【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于使用阴离子交换色谱来测定包含异源性核酸分子的重组腺相关病毒(aav)颗粒的样品中的完整aav衣壳组分的相对丰度的方法。
技术介绍
1、腺相关病毒是一种无包膜、单链dna病毒，由于其在体内转导多种物质和组织的能力、低风险免疫毒性以及温和的先天和适应性免疫反应，已经成为一类可将遗传物质递送至宿主细胞以进行基因疗法的具有吸引力的治疗剂。病毒载体(诸如aav)的复杂性质需要特定的分析方法来进行稳健的产物测试和表征。
2、与制备方法无关，aav产生的一个特征是形成空衣壳，该空衣壳不含异源性目的基因(goi)。空衣壳的水平差异可以很大。虽然空衣壳对治疗结局的影响尚不完全清楚，但是需要密切监测空衣壳的数量以确保产物质量和一致性。
3、定量aav样品中的空衣壳的多种方法已经有所描述，并且阴离子交换色谱(aex)已经用于血清型1、2和8的完全aav颗粒的纯化和富集(wang，参见下文)。此外，aex在aav血清型6.2的准确定量中的应用已经在wang等人,molecular therapy:methods and...
【技术保护点】
1.一种用于测定包含异源性核酸分子的腺相关病毒(AAV)颗粒的样品中的完整病毒衣壳组分的相对丰度的方法，所述方法包括：
2.一种用于测定包含异源性核酸分子的腺相关病毒(AAV)颗粒的样品中的完整病毒衣壳组分的相对丰度的方法，所述方法包括：
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述洗涤溶液包含18％±1％v/v乙醇的纯化水溶液。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述样品溶液包含1mM至100mM氯化钠。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述样品溶液包含60mM至100mM氯化钠。
6.如权利要求1至...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于测定包含异源性核酸分子的腺相关病毒(aav)颗粒的样品中的完整病毒衣壳组分的相对丰度的方法，所述方法包括：
2.一种用于测定包含异源性核酸分子的腺相关病毒(aav)颗粒的样品中的完整病毒衣壳组分的相对丰度的方法，所述方法包括：
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述洗涤溶液包含18％±1％v/v乙醇的纯化水溶液。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述样品溶液包含1mm至100mm氯化钠。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述样品溶液包含60mm至100mm氯化钠。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述样品溶液包含0.003％w/v至0.007％w/v表面活性剂。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述样品溶液包含0.005％w/v±0.001％w/v表面活性剂。
8.如权利要求6或7所述的方法，其中所述表面活性剂是泊洛沙姆188。
9.如权利要求1和3至8中任一项所述的方法，其中所述系统平衡过程包括：(i)用纯化水以至少0.5ml/min的流速将所述洗涤溶液从所述lc仪器和所述aex柱的所述载液组件清除至少10分钟；(ii)用至少10cv的纯化水来洗涤所述aex柱；(iii)用至少10cv的流动相a来洗涤所述aex柱；(iv)用至少20cv的流动相b来洗涤所述aex柱；以及(v)用至少20cv的流动相a来洗涤所述aex柱。
10.如权利要求2至8中任一项所述的方法，其中所述系统平衡过程包括：(i)用纯化水以至少0.5ml/min的流速将所述洗涤溶液从所述lc仪器的所述载液组件清除至少10分钟；(ii)将所述aex柱重新安装到所述lc仪器中；(iii)用至少10cv的纯化水来洗涤所述aex柱；(iv)用至少10cv的流动相a来洗涤所述aex柱；(v)用至少20cv的流动相b来洗涤所述aex柱；以及(vi)用至少20cv的流动相a来洗涤所述aex柱。
11.如权利要求2至11中任一项所述的方法，其中进行所述系统平衡过程还包括用净化水以至少0.5ml/min的流速洗涤所述lc仪器的所述载液组件至少10分钟，然后将所述aex柱重新安装到所述lc仪器中。
12.如权利要求11所述的方法，其中用纯化水将所述洗涤溶液从所述lc仪器的所述载液组件清除，以至少0.5ml/min的流速进行至少30分钟。
13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述至少10cv包括10至20cv。
14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述至少20cv包括20至30cv。
15.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述样品分离过程包括：(i)将三个空白样品引入所述液相色谱系统中，随后引入四个参考标准样品，随后引入两个空白样品，随后引入1至10个测试样品，随后引入参考...
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