卷曲螺旋掩蔽的二价抗体制造技术

本发明专利技术提供了包含两个轻链和重链对的二价抗体。一个或两个轻链和重链对的N末端通过包含蛋白酶裂解位点的接头连接到卷曲螺旋形成肽，所述的肽结合以·形成卷曲螺旋，其降低至少一个轻‑重链对与靶标的结合的亲和力。

Bivalent antibodies masked by coiled helix

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】卷曲螺旋掩蔽的二价抗体相关申请的交叉引用本申请要求于2016年12月9日提交的US62/432,472的权益，其出于所有目的通过引用整体并入。关于序列表本申请包括在2017年12月8日创建的名为506990SEQLIST.TXT的文件中的电子序列表，其包含50千字节，通过引用并入。
技术介绍
目前基于抗体的治疗方法对预期靶标的选择性可能低于最佳。尽管单克隆抗体与其预期靶标的结合通常具有特异性，但大多数靶标分子对疾病部位不具有特异性，并且可能存在于疾病部位以外的细胞或组织中。已经描述了几种通过改造抗体，以使该抗体具有与能够抑制抗体结合的抑制或掩蔽结构域(inhibitoryormaskingdomain)连接的可裂解接头(cleavablelinker)，从而克服这些脱靶效应的方法(例如参见：WO2003/068934、WO2004/009638、WO2009/025846、WO2101/081173和WO2014103973)。可以将该接头设计为被对某些组织或病理特异的酶裂解，从而使抗体能够在所需位置被优先激活。掩蔽部分(maskingmoieties)可以通过直接结合抗体的结合位点起作用，或者可以通过空间位阻间接起作用。已经提出了各种掩蔽部分、接头、蛋白酶位点和组装形式。掩蔽程度、掩蔽部分与抗体的表达、纯化、偶联或药代动力学的相容性可以在不同形式之间变化。
技术实现思路
本专利技术提供了包含两个轻链和重链对的二价抗体，其中至少一个对的轻链和重链的N末端通过包含蛋白酶裂解位点的接头与卷曲螺旋形成肽连接；所述卷曲螺旋形成肽结合(associate)，以形成降低轻-重链对与靶标的结合亲和力的卷曲螺旋。可选地，两个对的轻链和重链通过包含蛋白酶裂解位点的接头与卷曲螺旋形成肽连接，所述卷曲螺旋形成肽结合，并形成降低轻-重链对与靶标的结合亲和力的卷曲螺旋。可选地，肽在不形成二硫键的情况下结合。可选地，二价抗体与细胞毒性药物或细胞抑制药物偶联(conjugate)。可选地，该细胞毒性药物或细胞抑制药物通过二价抗体的半胱氨酸残基偶联。可选地，两个轻链和重链对是相同的。可选地，两个轻链和重链对是不同的。可选地，轻链包括轻链可变区和轻链恒定区，重链包括重链可变区和重链恒定区。可选地，重链区包括CH1区、铰链区、CH2区和CH3区。可选地，两条轻链与第一异源肽连接，两条重链与第二异源肽连接。可选地，蛋白酶裂解位点是MMP#1或MMP#2中的任何一个。可选地，靶标是CD19、CD30、LIV-1、CD70或CD74中的任何一个。可选地，结合(binding)减少至少100倍。可选地，结合减少200-5000倍、200-4000倍或200-1500倍。可选地，偶联物的细胞毒性降低至少100倍。可选地，偶联物的细胞毒性降低200-5000倍。可选地，卷曲螺旋形成肽以相同方向与重链和轻链的N末端连接。可选地，卷曲螺旋形成肽以相反方向与重链和轻链的N末端连接。可选地，卷曲螺旋形成肽的多个拷贝串联连接到重链和轻链的N末端。可选地，包含SEQIDNO：44的序列的肽或由SEQIDNO：44的序列组成的肽提供包含蛋白酶裂解位点的接头以及与轻链连接的卷曲螺旋形成肽。包含SEQIDNO：47的序列的肽提供包含蛋白酶裂解位点的接头以及与重链连接的卷曲螺旋形成肽。在另一个实施方案中，包含SEQIDNO：46的序列的肽或由SEQIDNO：46的序列组成的肽提供包含蛋白酶裂解位点的接头和与重链连接的卷曲螺旋形成肽。包含SEQIDNO：47的序列的肽提供包含蛋白酶裂解位点的接头以及与轻链连接的卷曲螺旋形成肽。在另一个实施方案中，包含QGASTSVDELQAEVDQLEDENYALKTKVAQLRKKVEKLGSIPVSLRSG(SEQIDNO：34)的序列的肽或由该序列组成的肽提供包含蛋白酶裂解位点的接头和与重链连接的卷曲螺旋形成肽。序列为QGASTTVAQLEEKVKTLRAENYELKSEVQRLEEQVAQLGSIPVSLRSG(SEQIDNO：31)的肽提供包含蛋白酶裂解位点的接头和与轻链连接的卷曲螺旋形成肽。在另一个实施方案中，包含QGASTSVDELQAEVDQLEDENYALKTKVAQLRKKVEKLGSIPVSLRSG(SEQIDNO：34)的序列的肽或由该序列组成的肽提供包含蛋白酶裂解位点的接头和与轻链连接的卷曲螺旋形成肽。序列为QGASTTVAQLEEKVKTLRAENYELKSEVQRLEEQVAQLGSIPVSLRSG(SEQIDNO：31)的肽提供了包含蛋白酶裂解位点的接头和与重链连接的卷曲螺旋形成肽。在另一个实施方案中，包含GASTSVDELQAEVDQLEDENYALKTKVAQLRKKVEKLGSIPVSLRSG(SEQIDNO：64)的序列的肽或由该序列组成的肽提供包含蛋白酶裂解位点的接头和与重链连接的卷曲螺旋形成肽。序列为GASTTVAQLEEKVKTLRAENYELKSEVQRLEEQVAQLGSIPVSLRSG(SEQIDNO：65)的肽提供了包含蛋白酶裂解位点的接头和与轻链连接的卷曲螺旋形成肽。在另一个实施方案中，包含GASTSVDELQAEVDQLEDENYALKTKVAQLRKKVEKLGSIPVSLRSG(SEQIDNO：65)的序列或由该序列组成的肽提供包含蛋白酶裂解位点的接头和与轻链连接的卷曲螺旋形成肽。序列为GASTTVAQLEEKVKTLRAENYELKSEVQRLEEQVAQLGSIPVSLRSG(SEQIDNO：64)的肽提供了包含蛋白酶裂解位点的接头和与重链连接的卷曲螺旋形成肽。可选地，接头的长度为1-20、2-15、3-12、4-10、5、6、7、8、9或10个氨基酸。优选的接头具有包含GSIPVSLRSG(SEQIDNO：48)或由其组成的氨基酸序列。一些接头包含MMP2蛋白酶位点。附图说明图1A示出了卷曲螺旋形成肽、接头和蛋白酶位点的例子。在M11CC和M15CC中，SGGGGG(SEQIDNO：22)和GGGGS(SEQIDNO：24)为接头。PLGVR(SEQIDNO：23)是蛋白酶裂解位点，其余的序列是卷曲螺旋肽。SEQIDNO：20是与包含蛋白酶位点的接头连接的M11卷曲螺旋肽(显示为与轻链连接)；SEQIDNO：25是与包含蛋白酶位点的接头连接的M11卷曲肽(显示为与重链连接)。SEQIDNO：21为M11卷曲螺旋肽(显示为与轻链连接)，SEQIDNO：26为M11卷曲螺旋肽(显示为与重链连接)。SEQIDNO：27是连接至包含蛋白酶位点的接头的M15CC卷曲螺旋肽(显示为与轻链连接)，并且SEQIDNO：29是连接至包含蛋白酶位点的接头的M15卷曲螺旋肽(显示为与重链连接)。SEQIDNO：28是M15卷曲螺旋肽(显示为与轻链连接)，SEQIDNO：30是M15卷曲螺旋肽(显示为与重链连接)。在VelCC中，GS和SG是接头，IPVSLR(SEQIDNO：33)是蛋白酶裂解位点，其余序列是卷曲螺旋肽。SEQIDNO：31是连接至包含蛋白酶位点的接头的Vel卷曲螺旋肽(显示为与轻链连接)，SEQIDNO：34是连接至包含蛋白酶位点的接头的Vel卷曲肽(显示为与重链连接)。S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.包含两个轻链和重链对的二价抗体，其中至少一个对的轻链和重链的N末端通过包含蛋白酶裂解位点的接头与卷曲螺旋形成肽连接，所述的卷曲螺旋形成肽结合，形成降低轻‑重链对与靶标的结合的亲和力的卷曲螺旋。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.12.09 US 62/432,4721.包含两个轻链和重链对的二价抗体，其中至少一个对的轻链和重链的N末端通过包含蛋白酶裂解位点的接头与卷曲螺旋形成肽连接，所述的卷曲螺旋形成肽结合，形成降低轻-重链对与靶标的结合的亲和力的卷曲螺旋。2.根据权利要求1所述的二价抗体，其中两个所述的对的所述轻链和所述重链通过包含蛋白酶裂解位点的接头与卷曲螺旋形成肽连接，所述的卷曲螺旋形成肽结合，形成降低所述轻-重链对与靶标的结合的亲和力的卷曲螺旋。3.根据权利要求1或2所述的二价抗体，其中，所述的肽在不形成二硫键的情况下结合。4.根据前述任一项权利要求所述的二价抗体，其与细胞毒性或细胞抑制药物偶联。5.根据权利要求4所述的二价抗体，其通过所述二价抗体的半胱氨酸残基与细胞毒性或细胞抑制药物偶联。6.根据权利要求1-5中任意一项所述的二价抗体，其中两个轻链和重链对为相同的。7.根据权利要求1-5中任意一项所述的二价抗体，其中两个轻链和重链对为不同的。8.根据权利要求7所述的二价抗体，其中所述的两个轻链和重链对对不同靶标具有特异性。9.根据权利要求7所述的二价抗体，其中所述的两个轻链和重链对对同一靶标具有特异性。10.根据权利要求8所述的二价抗体，其中一个且仅一个所述的对通过包含蛋白酶裂解位点的接头连接至卷曲螺旋形成肽，所述的卷曲螺旋形成肽结合，形成降低所述轻-重链对与靶标的结合的亲和力的卷曲螺旋。11.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中所述的轻链包括轻链可变区和轻链恒定区，所述的重链包括重链可变区和重链恒定区。12.根据权利要求10所述的二价抗体，其中所述的重链恒定区包括CH1、铰链、CH2和CH3区。13.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中两条所述的轻链与第一异源肽连接，两条所述的重链与第二异源肽连接。14.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中所述的蛋白酶裂解位点为MMP#1或MMP#2中的任一个。15.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中所述的靶标或所述的靶标之一是CD19、CD30、LIV-1、CD70或CD74中的任一个。16.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中所述的结合降低至少100倍。17.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中所述的结合降低200-5000倍。18.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中所述结合降低200-1500倍。19.根据权利要求4或5所述的二价抗体，其中偶联物的细胞毒性降低至少100倍。20.根据权利要求4或5所述的二价抗体，其中偶联物的细胞毒性降低200-5000倍。21.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中所述卷曲螺旋形成肽以相同方向与所述重链和所述轻链的所述N末端连接。22.根据权利要求1-21中任意一项所述的二价抗体，其中所述卷曲螺旋形成肽以相反方向与所述重链和所述轻链的所述N末端连接。23.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中所述卷曲螺旋形成肽的多个拷贝串联连接至所述重链和所述轻链的N末端。24.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中所述接头的长度为1-20、2-15、3-12、4-10、5、6、7、8、9或10个氨基酸。25.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中所述接头具有包含GSIPVSLRSG(SEQIDNO：43)的氨基酸序列或由GSIPVSLRSG(SEQIDNO：43)组成的氨基酸序列。26.根据前述任一权利要求所述的二价抗体，其中所述蛋白酶裂解位点是MMP2蛋白酶位点。27.根据权利要求1-24中任意一项所述的二价抗体，其中由序列QGASTSVDELQAEVDQLEDENYALKTKVAQLRKKVEKLGSIPVSLRSG(SEQIDNO：34)组成的肽提供包含蛋白酶裂解位点的接头以及与所述轻链连接的所述卷曲螺旋形成肽；由序列QGASTTVAQLEEKVKTLRAENYELKSEVQRLEEQVAQLGSIPVSLRSG(SEQIDNO：31)组成的肽提供包含蛋白酶裂解位点的接头以及与所述重链...

【专利技术属性】
技术研发人员：维维安·庄，马修·R·利文古德，彼得·森特，
申请(专利权)人：西雅图遗传学公司，
类型：发明
国别省市：美国,US