一种谷胱甘肽在制备防治鼠伤寒沙门氏菌致中枢神经系统感染的药物中的应用技术方案

本发明专利技术公开了一种谷胱甘肽在制备防治鼠伤寒沙门氏菌致中枢神经系统感染的药物中的应用，本发明专利技术提供了单侧脑室注射鼠伤寒沙门氏菌SL1344的小鼠脑膜炎模型，证明了GSH具有良好的治疗活性，并通过实验证明了GSH可以显著延长小鼠的中位生存期，提高脑膜炎EAE评分，减轻脑部的水肿和炎性浸润，另外GSH可以通过下调JNK的磷酸化，从而减轻大脑细胞的凋亡。

Application of Glutathione in the Preparation of Drugs to Prevent and Cure Central Nervous System Infection Caused by Salmonella Typhimurium

【技术实现步骤摘要】
一种谷胱甘肽在制备防治鼠伤寒沙门氏菌致中枢神经系统感染的药物中的应用
本专利技术涉及一种谷胱甘肽在制备防治鼠伤寒沙门氏菌致中枢神经系统感染的药物中的应用，属于医药领域。
技术介绍
谷胱甘肽(glutathione，GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合，含有巯基的的三肽，具有抗氧化作用和整合解毒作用。半胱氨酸上的巯基为谷胱甘肽活性基团(故谷胱甘肽常简写为G-SH)，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、芥子气，铅、汞、砷等重金属)等结合，而具有整合解毒作用。故谷胱甘肽(尤其是肝细胞内的谷胱甘肽)能参与生物转化作用，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。谷胱甘肽还能帮助保持正常的免疫系统的功能。鼠伤寒沙门氏菌为B群沙门氏菌。国内于50年代即有病例报告，至70年代以后鼠伤寒沙门氏菌感染的报告逐渐增多。除食源性致感染外，人际接触也会交叉感染，可并发化脓性脑膜炎。发热可呈持续或不规则热型，严重者可致休克、黄疸及惊厥等。据报道，庆大霉素效果较好，但可能导致肠道菌群紊乱，故对开发治疗鼠伤寒沙门氏菌致中枢神经系统感染的药物提出挑战。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术系统地考察了谷胱甘肽(GSH)用于治疗鼠伤寒沙门氏菌致中枢神经系统(CNS)感染，促进GSH的二次开发，提供了一种谷胱甘肽在制备防治鼠伤寒沙门氏菌致中枢神经系统感染的药物中的应用，通过建立单侧脑室注射鼠伤寒沙门氏菌SL1344的小鼠CNS感染模型，分成造模组、预给GSH三天(500mg/kg*天)组、预给GSH七天(500mg/kg*天)组、预给GSH十四天(500mg/kg*天)组、治疗组(500mg/kg)和庆大霉素阳性组，造模后比较各组的临床症状，包括生存曲线和EAE评分，进而将小鼠分为对照组、造模组和治疗组，进行了HE染色和Tunel染色，最后进行了免疫印迹试验(Westernblot)和免疫荧光实验，通过结果证明了，GSH可以显著延长小鼠的中位生存期，提高脑膜炎EAE评分，减轻脑膜炎导致的水肿、炎性浸润和大脑细胞的凋亡，通过下调JNK的磷酸化，从而减轻大脑细胞的凋亡。附图说明图1为本专利技术GSH对CNS感染的改善生存曲线图；图2为本专利技术GSH对CNS感染的改善EAE评分图；图3为本专利技术GSH减轻脑膜炎导致的水肿、炎性浸润和大脑细胞的凋亡HE染色图；图4为本专利技术GSH通过通过下调JNK的磷酸化，从而减轻大脑细胞的凋亡免疫印迹试验结果图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1GSH治疗鼠伤寒沙门氏菌致CNS感染的应用研究步骤一：实验分组(8周周龄C57雌鼠，n＝6)i)造模组：预给14天等体积生理盐水(0.2mL/20g)。感染后，灌胃等体积生理盐水(0.2mL/20g)。ii)预给GSH三天组：预给11天等体积生理盐水(0.2mL/20g)后，预给3天GSH(500mg/kg*天)。感染后，灌胃等体积生理盐水(0.2mL/20g)。iii)预给GSH七天组：预给7天等体积生理盐水(0.2mL/20g)后，预给7天GSH(500mg/kg*天)。感染后，灌胃等体积生理盐水(0.2mL/20g)。iv)预给GSH十四天组：预给14天GSH(500mg/kg*天)。感染后，灌胃等体积生理盐水(0.2mL/20g)。v)治疗组：预给14天等体积生理盐水(0.2mL/20g)。感染后，灌胃GSH(500mg/kg)。vi)庆大霉阳性组：预给14天等体积生理盐水(0.2mL/20g)。感染后，腹腔注射庆大霉素(15mg/kg)。步骤二：建立CNS感染模型i)鼠伤寒沙门氏菌SL1344培养：培养菌液时，用灭菌白枪头挑下单菌落，打到LB肉汤液体培养基(链霉素100ug/ml),摇床孵育过夜(225rpm，37℃)。菌液离心(1000g*5min)后弃上清，用生理盐水洗三遍后，在生理盐水中调整浓度至3*108CFU/mL。ii)单侧脑室注射菌液：戊巴比妥麻醉小鼠后，剃除头顶毛发。酒精擦拭后，剪开头皮。用10％双氧水溶液去除脑膜。脑定位仪定位AV,-1.6；ML,+1.5；DV,-1.6后，用微型颅钻钻孔。微量注射器吸取0.2μL菌液(65000CFU),以0.4μL/min的速度注入脑室。随后留针5min，缓慢抽出。昏迷小鼠以电热器进行看护。24h后给食给水。步骤三：GSH对于CNS感染的改善感染后每24h记录各小鼠的存亡，并对行为学进行EAE打分。由图1可知，GSH可以显著延长小鼠的中位生存期，由图2可知，GSH可以显著提高脑膜炎EAE评分。实施例2GSH治疗鼠伤寒沙门氏菌致CNS感染的药理研究步骤一：实验分组(8周周龄C57雌鼠，n＝6)i)对照组：单侧脑室注射等体积生理盐水(0.2μL)，缝合后灌胃等体积生理盐水(0.2mL/20g)。ii)造模组：单侧脑室注射鼠伤寒沙门氏菌(65000CFU)，缝合后灌胃等体积生理盐水(0.2mL/20g)。iii)治疗组：单侧脑室注射鼠伤寒沙门氏菌(65000CFU)，缝合后灌胃等体积GSH(500mg/kg)。步骤二：建立CNS感染模型i)鼠伤寒沙门氏菌SL1344培养：培养菌液时，用灭菌白枪头挑下单菌落，打到LB肉汤液体培养基(链霉素100ug/ml),摇床孵育过夜(225rpm，37℃)。菌液离心(1000g*5min)后弃上清，用生理盐水洗三遍后，在生理盐水中调整浓度至3*108CFU/mL。ii)单侧脑室注射菌液：戊巴比妥麻醉小鼠后，剃除头顶毛发。酒精擦拭后，剪开头皮。用10％双氧水溶液去除脑膜。脑定位仪定位AV,-1.6；ML,+1.5；DV,-1.6后，用微型颅钻钻孔。微量注射器吸取0.2μL菌液(65000CFU),以0.4μL/min的速度注入脑室。随后留针5min，缓慢抽出。用电热器看护昏迷小鼠。24h后麻醉小鼠，用4％冰多聚甲醛心脏灌流，取病灶左脑。步骤三：组织石蜡包埋切片i)取材：新鲜左脑固定于4％多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织放入写有对应编号的脱水盒内。ii)脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75％酒精2h-85％酒精2h-90％酒精2h-95％酒精1h-无水乙醇I1h-无水乙醇II1h-二甲苯I45min-二甲苯II45min-蜡I1h-蜡II1h-蜡III1h。iii)包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入不锈钢包埋模具，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入不锈钢包埋模具。于冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从不锈钢包埋模具中取出并修整蜡块。iv)切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。切片漂浮于摊片机45℃温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进65℃烘箱内烤片。步骤四：HE染色i)石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种谷胱甘肽在制备防治鼠伤寒沙门氏菌致中枢神经系统感染的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种谷胱甘肽在制备防治鼠伤寒沙门...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁艳，王广基，沈博宇，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32