO：8/16(例如H1H2712N)；120/128(例如H2M2609N)；520/528(例如H2M3563N)；776/784(例如H1H5778P)；1056/1240(例如H1H7195B)；及1096/1240(例如H1H7208B)。本专利技术亦提供包括包含在任何表1所列的示例性抗-CD3抗体中的一组六个CDR(亦即HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，此HCDRl-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.全人类双特异性抗体，其包括与人类CD3结合的第一抗原结合结构域及与靶抗原结合的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域衍生自如在表面等离子共振测定法中于25℃以抗原捕捉模式测量的，以低于5nM的结合解离平衡常数(KD)与人类CD3结合的抗体，其中每个抗原结合结构域包含与轻链配对的重链。

【技术特征摘要】
2012.09.21 US 61/704,029;2013.01.17 US 61/753,461;1.全人类双特异性抗体，其包括与人类CD3结合的第一抗原结合结构域及与靶抗原结合的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域衍生自如在表面等离子共振测定法中于25℃以抗原捕捉模式测量的，以低于5nM的结合解离平衡常数(KD)与人类CD3结合的抗体，其中每个抗原结合结构域包含与轻链配对的重链。2.权利要求1的双特异性抗体，其中第一抗原结合结构域包含位于重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)氨基酸序列对中的6个互补决定区，所述重链可变区/轻链可变区氨基酸序列对选自SEQIDNOs:2/10,18/26,34/42,50/58,66/74,82/90,98/106,114/122,130/138,146/154,162/170,178/186,194/202,210/218,242/250,258/266,274/282,290/298,306/314,322/330,338/346,354/362,386/394,402/410,418/426,434/442,466/474,482/490,514/522,530/538,594/602,610/618,626/634,642/650,706/714,722/730,754/762,770/778,786/794,802/810,850/858,866/874,882/890,898/906,930/938,946/954,962/970,1026/1034,1042/1234,1050/1234,1058/1234,1066/1234,1074/1234,1082/1234,1098/1234,1106/1234,1114/1234,1122/1234,1138/1234,1146/1234,1154/1234,1162/1234,1170/1234,1178/1234和1186/1234。3.权利要求1或2的双特异性抗体，其中所述第二抗原结合结构域结合人类CD20，并且第一和第二抗原结合结构域各包含与共同LCVR配对的不同的，有区别的HCVR。4.权利要求1-3中任一项的双特异性抗体，其中所述第一抗原结合结构域包含衍生自抗CD3抗体的HCVR/LCVR氨基酸序列对，并且第二抗原结合结构域包含衍生自抗CD20抗体的HCVR和衍生自抗CD3抗体的LCVR，其中每个LCVR是相同的。5.药物组合物，其包括权利要求1至4中任一项的双特异性抗体及可药用的载剂或稀释剂。6.权利要求5的药物组合物，用于上调对象中的免疫反应。7.权利要求5的药物组合物，用于治疗受试者的肿瘤。8.全人类双特异性抗原结合分子，其包括特异性与人类CD3结合的第一抗原结合结构域，及特异性与人类CD20结合的第二抗原结合结构域，其中每个抗原结合结构域包括与轻链配对的重链。9.权利要求8的双特异性抗体，其中第一和第二抗原结合结构域各包含与共同LCVR配对的不同的、有区别的HCVR。10.权利要求8或9的双特异性抗体，其中第一抗原结合结构域包含衍生自抗CD3抗体的HCVR/LCVR氨基酸序列对，并且第二抗原结合结构域包含衍生自抗CD20抗体的HCVR和衍生自抗CD3抗体的LCVR，其中每个LCVR是相同的。11.权利要求8的双特异性抗原结合分子，其中抗原结合分子以1x10-12M和1x10-6M之间的EC50值与表达CD3的人类T细胞结合。12.权利要求8的双特异性抗原结合分子，其中抗原结合分子以1x10-9M和1x10-8M之间的EC50值与表达CD3的人类T细胞结合。13.权利要求8至12中任一项的双特异性抗原结合分子，其中抗原结合分子与表达人类CD3的人类细胞和表达食蟹猴CD3的食蟹猴细胞结合。14.权利要求8至12中任一项的双特异性抗原结合分子，其中抗原结合分子于体外诱导人类和食蟹猴外周血液单核细胞(PBMC)的增殖。15.权利要求8至12中任一项的双特异性抗原结合分子，其中抗原结合分子于人类全血中诱导IFN-γ释放及CD25上调。16.权利要求8至12中任一项的双特异性抗原结合分子，其中抗原结合分子诱导T细胞介导的人类B细胞的细胞毒性。17.权利要求16的双特异性抗原结合分子，其中抗原结合分子诱导T细胞介导的人类B细胞的细胞毒性，所述人类B细胞是抗-CD20-介导的细胞毒性抗性或难治的。18.权利要求8至17中任一项的双特异性抗原结合分子，其中以约0.01mg/kg的剂量单次将双特异性抗原结合分子施用于对象使得在双特异性抗原结合分子施用于该对象后约第1天，该对象的B细胞数目下降至可检测水平以下。19.权利要求18的双特异性抗原结合分子，其中B细胞数目维持在可检测水平以下直到将约0.01mg/kg的单次剂量的双特异性抗原结合分子施用于该对象后至少约14天。20.权利要求18或19的双特异性抗原结合分子，其中在将约0.01mg/kg的单次剂量的抗原结合分子施用于对象后约第1天至约第28天，从该对象抽出的每微升血液的B细胞数，比施用双特异性抗原结合分子前从此对象抽出的每微升血液的B细胞数目低25％。21.权利要求18或19的双特异性抗原结合分子，其中在将约0.01mg/kg的单次剂量的抗原结合分子施用于对象后约第1天至约第56天，从该对象抽出的每微升血液的B细胞数，比施用双特异性抗原结合分子前从此对象抽出的每微升血液的B细胞数目低50％。22.权利要求18至21中任一项的双特异性抗原结合分子，其中在将抗原结合分子施用于对象后约第14天至约第56天，从该对象抽出的每微升血液的T细胞数，等于或大于施用双特异性抗原结合分子前从此对象抽出的每微升血液的T细胞数目。23.权利要求8至22中任一项的双特异性抗原结合分子，其中特异性与人类CD3结合的第一抗原结合结构域包括来自重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3)，所述重链可变区包含由SEQIDNO：1250、1266、1282、1298、1314和1329组成的组中选出的氨基酸序列，以及来自轻链可变区(LCVR)的轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，所述轻链可变区包含由SEQIDNO：1258、1274、1290、1306、1322和1333组成的组中选出的氨基酸序列。24.权利要求8至22中任一项的双特异性抗原结合分子，其中特异性与人类CD20结合的第二抗原结合结构域包括来自包含SEQIDNO：1242的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，以及来自轻链可变区(LCVR)的轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，所述轻链可变区包含由SEQIDNO：1258、1274、1290、1306、1322和1333组成的组中选出的氨基酸序列。25.权利要求8至22中任一项的双特异性抗原结合分子，其中特异性与人类CD3结合的第一抗原结合结构域包括三个重链互补决定区(A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3)和三个轻链互补决定区(A1-LCDR1、A1-LCDR2和A1-LCDR3)，其中A1-HCDR1包括由SEQIDNO：1252、1268、1284、1300、1316及1330组成的组中选出的氨基酸序列；其中A1-HCDR2包括由SEQIDNO：1254、1270、1286、1302、1318及1331组成的组中选出的氨基酸序列；其中A1-HCDR3包括由SEQIDNO：1256、1272、1288、1304、1320及1332组成的组中选出的氨基酸序列，其中A1-LCDR1包括由SEQIDNO：1260、1276、1292、1308、1324及1334组成的组中选出的氨基酸序列，其中A1-LCDR2包括由SEQIDNO：1262、1278、1294、1310、1326及1335组成的组中选出的氨基酸序列，及其中A1-LCDR3包括由SEQIDNO：1264、1280、1296、1312、1328及1336组成的组中选出的氨基酸序列。26.权利要求8至22中任一项的双特异性抗原结合分子，其中特异性与人类CD20结合的第二抗原结合结构域包括三个重链互补决定区(A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3)和三个轻链互补决定区(A2-LCDR1、A2-LCDR2和A2-LCDR3)，其中A2-HCDR1包括SEQIDNO：1244的氨基酸序列，其中A2-HCDR2包括SEQIDNO：1246的氨基酸序列，其中A2-HCDR3包括SEQIDNO：1248，其中A2-LCDR1包括由SEQIDNO：1260、1276、1292、1308、1324及1334组成的组中选出的氨基酸序列，其中A2-LCDR2包括由SEQIDNO：1262、1278、1294、1310、1326及1335组成的组中选出的氨基酸序列，及其中A2-LCDR3包括由SEQIDNO：1264、1280、1296、1312、1328及1336组成的组中选出的氨基酸序列。27.权利要求8至22中任一项的双特异性抗原结合分子，其中特异性与人类CD3结合的第一抗原结合结构域包括三个重链互补决定区(A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3)和三个轻链互补决定区(A1-LCDR1、A1-LCDR2和A1-LCDR3)，且其中特异性与人类CD20结合的第二抗原结合结构域包括三个重链互补决定区(A2-HCDR1、A2-HCDR2...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·史密斯，N·J·帕帕多普洛斯，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US