调节细胞表达的生物活性的结合分子制造技术

本发明专利技术提供了刺激细胞上的TNF受体超家族的成员的活性的装置和方法。本发明专利技术还提供了结合分子诸如包含至少两个抗原结合位点的抗体，其中第一抗原结合位点能够结合所述成员的细胞外部分，并且第二抗原结合位点能够结合第二(不同的)膜蛋白的细胞外部分。

BINDING MOLECULES REGULATING THE BIOLOGICAL ACTIVITY OF CELL EXPRESSION

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】调节细胞表达的生物活性的结合分子本专利技术涉及结合分子领域。具体地讲，其涉及用于治疗涉及变异细胞的疾病的治疗性结合分子领域。更具体地，其涉及结合两种或更多种膜结合蛋白的细胞外部分的结合分子，从而调节细胞表达的生物活性。尽管在治疗疾病方面已经取得了许多进展并且关于导致癌症的分子事件的知识增加，但癌症仍然是世界上发病和死亡的主要原因。这是世界范围内第二位致死原因。根据世界卫生组织(WorldHealthOrganization)，癌症在2015年造成880万人死亡。在全球范围内，近六分之一的死亡由癌症引起。例如，结肠直肠癌(CRC)是全球第三大常见癌症。在2008年，123万人被诊断患有该疾病。其是欧洲第二大常见癌症，在2012年诊断出约447,000新病例(总数的13％)。结肠直肠癌是癌症死亡的第四大常见原因，据估计每年导致608,000(EU148,000)人死亡。虽然CRC方面的一些新疗法已经取得了进展，但许多在临床试验上失败了；转移性CRC在很大程度上仍然不可治愈。传统上，大多数癌症药物发现聚焦于阻断基本细胞功能和杀死分裂细胞的药物。然而，在晚期癌症的情况下，无论多么具有攻击性地施用，甚至是到患者因治疗遭受危及生命的副作用的程度，化学疗法也很难实现完全治愈。在大多数情况下，患者的肿瘤停止生长或暂时萎缩(称为缓解)仅仅是为了再次开始增殖，有时更快增殖(称为复发)，并且变得越来越难以治疗。最近，癌症药物开发的焦点已经从广泛细胞毒性的化学疗法转向具有较低毒性的靶向细胞抑制疗法。晚期癌症治疗已在白血病及一些其他癌症中得到临床验证。然而，在大多数癌症中，靶向方法仍被证明不足以有效地完全消除大多数患者的癌症。黑素瘤是非常频繁发生的癌症的另一个示例。当没有及早地检测出时，癌症很可能在极难以治疗的阶段转移。免疫干预治疗已显示对至少某些黑素瘤已经转移的患者有效。非小细胞肺癌是一种很难在外科手术的早先阶段发现的癌症类型。另外，这些类型的癌症已通过免疫干预疗法成功地治疗。对癌症的靶向已使用多种不同的方法实现，包括例如靶向癌症存活和/或生长依赖于其的信号蛋白的小分子；含有肿瘤特异性蛋白的疫苗；采用有效地杀伤肿瘤细胞的免疫细胞以及使细胞毒性分子靶向肿瘤；干扰信号转导和/或使宿主免疫系统(重新)定向至肿瘤细胞的抗体的细胞疗法。阻断CTLA-4或PD-1轴的单克隆抗体已示出诱导黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌和尿路上皮癌患者亚群的持久临床反应。本专利技术提供了用于(重新)定向免疫系统组分的新型装置和方法。本专利技术还涉及用于调节细胞所表达的生物活性的装置和方法。
技术实现思路
本专利技术提供了一种刺激细胞上TNF受体超家族的成员的活性的方法，包括提供第一细胞和第二细胞，其中第一细胞在细胞膜上具有所述成员并且所述第二细胞在细胞膜上具有第二膜蛋白，该方法包括使所述细胞与包含两个抗原结合位点的结合分子接触，其中第一抗原结合位点能够结合所述成员(第一膜蛋白)的细胞外部分，并且第二抗原结合位点能够结合所述第二膜蛋白的细胞外部分，从而刺激所述第一细胞上所述成员的活性。在一些实施方案中，所述方法是体外方法。在一些实施方案中，所述TNF受体超家族的成员是CD137或OX40，优选地CD137。在一些实施方案中，所述第二膜蛋白不为TNF受体超家族的成员。在一些实施方案中，所述第二膜蛋白是B7家族的成员。在一些实施方案中，所述第二膜蛋白是PD-L1。在一个优选的实施方案中，该方法还包括提供包含能够结合所述TNF受体超家族的成员的细胞外部分的抗原结合位点以及能够结合所述第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点的另一结合分子(第二结合分子)，其中所述第一结合分子和第二结合分子结合：-所述第一膜蛋白上的不同表位；-所述第二膜蛋白上的不同表位；或者-所述第一膜蛋白上的不同表位以及所述第二膜蛋白上的不同表位；该方法还包括将所述第一细胞和所述第二细胞与所述第一结合分子和所述第二结合分子一起温育，从而刺激或提高所述第一细胞上所述TNF受体超家族的成员的活化。本专利技术还提供一种包含能够结合TNF受体超家族的成员(第一膜蛋白)的细胞外部分的抗原结合位点以及能够结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点的结合分子。TNF受体超家族成员优选地为CD137或OX40，优选地CD137。在一些实施方案中，所述第二膜蛋白不为TNF受体超家族的成员。所述第二膜蛋白优选地为B7家族的成员。在一些实施方案中，所述第二膜蛋白是PD-L1。本专利技术还提供包含一种或多种结合分子的组合物或成套试剂盒，所述结合分子包含能够结合TNF受体超家族的成员(第一膜蛋白)的细胞外部分的抗原结合位点以及能够结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点。在一个优选的实施方案中，本专利技术提供了包含两种或更多种此类结合分子的组合物或成套试剂盒；其中至少两种所述结合分子能够结合：-所述第一膜蛋白上的不同表位；-所述第二膜蛋白上的不同表位；或者-所述第一膜蛋白上的不同表位以及所述第二膜蛋白上的不同表位。优选的是至少两种结合分子结合所述第一膜蛋白上相同的表位，以及结合所述第二膜蛋白上不同的表位。本专利技术还提供了刺激细胞上的CD137或OX40的活性的方法，该方法包括提供第一细胞和第二细胞，其中所述第一细胞在细胞膜上具有CD137或OX40并且所述第二细胞在细胞膜上具有第二膜蛋白，并且使所述第一细胞和所述第二细胞与如下结合分子(第一结合分子)相接触：包含能够结合至所述CD137或OX40(第一膜蛋白)的细胞外部分的抗原结合位点；以及能够结合至第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点；该方法还包括使所述第一细胞和所述第二细胞与所述第一结合分子一起温育，从而刺激所述第一细胞上所述CD137或OX40的活性。在一些实施方案中，所述第二膜蛋白不为TNF受体超家族的成员。在一些实施方案中，所述方法是体外方法。在一个优选的实施方案中，该方法还包括提供另一结合分子(第二结合分子)，所述另一结合分子包含能够结合所述第一膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点；以及能够结合所述第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述第一结合分子和第二结合分子结合：-所述第一膜蛋白上的不同表位；-所述第二膜蛋白上的不同表位；或者-所述第一膜蛋白上的不同表位；以及所述第二膜蛋白上的不同表位；该方法还包括使所述第一细胞和所述第二细胞与所述第一结合分子和所述第二结合分子一起温育，从而刺激所述第一细胞上CD137或OX40的活性。在一些实施方案中，根据本专利技术的结合分子包含能够结合TNF受体超家族的成员的细胞外部分的抗原结合位点以及能够结合B7家族的成员的抗原结合位点。在一些实施方案中，根据本专利技术的所述结合分子的抗原结合位点由能够结合TNF受体超家族的成员的细胞外部分的一个抗原结合位点以及能够结合B7家族的成员的一个抗原结合位点组成。在一些实施方案中，根据本专利技术的所述结合分子包含能够结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点以及能够结合B7家族的成员的抗原结合位点。在一些实施方案中，根据本专利技术的所述结合分子的抗原结合位点由能够结合CD137的细胞外部分的一个抗原结合位点以及能够结合B7家族的成员的一个抗原结合位点组成。在一些实施方案中，根据本专利技术的所述结合分子包含能够结合CD137的抗原结合位点以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种刺激细胞上的TNF受体超家族的成员的活性的方法，所述方法包括提供第一细胞和第二细胞，其中所述第一细胞在细胞膜上具有所述成员并且所述第二细胞在细胞膜上具有第二膜蛋白，所述方法包括使所述细胞与包含两个可变结构域的双特异性抗体接触，其中一个可变结构域包含能够结合所述成员的细胞外部分的第一抗原结合位点，并且另一个可变结构域包含能够结合所述第二膜蛋白的细胞外部分的第二抗原结合位点，从而刺激所述第一细胞上所述成员的活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.23 EP 16190499.01.一种刺激细胞上的TNF受体超家族的成员的活性的方法，所述方法包括提供第一细胞和第二细胞，其中所述第一细胞在细胞膜上具有所述成员并且所述第二细胞在细胞膜上具有第二膜蛋白，所述方法包括使所述细胞与包含两个可变结构域的双特异性抗体接触，其中一个可变结构域包含能够结合所述成员的细胞外部分的第一抗原结合位点，并且另一个可变结构域包含能够结合所述第二膜蛋白的细胞外部分的第二抗原结合位点，从而刺激所述第一细胞上所述成员的活性。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二膜蛋白不为所述TNF受体超家族的成员。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述双特异性抗体包含两个抗原结合位点。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体的抗原结合位点由能够结合所述TNF受体超家族的所述成员的细胞外部分的一个免疫球蛋白可变结构域以及能够结合所述第二膜蛋白的一个免疫球蛋白可变结构域组成。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体是全长抗体。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体是IgG。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一细胞不在所述细胞膜上显著地表达所述第二膜蛋白。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第二膜蛋白是存在于所述细胞膜上的一个或多个区中的膜蛋白。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述区是所述细胞膜上的簇、结构域、微结构域或隔室，优选地免疫突触。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述第二膜蛋白作为包括所述第二膜蛋白的两个或更多个实例的多聚体膜蛋白的一部分存在于所述细胞膜上。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述第二膜蛋白作为同源二聚体或同源三聚体的一部分存在于所述细胞膜上。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述第二膜蛋白是B7家族的成员。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述第二膜蛋白是PD-L1或PD-L2，优选地PD-L1。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中结合所述TNF受体超家族的所述成员的所述可变结构域阻断了配体与所述成员的结合。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中结合所述TNF受体超家族的所述成员的细胞外部分的所述可变结构域被定义为如下可变结构域：当处于包括两个结合所述TNF受体超家族的所述成员的所述可变结构域的二价单特异性抗体形式时，不刺激细胞上所述TNF受体超家族成员的活性。16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其还包括提供另一种双特异性抗体，所述另一种双特异性抗体包含能够结合所述TNF受体超家族的所述成员的细胞外部分的抗原结合位点以及能够结合所述第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述第一双特异性抗体和所述第二双特异性抗体结合：-所述第一膜蛋白上的不同表位；-所述第二膜蛋白上的不同表位；或者-所述第一膜蛋白上的不同表位以及所述第二膜蛋白上的不同表位；所述方法还包括将所述第一细胞和所述第二细胞与所述第一双特异性抗体和所述第二双特异性抗体一起温育，从而刺激所述第一细胞上所述TNF受体超家族的所述成员的活性。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述第一双特异性抗体和所述第二双特异性抗体各自包含能够结合所述TNF受体超家族的所述成员的一个抗原结合位点。18.根据权利要求16或17所述的方法，其中能够结合所述第二膜蛋白的所述第一双特异性抗体和所述第二双特异性抗体的抗原结合位点结合所述膜第二膜蛋白的细胞外部分上的不同表位。19.根据权利要求16至18中任一项所述的方法，其中所述第二膜蛋白的细胞外部分上的所述不同的表位是非竞争性表位。20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述TNF受体超家族成员是CD137或OX40。21.一种双特异性抗体，其包含能够结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点以及能够结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点。22.根据权利要求21所述的双特异性抗体，其中所述第二膜蛋白不为所述TNF受体超家族的成员。23.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：塞西利亚·安娜·威廉明娜·热延，马克·思罗斯比，科内利斯·阿德里安·德克吕夫，林塞·克洛斯特，保卢斯·约翰内斯·塔肯，敦·洛格滕伯格，
申请(专利权)人：美勒斯公司，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL