一种引物组合物、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种引物组合物。本发明专利技术的引物组合物由SEQ ID NO：1‑14引物组成。所述引物对由其对应的上游引物和下游引物组成。利用本发明专利技术的引物组合物，可以就被检测者的皮肤弹性能力以及皮肤抗氧化能力作出分析，为皮肤护理提供辅助检测与建议支持。具有灵敏度高、分辨力好、结果准确等优点。本发明专利技术还公开了一种引物组合物的检测方法以及基因检测试剂盒。

A Primer Composition, Kit and Detection Method

The invention discloses a primer composition. The primer composition of the present invention is composed of SEQ ID NO:1_14 primers. The primer pair consists of its corresponding upstream and downstream primers. The primer composition of the invention can be used to analyze the skin elasticity and antioxidant ability of the tester, and provide auxiliary detection and suggestion support for skin care. It has the advantages of high sensitivity, good resolution and accurate results. The invention also discloses a detection method of primer composition and a gene detection kit.

【技术实现步骤摘要】
一种引物组合物、试剂盒及检测方法
本专利技术属于生物
，具体涉及用于一种引物组合物及其检测方法和带有该引物组合物的试剂盒。
技术介绍
基因也称为遗传因子，是细胞内遗传物质的结构和功能单位。所有生物都含有他们各自的基因。通过指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息，从而控制生物个体的性状表现。单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的90％以上。SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～1000个碱基对中就有1个，估计其总数可达300万个甚至更多。有大量科研结果表明，不同SNP的组成与疾病存在着关联关系，也与不同个体的成长、发育、衰老有着密切关联。传统的皮肤管理建议是基于询问、观察皮肤外观、触摸皮肤质感等结果，干扰因素较多，也不易制定具有针对性的建议和非诊疗护理方案，效果必然大打折扣。通过对人体特定SNP位点进行检测与鉴定，可以辅助专业人员从根本上进行掌握受检人员皮肤的状态，并有更科学的认识与了解，为为受检人员提供更有针对性的皮肤护理指导建议。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种引物组合物、所述引物组合物的检测方法以及含有所述引物组合物的基因检测试剂盒。本专利技术提供的一种基因检测引物组合物，所述引物组合物包含SEQIDNO.1-2所示的引物序列、SEQIDNO.3-4所示的引物序列、SEQIDNO.5-6所示的引物序列、SEQIDNO.7-8所示的引物序列、SEQIDNO.9-10所示的引物序列、SEQIDNO.11-12所示的引物序列、SEQIDNO.13-14所示的引物序列，其中引物序列SEQIDNO.1-2用于扩增Catalase基因，由所述引物序列SEQIDNO.1-2经PCR扩增得到的产物片段763bp，引物序列SEQIDNO.3-4用于扩增GPX1基因，由所述引物序列SEQIDNO.3-4经PCR扩增得到的产物片段404bp，引物序列SEQIDNO.5-6用于扩增IL6基因，由所述引物序列SEQIDNO.5-6经PCR扩增得到的产物片段459bp，引物序列SEQIDNO.7-8用于扩增MMP1基因，由所述引物序列SEQIDNO.7-8经PCR扩增得到的产物片段458bp，引物序列SEQIDNO.9-10用于扩增MMP3基因，由所述引物序列SEQIDNO.9-10经PCR扩增得到的产物片段422bp，引物序列SEQIDNO.11-12用于扩增MMP9基因，由所述引物序列SEQIDNO.11-12经PCR扩增得到的产物片段562bp，引物序列SEQIDNO.13-14用于扩增NFE2L2基因，由所述引物序列SEQIDNO.13-14经PCR扩增得到的产物片段496bp。本专利技术还保护一种应用所述引物组合物的检测方法，包括如下步骤：从生物样本中提取待测样本DNA，以待测样本DNA为模板，分别用所述引物对进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；将所述PCR扩增产物进行电泳、染色及鉴定。上述方法在PCR扩增过程中，按照30μL总体反应体系计算，所述PCR扩增的反应体系如下：试剂名称使用量ul终浓度2×pfu-PCRmastermix151×PrimerF(10uM)0.750.3uMPrimerR(10uM)0.750.3uMDNA3100ngddwater10.5-上述方法在PCR扩增过程中的反应程序为：本专利技术所保护的检测方法中，所述鉴定可评估皮肤抗氧化能力，鉴定评估如下：本专利技术所保护的检测方法中，所述鉴定可评估皮肤弹性能力，鉴定方法如下：本专利技术所保护的检测方法中，所述生物样本为人体唾液、口腔拭子样本、毛发样本。本专利技术还保护一种应用本专利技术所保护的引物组合物用于辅助皮肤护理的基因检测试剂盒。所述试剂盒中，还包括用于提取基因组DNA的试剂或/和用于PCR扩增的试剂。所述试剂盒中的各个组分可为液体，也可为冻干粉。本专利技术所保护的试剂盒，作为进一步方案，可通过本专利技术所保护的检测方法，鉴定评估皮肤的抗氧化能力。本专利技术所保护的试剂盒，作为进一步方案，可通过本专利技术所保护的检测方法，鉴定评估皮肤的弹性能力。附图说明下面结合附图与具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。图1是实施例中的Catalase、GPX1、IL6、MMP1、MMP3、MMP9、NFE2L2基因的PCR产物电泳图。图2是实施例中Catalase基因的Rs1001179位点的测序峰图。图3是实施例中GPX1基因的Rs1050450位点的测序峰图。图4是实施例中IL6基因的Rs1800795位点的测序峰图。图5是实施例中MMP1基因的Rs1799750位点的测序峰图。图6是实施例中MMP3基因的Rs3025058位点的测序峰图。图7是实施例中MMP9基因的Rs3918242位点的测序峰图。图8是实施例中NFE2L2基因的Rs35652124位点的测序峰图。图9是实施例中NFE2L2基因的Rs6706649位点的测序峰图。图10是实施例中NFE2L2基因的Rs6721961位点的测序峰图。具体实施方式下面结合本专利技术中的具体实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例：一、取样使用口腔拭子获取被测人员口腔样本，在取样前30分钟，未进食或饮水，将拭子棉签伸进口腔内，在内侧颊粘膜处反复擦拭20次以上，至棉头已经被唾液充分浸润，取出口腔拭子放入采集管中并沿着拭子折痕折断手柄，随机盖上样本采集管盖子，完成样品取样。一、DNA抽提1)从已完成取样的采集管中提取适量样本液，加200ulbufferGA，振荡至彻底悬浮；2)加20ul蛋白酶K溶液，混匀，56℃适当加热消化；3)简短离心，加入200ulbufferGB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变澄清，简短离心去除管壁水珠，溶液变澄清；4)加入200ul无水乙醇，充分震荡混匀15秒，简短离心；5)将上一步所得溶液转移至吸附柱CB3中(吸附柱放入2ml收集管中)，12000rpm离心30秒，弃掉废液，将吸附柱放回收集管中；6)向吸附柱加500ulbufferGD，12000rpm离心30秒，弃掉废液，将吸附柱放回收集管中；7)加入600ulbufferPW，12000rpm离心30秒漂洗，重复一次此操作；8)吸附柱放入2ml收集管中离心2分钟；9)将吸附柱放入一干净的1.5mlEP管中室温放置3至5分钟；10)向吸附柱滤膜中央加80ul洗脱缓冲液80ul，放置2至5分钟，12000rpm离心2分钟；11)弃掉吸附柱，测定DNA浓度进行下一步实验。三、PCR反应1)PCR扩增位点序列查找：2)设计引物：3)PCR扩增：PCR反应体系(30ul)5)混匀，上机扩增。四、实验结果1)DNA浓度结果：样本名字Result(ng/ul)A260/280口腔拭子137.191.752)检测鉴定结果3)简易结论被测人员具有较高的皮肤弹性能力但是具有非显著优势的抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因检测引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包含SEQ ID NO.1‑2所示的引物序列、SEQ ID NO.3‑4所示的引物序列、SEQ ID NO.5‑6所示的引物序列、SEQ ID NO.7‑8所示的引物序列、SEQ ID NO.9‑10所示的引物序列、SEQ ID NO.11‑12所示的引物序列、SEQ ID NO.13‑14所示的引物序列，其中引物序列SEQ ID NO.1‑2用于扩增Catalase基因，由所述引物序列SEQ ID NO.1‑2经PCR扩增得到的产物片段763bp，引物序列SEQ ID NO.3‑4用于扩增GPX1基因，由所述引物序列SEQ ID NO.3‑4经PCR扩增得到的产物片段404bp，引物序列SEQ ID NO.5‑6用于扩增IL6基因，由所述引物序列SEQ ID NO.5‑6经PCR扩增得到的产物片段459bp，引物序列SEQ ID NO.7‑8用于扩增MMP1基因，由所述引物序列SEQ ID NO.7‑8经PCR扩增得到的产物片段458bp，引物序列SEQ ID NO.9‑10用于扩增MMP3基因，由所述引物序列SEQ ID NO.9‑10经PCR扩增得到的产物片段422bp，引物序列SEQ ID NO.11‑12用于扩增MMP9基因，由所述引物序列SEQ ID NO.11‑12经PCR扩增得到的产物片段562bp，引物序列SEQ ID NO.13‑14用于扩增NFE2L2基因，由所述引物序列SEQ ID NO.13‑14经PCR扩增得到的产物片段496bp。...

【技术特征摘要】
1.一种基因检测引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包含SEQIDNO.1-2所示的引物序列、SEQIDNO.3-4所示的引物序列、SEQIDNO.5-6所示的引物序列、SEQIDNO.7-8所示的引物序列、SEQIDNO.9-10所示的引物序列、SEQIDNO.11-12所示的引物序列、SEQIDNO.13-14所示的引物序列，其中引物序列SEQIDNO.1-2用于扩增Catalase基因，由所述引物序列SEQIDNO.1-2经PCR扩增得到的产物片段763bp，引物序列SEQIDNO.3-4用于扩增GPX1基因，由所述引物序列SEQIDNO.3-4经PCR扩增得到的产物片段404bp，引物序列SEQIDNO.5-6用于扩增IL6基因，由所述引物序列SEQIDNO.5-6经PCR扩增得到的产物片段459bp，引物序列SEQIDNO.7-8用于扩增MMP1基因，由所述引物序列SEQIDNO.7-8经PCR扩增得到的产物片段458bp，引物序列SEQIDNO.9-10用于扩增MMP3基因，由所述引物序列SEQIDNO.9-10经PCR扩增得到的产物片段422bp，引物序列SEQIDNO.11-12用于扩增MMP9基因，由所述引物序列SEQIDNO.11-12经PCR扩增得到的产物片段562bp，引物序列SEQIDNO.13-14用于扩增NFE2L2基因，由所述引物序列SEQIDNO.13-14经P...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓峰，
申请(专利权)人：橙狐上海信息科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：上海,31