本发明专利技术涉及新药开发与应用领域，特别涉及DHNB缩氨基脲化合物在预防、治疗高尿酸血症和/或痛风领域的应用。该发明专利技术提供了一种如式I所示的新型化合物DHNB缩氨基脲的合成及其在降低血尿酸水平药物的应用。药效学实验表明本发明专利技术得到的DHNB缩氨基脲化合物比DHNB和阳性药别嘌醇更高效，且安全无毒。本发明专利技术提供的应用主要是通过抑制黄嘌呤氧化酶活性作用，从而降低血尿酸水平，能有效预防、治疗痛风和高尿酸血症，为临床治疗痛风和高尿酸血症提供了一种新的药物选择。
Synthesis of a new compound DHNB semicarbazide and its application in prevention and treatment of gout and hyperuricemia
The invention relates to the field of new drug development and application, in particular to the application of DHNB semicarbazide compound in the field of prevention and treatment of hyperuricemia and/or gout. The invention provides the synthesis of a novel compound DHNB semicarbazide as shown in formula I and its application in drugs for lowering blood uric acid level. Pharmacodynamic experiments show that the DHNB semicarbazide compound obtained by the invention is more efficient than DHNB and the positive drug allopurinol, and is safe and non-toxic. The application of the present invention mainly reduces the level of blood uric acid by inhibiting the activity of xanthine oxidase, effectively prevents and treats gout and hyperuricemia, and provides a new drug choice for clinical treatment of gout and hyperuricemia.
【技术实现步骤摘要】
一种新型化合物DHNB缩氨基脲的合成及其在防治痛风与高尿酸血症的应用
本专利技术属于新药开发与应用领域，涉及DHNB缩氨基脲化合物的合成及其在预防、治疗痛风和高尿酸血症领域的应用。
技术介绍
痛风是一种单钠尿酸盐（MSU）沉积所致的晶体相关性关节病，与嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄减少所致的高尿酸血症（hyperuricemia，HUA）直接相关。中国HUA的患病率呈逐年上升趋势，发病年龄越趋低龄化，现已成为仅次于糖尿病的第二大代谢性疾病，给社会和家庭带来了巨大的经济和精神负担。近十年的流行病学研究显示，中国不同地区HUA患病率存在较大的差别，为5.46%~19.30%，其中男性为9.2%~26.2%，女性为0.7%~10.5%，总体男性高于女性。痛风是长期嘌呤代谢障碍（或）尿酸排泄减少，血尿酸增高引起组织损伤的一组临床综合征，高尿酸血症是痛风最重要的生化基础。尿酸由饮食摄入和体内分解的嘌呤化合物在肝脏中产生，约2/3尿酸通过肾脏排泄，其余由消化道排泄。痛风包括急性痛风性关节炎和慢性痛风石疾病，血尿酸升高除可引起痛风之外，还与肾脏、内分泌代谢和心脑血管等系统疾病的发生和发展有关。目前治疗痛风的常规药物主要有秋水仙碱、非甾体类抗炎药、别嘌呤醇、非布索坦和苯溴马隆等。这些药物以抑制尿酸的形成或（和）促进尿酸的排泄达到缓解和治疗痛风与高尿酸血症的目的。体内尿酸的合成与嘌呤代谢有关，黄嘌呤氧化酶（XOD）是体内尿酸生成的关键酶，它能催化次黄嘌呤和黄嘌呤转化为尿酸。体内尿酸过多可导高尿酸血症，进而导致痛风。别嘌呤醇和非布索坦是XOD的抑制剂，这两种药物通过抑制XOD，减少体内尿酸合成，从而有效治疗痛风。但它们在临床使用中都具有一定的副作用，如别嘌呤醇可引起皮肤过敏反应及肝肾功能损伤，严重者可发生致死性剥脱性皮炎等超敏反应综合征；非布索坦可引起肝功能损害、恶心、皮疹等。服用苯溴马隆的不良反应有胃肠不适、腹泻、皮疹和肝功能损害等；秋水仙碱不良反应常见有恶心、呕吐、腹泻、腹痛、肝功能障碍和肾功能损伤等。可见目前预防和治疗痛风与高尿酸血症的药物虽然较多，但是大多数的药物副作用较大，影响生活质量。因此，开发新型的治疗高尿酸血症和痛风的药物仍然是目前医药界研究的热点。有研究表明，3,4-二羟基-5-硝基苯甲醛（DHNB）属于原儿茶醛的一种衍生物，是一种较强的XOD抑制剂，可作为一种治疗高尿酸血症和痛风潜在的药物。DHNB能够降低高尿酸小鼠血清尿酸水平，且大剂量的DHNB对小鼠没有任何副作用(500mg/kg)。但DHNB抑制XOD活性具有时间依赖性的缺陷，作用时间短。有鉴于此，本专利技术提供了一种如式I所示的化合物DHNB缩氨基脲，将DHNB和氨基脲进行醛胺缩合合成DHNB缩苯基氨基硫脲，并进行纯化，对其反复进行体内外药效学实验，体内测定其对高尿酸模型小鼠血清XOD，肝脏XOD的影响，血清尿酸的影响；体外利用多功能酶标仪测定其对XOD的抑制作用，探讨其抑制机制。并进行急性毒性试验。从而获得高效低毒的XOD抑制剂DHNB缩氨基脲。
技术实现思路
鉴于以上背景，本专利技术提供了一种如式I所示的新型DHNB缩氨基脲化合物的合成及其在降低血尿酸水平药物的应用。药效学实验表明本专利技术得到的DHNB缩氨基脲化合物比DHNB和阳性药别嘌醇更高效，且安全无毒。本专利技术提供的应用主要是通过抑制黄嘌呤氧化酶活性作用，从而降低血尿酸水平，能有效预防、治疗痛风和高尿酸血症，为临床治疗痛风和高尿酸血症提供了一种新的药物选择。附图说明图1是DHNB缩氨基脲的化学合成路线。图2是DHNB缩氨基脲的红外光谱。图3是DHNB缩氨基脲的氢谱。图4是DHNB缩氨基脲质谱（正离子）。图5是酶的浓度对酶促反应速度的影响。图6是DHNB缩氨基脲抑制黄嘌呤氧化酶催化的Lineweaver-Burk曲线。图7是DHNB缩氨基脲对高尿酸模型小鼠血清XOD活力的抑制作用。图8是DHNB缩氨基脲对高尿酸模型小鼠血尿酸的作用。图9是DHNB缩氨基脲对高尿酸模型小鼠肝脏XOD活力的抑制作用。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的具体实施例做详细说明。DHNB缩氨基脲化合物的合成、分离与纯化所述的合成步骤：取0.01mol氨基脲于1000ml三颈烧瓶，再加入200ml的甲醇加热回流，直到氨基脲完全溶解。取0.01molDHNB于200ml甲醇中，解热溶解。待氨基脲完全溶解之后，用恒压滴液漏斗将溶解DHNB的甲醇慢慢滴入三颈烧瓶中，且在20min内滴完，滴完之后，往三颈烧瓶中滴入2滴冰乙酸作催化剂。继续回流反应2h，TLC跟踪监测，直至原料点消失，则反应完全。具体反应式如图1。DHNB缩氨基脲化合物的分离和纯化：回流反应结束后，自然冷却至室温，封口放置4℃冰箱过夜至晶体完全析出，用冰乙醇洗净产物，真空干燥得砖红色粉末产物。缩氨基脲化合物结构表征DHNB缩氨基脲化合物结构表征：DHNB缩氨基脲，砖红色粉末（CH3OH）IR(KBr)，νmax3420,2989,1617.6,1691,1540cm–1;红外图谱见图2。1HNMR(600HZ,DMSO-D6)δ10.175(S,1H,NH),δ7.718(S,1H,CH),δ6.438(S,2H,NH2),δ9.458(S,1H,OH-Ph-H),δ7.885,7.881(d,1H,OH-Ph-H),δ7.626,7.623(d,1H,Ph-H),δ7.390,7.387(d,1H,Ph-H);氢谱见图3。ESI-MS(m/zMr=240)(C8H8O5N4,M+H+)，质谱图见图4。实验材料DHNB缩氨基脲、磷酸盐缓冲液PBS、黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、别嘌呤醇等。实验方法酶活力检测及样品抑制XOD测定：实验设置正常组(不加样品)、样品组，将黄嘌呤底物溶液100uL,样品溶液依次加入96孔板，其它用PBS代替，保持整个体系的体积（300uL）一致，最后加入XOD溶液3mL启动反应，测定290nm处的吸光度值，间隔10s记录一次，共测2min内吸光度变化值，以时间为自变量，吸光度值为因变量，可以得到一条吸光度-时间的直线，计算直线的斜率Rate(dA/min)。每个样品需要平行操作3次，取平均值计算样品的抑制率。抑制率（%）的计算通过对正常组及样品组2min内的吸光度随时间的变化值，即直线斜率K的大小来计算酶活力的大小，从而求得抑制率。抑制率计算公式如下：抑制率（%）＝[（K1－K2）/K1]×100%。其中K1表示正常组的直线斜率，K2表示样品组的直线斜率。半数抑制浓度IC50的计算以样品浓度为自变量X,抑制率为因变量Y，采用SPSS19.0统计软件包计算回归方程。再根据回归方程计算抑制率为50%时的样品浓度，即半数抑制浓度IC50。DHNB缩氨基脲对XOD抑制机理在测活体系中，固定底物黄嘌呤浓度，加入不同浓度的DHNB缩氨基脲，改变XOD的质量浓度，测定不同浓度的抑制剂对XOD催化氧化黄嘌呤能力的影响。以酶促反应的速度对酶浓度作图，若得到一系列通过原点的直线，则为可逆抑制；若得到一组平行线，则为不可逆抑制。DHNB缩氨基脲对XOD抑制类型固定XOD的质量浓度，改变底物黄嘌呤的浓度，测定不同浓度的抑制剂对酶活力的影响。通过Lineweaver-Burk方程本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种预防、治疗痛风与高尿酸血症的化学合成药物3,4‑二羟基‑5‑硝基苯甲醛（DHNB）缩氨基脲，其特征在于：所述药物由DHNB和氨基脲经醛胺缩合反应合成并纯化。
【技术特征摘要】
1.一种预防、治疗痛风与高尿酸血症的化学合成药物3,4-二羟基-5-硝基苯甲醛（DHNB）缩氨基脲，其特征在于：所述药物由DHNB和氨基脲经醛胺缩合反应合成并纯化。2.根据权利要求1所述的预防、治疗痛风与高尿酸血症的药物DHNB缩氨基脲，其特征在于，DHNB缩氨基脲作为化学药物配成的片剂、胶囊、粒剂、脂质体、注射液、缓释控释制剂等其它剂型。3.根据权利要求1所述的预防、治疗痛风与高尿酸血症的药物DH...
【专利技术属性】
技术研发人员：余雄英，廖永翠，郑里翔，董欢欢，
申请(专利权)人：江西中医药大学，
类型：发明
国别省市：江西,36
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