绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记、引物及应用制造技术

本发明专利技术属于绒山羊基因检测技术领域，特别涉及一种绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记、引物及应用，包括分子标记C463T，且核酸序列自5’端起第11位碱基是SNP位点。分子标记C463T可应用于绒山羊的多胎性状及羊绒细度研究。

Molecular Markers, Primers and Applications of ESR Gene in Cashmere Goats

The invention belongs to the technical field of cashmere goat gene detection, in particular to a molecular marker, primer and application of cashmere goat fecundity gene ESR, including a molecular marker C463T, and the 11th base of nucleic acid sequence from 5'end is SNP site. Molecular marker C463T can be used to study the fertility traits and cashmere fineness of cashmere goats.

【技术实现步骤摘要】
绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记、引物及应用
本专利技术属于绒山羊基因检测
，特别涉及一种绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记、引物及应用。
技术介绍
繁殖性状在山羊育种中具有较高的经济价值，提高母羊的产仔数对于提高整个养羊业的生产效益具有十分重要的意义。母羊的多羔基因是决定绒山羊繁殖性状的关键因素，而产羔数是一个遗传力很低的数量性状，其遗传力只有0.1左右，因此难以用常规的育种技术来改良产羔数性状。辽宁绒山羊是低繁群体，发情周期和发情时间具有明显的时间规律性，产羔数受外界因素影响很大。因此，提高辽宁绒山羊的繁殖性状、探寻控制繁殖率的相关基因的关键位点至关重要。繁殖力是一个复杂的过程，排卵率、产仔数等繁殖力性状可以由许多小效基因调控，有时也可以由单基因调控，称为繁殖力(FEC)基因。关于繁殖力的关键候选基因已有较多研究，但国内外还没有关于ESR基因对辽宁绒山羊的产羔数及产绒性能的进行关联分析。雌激素(ESR)能刺激雌性动物的副性腺和生殖道，引起第二性征的发育以及性周期的变化，协同FSH、LH作用能使卵泡产生FSH、LH受体。结合了配体的ESR与特定的DNA序列如雌激素应答元件(ERE)相互作用可以改变雌激素基因的转录，进一步影响雌性动物的第二性征、繁殖周期、生殖力和妊娠维持，在胚胎的生长发育中其重要作用ESR的多态性已有研究成果，但大多数都是关于猪的。然而，关于辽宁绒山羊的类似调查报告较少，因此本研究是首次针对群体进行的调查，旨在识别ESR基因的多态性，并将它们与产仔数联系起来。在此基础上，分析了辽宁绒山羊产仔数与产绒量的相关性，以期检验多羔基因优势基因型及产绒优势基因型。
技术实现思路
本专利技术分子标记C463T可应用于绒山羊的多胎性状及羊绒细度研究。本专利技术提供了一种绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记，所述分子标记为分子标记C463T；其中，分子标记C463T的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，为：5’-ggaaggaagg[c/t]ccctaattgtca-3’，且核酸序列自5’端起第11位碱基是SNP位点。一种上述的绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记的PCR特异性扩增引物，分子标记C463T的引物包括：F：5’-gctcggttctatgtggca-3’，如SEQIDNO.2所示；R：5’-actggtggatgtggaggtt-3’，如SEQIDNO.3所示。一种上述绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记在绒山羊的多胎性状及羊绒细度研究中的应用，包括以下步骤：S1，提取待测绒山羊的基因组DNA；S2，用分子标记C463T的引物组进行PCR扩增；其中，扩增体系为：DNA模板溶液1μL，各引物溶液0.5μL，10mmol/L的10×dNTP取0.5μL，10×Taq缓冲液2.5μL，5U/μL的Taq酶取0.2μL，ddH2O取20μL；引物浓度均为10μmol/L，DNA模板溶液OD260/280：1.846；S3，1％琼脂糖凝胶与溴化乙锭进行电泳鉴定分析；S4，判断目标SNP的基因型；S5，若含有标记目标SNP“CC”组合型，则待测绒山羊为候选的既具有多胎性状又能调控羊绒细度的绒山羊。优选地，扩增程序均为：95℃3min；94℃30s、58℃30s、72℃30-60s、35个循环；72℃10min。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术分子标记C463T可应用于绒山羊的多胎性状及羊绒细度研究，也可在绒山羊生产实践中应用分子标记C463T作为高繁细型品系选种选育的分子标记辅助选择指标，应用前景良好。附图说明图1为本专利技术实施例2中分子标记C463T的SNP位点图。具体实施方式下面结合附图1对本专利技术的一个具体实施方式进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制，下述实验方法采用分子生物实验技术包括DNA提取、PCR扩增、PCR产物的荧光值读取等如无特殊说明，均为常规方法。实施例1一种绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记，分子标记为分子标记C463T；其中，分子标记C463T的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，为：5’-ggaaggaagg[c/t]ccctaattgtca-3’，且核酸序列自5’端起第11位碱基是SNP位点。一种上述的绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记的PCR特异性扩增引物，分子标记C463T的引物包括：F：5’-gctcggttctatgtggca-3’，如SEQIDNO.2所示；R：5’-actggtggatgtggaggtt-3’，如SEQIDNO.3所示。一种上述绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记在绒山羊的多胎性状及羊绒细度研究中的应用，包括以下步骤：S1，提取待测绒山羊的基因组DNA；S2，用分子标记C463T的引物组进行PCR扩增；其中，扩增体系为：DNA模板溶液1μL，各引物溶液0.5μL，10mmol/L的10×dNTP取0.5μL，10×Taq缓冲液2.5μL，5U/μL的Taq酶取0.2μL，ddH2O取20μL；引物浓度均为10μmol/L，DNA模板溶液OD260/280：1.846；扩增程序均为：95℃3min；94℃30s、58℃30s、72℃30-60s、35个循环；72℃10min；S3，1％琼脂糖凝胶与溴化乙锭进行电泳鉴定分析；S4，采用分子标记C463T引物组判断目标SNP的基因型；S5，若含有标记目标SNP“CC”组合型，则待测绒山羊为候选的既具有多胎性状又能调控羊绒细度的绒山羊。实施例2试验方法：利用实施例1中绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记的应用方法，对辽宁省畜牧科学研究院所提供的辽宁绒山羊在合格兽医的监督下，从颈静脉采集提取DNA的血样。每只母羊取静脉血5mL，用酚-氯仿法提取基因组DNA。然后将DNA溶于TE缓冲液(10mmTris-HCl，1mmedta，pH8.0)中，并在－20℃中保存备用。根据PCP-SSCP显带模式对不同基因型进行分型，计算基因型和等位基因频率、χ2值、多态信息含量(PIC)、等位基因有效数(Ne)和杂合度(He)，计算单核苷酸多态性(SNPs)或ESR基因型之间的关系。应用SPSS软件(20.0)对具有繁殖性能性状的基因进行最小二乘法分析，结果以“均值±标准误”的形式表达。结果如下：筛选得到的SNP位点：如图1所示，测序后通过基因序列与波峰的比对发现，在ESR基因3’-UTR区发现了1个分子标记-C463T，SNP位点是C/T的突变。基因型频率和基因频率统计：如表1所示，C463T突变的基因频率和基因型频率在群体内有比较明显的差异，C等位基因频率都大于0.5，说明，C等位基因在辽宁绒山羊群中是优势基因且纯合性比较好；在SNP突变位点，U基因(C)为优势等位基因，Uu(CT)基因型频率最高，UU(CC)，uu(TT)最低。在本试验群体中，经Hardy-Weinberg检验，C463T位点χ2检验值小于0.1，说明实际检测次数与理论检测次数非常接近，实验数据比较可靠，P值大于0.05，说明两位点处于Hardy-Weinberg平衡状态，基因频率和基因型频率在世代遗传中可稳定遗传给后代。表1ESR基因在群体中的遗传多样性分析基因座位在群体中的遗传特性：由表2可得分子标记C463T多态信息含量PIC在0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记，其特征在于，所述分子标记为分子标记C463T；其中，分子标记C463T的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，为：5’‑ggaaggaagg[c/t]ccctaattgtca‑3’，且核酸序列自5’端起第11位碱基是SNP位点。

【技术特征摘要】
1.一种绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记，其特征在于，所述分子标记为分子标记C463T；其中，分子标记C463T的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，为：5’-ggaaggaagg[c/t]ccctaattgtca-3’，且核酸序列自5’端起第11位碱基是SNP位点。2.一种权利要求1所述的绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记的PCR特异性扩增引物，其特征在于，分子标记C463T的引物包括：F：5’-gctcggttctatgtggca-3’，如SEQIDNO.2所示；R：5’-actggtggatgtggaggtt-3’，如SEQIDNO.3所示。3.一种根据权利要求1所述的绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记在绒山羊的多胎性状及羊绒细度研究中的应用。4.如权利要求3所述的绒山羊繁殖力基因ESR的分子标记在绒山羊的多胎性状及羊绒细度研究中的应用，其特征在于，包...

【专利技术属性】
技术研发人员：王泽英，白文林，岳畅，朱延旭，王占红，郭丹，郭素玲，郭素平，李丰田，赵艳娇，郑圆媛，惠太宇，孙家明，蔡伟东，白智贤，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21