半滑舌鳎性逆转遗传控制位点、包含其的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种半滑舌鳎性逆转遗传控制位点、包含其的试剂盒及其应用。该半滑舌鳎性逆转遗传控制位点包括Z染色体上如下一个或多个核苷酸位点：第8564889位、第8565011位、第8565016位、第8565018位、第8565031位、第8565187位、第8565217位、第8565235位以及Z染色体上第8565220位与第8565221位之间的核苷酸位点。通过从雌鱼性逆转的遗传控制角度，发现了控制遗传雌鱼发生性逆转的新的分子开关。利用任意一个或多个新发现的遗传位点能够控制半滑舌鳎的雌雄鱼的交配方式，使人工养殖的半滑舌鳎后代中不发生性逆转的雌鱼比例提高，进而提高养殖生产效益。

Sex reversal genetic control loci, kits containing them and their application in semi-smooth tongue sole

The invention provides a semi-smooth tongue sole sex reversal genetic control site, a kit containing the genetic control site and its application. The genetic control loci for sex reversal in semi-smooth tongue sole include one or more nucleotide loci on Z chromosome as follows: 8564889, 8565011, 8565016, 8565018, 8565031, 8565187, 8565217, 8565235, and between 8565220 and 8565221 on Z chromosome. From the perspective of genetic control of female sex reversal, a new molecular switch was found to control female sex reversal. Using any one or more newly discovered genetic loci can control the mating mode of male and female Half-Smooth tongue sole, and increase the proportion of female fish that do not undergo sexual reversal in the offspring of artificial Half-Smooth tongue sole, thereby improving the production efficiency of culture.

【技术实现步骤摘要】
半滑舌鳎性逆转遗传控制位点、包含其的试剂盒及其应用
本专利技术涉及水产养殖领域，具体而言，涉及一种半滑舌鳎性逆转遗传控制位点、包含其的试剂盒及其应用。
技术介绍
半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)隶属硬骨鱼纲(Osteichthyes)鲽形目(Pleuronectiformes)舌鳎科(Cynoglossidae)舌鳎属(Cynoglossus)，俗称牛舌头，龙脷等，是当前海水养殖的重要品种之一。半滑舌鳎的性染色体为ZW/ZZ型雌性异配型，其雌、雄鱼生长速度差异比较大，雌鱼的生长速度是雄鱼的2-4倍，雄鱼经过两年培育尚不能达到商品规格，并且在苗种期存在着遗传雌鱼向表型雄鱼单向性逆转的现象。研究发现在人工养殖的半滑舌鳎群体中遗传雌鱼发生性逆转的比例较高，且发生性逆转的伪雄鱼生长速度以及个体大小与遗传雄鱼类似，增加了半滑舌鳎的养殖成本，因此，如何提苗种的雌性率以及如何降低苗种的性逆转率成为了目前的研究重点。一直以来，科研人员都在努力探索半滑舌鳎性逆转的规律，以期提高雌性苗种率，从而提高半滑舌鳎养殖效益。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种半滑舌鳎性逆转遗传控制位点、包含其的试剂盒及其应用，以进一步提高半滑舌鳎养殖的经济效益。为了实现上述目的，根据本专利技术的第一个方面，提供了一种半滑舌鳎性逆转遗传控制位点，该半滑舌鳎性逆转遗传控制位点包括Z染色体上如下一个或多个核苷酸位点：第8564889位、第8565011位、第8565016位、第8565018位、第8565031位、第8565187位、第8565217位、第8565235位以及Z染色体上第8565220位与第8565221位之间的核苷酸位点，且如下一个或多个核苷酸位点发生突变，半滑舌鳎的遗传雌鱼发生性逆转：第8564889位核苷酸发生G>A的突变、第8565011位核苷酸发生C>T的突变、第8565016位核苷酸发生碱基T的缺失、第8565018位核苷酸发生C>A的突变、第8565031位核苷酸发生T>C的突变、第8565187位核苷酸发生G>C的突变、第8565217位核苷酸发生G>A的突变、第8565235位核苷酸发生T>G的突变以及第8565220位核苷酸与第8565221位核苷酸之间存在7bp的AAACTAA的插入片段。为了实现上述目的，根据本专利技术的第二个方面，提供了一种半滑舌鳎性逆转检测试剂盒，该试剂盒包括用于扩增Z染色体上如下任意一个或多个核苷酸位点的第一引物序列：第8564889位、第8565011位、第8565016位、第8565018位、第8565031位、第8565187位、第8565217位、第8565235位以及第8565220位与第8565221位之间的核苷酸位点。进一步地，第一引物序列为：ST-889-F：SEQIDNO:1:5'-CAACTAAGACTTTTCAAACCC-3'和ST-889-R：SEQIDNO:2：5'-TTAAAATCCCAACACTCACAC-3'。进一步地，试剂盒还包括用于扩增Z染色体上第6676874位核苷酸的第二引物序列。进一步地，第二引物序列为：ST-874-F：SEQIDNO:3:5'-CAGATAGCCAGCACTTAGCCC-3'和ST-874-R：SEQIDNO:4：5'-CCTGTTGTGAGTGGAGTGTGG-3'。根据本专利技术的第三个方面，提供了一种判断或检测半滑舌鳎是否发生性逆转的方法，该方法包括：扩增半滑舌鳎遗传雌鱼Z染色体上涵盖性逆转遗传控制位点的DNA片段，逆转遗传控制位点包含如下任意一个或多个核苷酸位点：第8564889位、第8565011位、第8565016位、第8565018位、第8565031位、第8565187位、第8565217位、第8565235位以及第8565220位与第8565221位之间的核苷酸位点；检测DNA片段比对到参考序列上的性逆转遗传控制位点是否至少为如下情况之一：第8564889位核苷酸为G，或第8565011位核苷酸为C，或第8565016位核苷酸T没有缺失，或第8565018位核苷酸为C，或第8565031位核苷酸为T，或第8565187位核苷酸为G，或第8565217位核苷酸为G，或第8565235位核苷酸为T，或在第8565220位核苷酸与第8565221位核苷酸之间不存在7bp的插入片段AAACTAA；若是，则遗传雌鱼不发生性逆转；若否，则进一步检测遗传雌鱼Z染色体上第6676874位核苷酸的碱基类型；若第6676874位核苷酸的碱基类型为A，则遗传雌鱼不发生性逆转。进一步地，采用SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的第一引物序列扩增涵盖性逆转遗传控制位点的DNA片段；优选地，采用SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示的第二引物序列检测第6676874位核苷酸的碱基类型。根据本专利技术的第四个方面，提供了一种半滑舌鳎的育种方法，该育种方法包括：采用Z染色体上第8564889位核苷酸的基因型为ZGGZGG、ZGGZAA或ZGGZAG的雄性个体与任意雌性个体杂交，得到不发生性逆转的子代雌性个体。进一步地，育种方法包括：采用Z染色体上第6676874位核苷酸和第8564889位核苷酸为如下任意一种基因型的雄性个体与任意雌性个体杂交，得到不发生性逆转的子代雌性个体：ZA,GGZA,GG、ZA,GGZT,GG、ZT,GGZT,GG、ZA,GGZA,AG、ZT,GGZT,AG、ZA,GGZT,AG、ZT,GGZA,AG、ZA,AGZA,AG、ZT,AGZA,AG、ZA,AAZA,AA、ZT,AAZA,AA、ZA,GGZA,AA、ZA,GGZT,AA、ZT,GGZA,AA、ZT,GGZT,AA、ZA,AGZA,AA、ZA,AGZT,AA、ZT,AGZA,AA，其中“,”之前代表第6676874位核苷酸的基因型，“,”之后代表第8564889位核苷酸的基因型。根据本专利技术的第五个方面，提供了一种筛选半滑舌鳎群体中不发生性逆转的雌鱼的方法，该方法包括：检测半滑舌鳎群体中遗传雌鱼的Z染色体上的第6676874位核苷酸是否为A，若为A，则半滑舌鳎群体中遗传雌鱼不发生性逆转；若为T，则进一步检测含有遗传雌鱼的Z染色体上性逆转遗传控制位点的DNA片段与参考序列的比对结果是否发生变异，性逆转遗传控制位点包含如下任意一个或多个核苷酸位点：第8564889位、第8565011位、第8565016位、第8565018位、第8565031位、第8565187位、第8565217位、第8565235位以及第8565220位与第8565221位核苷酸之间的核苷酸位点；若第8564889位、第8565011位、第8565016位、第8565018位、第8565031位、第8565187位、第8565217位或第8565235位的核苷酸未发生碱基突变，或者第8565220位与第8565221位核苷酸之间不存在7bp的AAACTAA插入片段，则遗传雌鱼不发生性逆转。进一步地，采用SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示的第一引物序列扩增检测第6676874位核苷酸是否为A；优选地，采用SEQIDNO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种半滑舌鳎性逆转遗传控制位点，其特征在于，所述半滑舌鳎性逆转遗传控制位点包括Z染色体上如下一个或多个核苷酸位点：第8564889位、第8565011位、第8565016位、第8565018位、第8565031位、第8565187位、第8565217位、第8565235位以及Z染色体上第8565220位与第8565221位之间的核苷酸位点，且如下一个或多个核苷酸位点发生突变，所述半滑舌鳎的遗传雌鱼发生性逆转：第8564889位核苷酸发生G>A的突变、第8565011位核苷酸发生C>T的突变、第8565016位核苷酸发生碱基T的缺失、第8565018位核苷酸发生C>A的突变、第8565031位核苷酸发生T>C的突变、第8565187位核苷酸发生G>C的突变、第8565217位核苷酸发生G>A的突变、第8565235位核苷酸发生T>G的突变以及第8565220位核苷酸与第8565221位核苷酸之间存在7bp的AAACTAA的插入片段。

【技术特征摘要】
1.一种半滑舌鳎性逆转遗传控制位点，其特征在于，所述半滑舌鳎性逆转遗传控制位点包括Z染色体上如下一个或多个核苷酸位点：第8564889位、第8565011位、第8565016位、第8565018位、第8565031位、第8565187位、第8565217位、第8565235位以及Z染色体上第8565220位与第8565221位之间的核苷酸位点，且如下一个或多个核苷酸位点发生突变，所述半滑舌鳎的遗传雌鱼发生性逆转：第8564889位核苷酸发生G>A的突变、第8565011位核苷酸发生C>T的突变、第8565016位核苷酸发生碱基T的缺失、第8565018位核苷酸发生C>A的突变、第8565031位核苷酸发生T>C的突变、第8565187位核苷酸发生G>C的突变、第8565217位核苷酸发生G>A的突变、第8565235位核苷酸发生T>G的突变以及第8565220位核苷酸与第8565221位核苷酸之间存在7bp的AAACTAA的插入片段。2.一种半滑舌鳎性逆转检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于扩增Z染色体上如下任意一个或多个核苷酸位点的第一引物序列：第8564889位、第8565011位、第8565016位、第8565018位、第8565031位、第8565187位、第8565217位、第8565235位以及第8565220位与第8565221位之间的核苷酸位点。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一引物序列为：ST-889-F：SEQIDNO:1:5'-CAACTAAGACTTTTCAAACCC-3'和ST-889-R：SEQIDNO:2：5'-TTAAAATCCCAACACTCACAC-3'。4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于扩增Z染色体上第6676874位核苷酸的第二引物序列；优选地，所述第二引物序列为：ST-874-F：SEQIDNO:3:5'-CAGATAGCCAGCACTTAGCCC-3'和ST-874-R：SEQIDNO:4：5'-CCTGTTGTGAGTGGAGTGTGG-3'。5.一种判断或检测半滑舌鳎是否发生性逆转的方法，其特征在于，所述方法包括：扩增半滑舌鳎遗传雌鱼Z染色体上涵盖性逆转遗传控制位点的DNA片段，所述逆转遗传控制位点包含如下任意一个或多个核苷酸位点：第8564889位、第8565011位、第8565016位、第8565018位、第8565031位、第8565187位、第8565217位、第8565235位以及第8565220位与第8565221位之间的核苷酸位点；检测所述DNA片段比对到参考序列上的所述性逆转遗传控制位点是否至少为如下情况之一：第8564889位核苷酸为G，或第8565011位核苷酸为C，或第8565016位核苷酸T没有缺失，或第8565018位核苷酸为C，或第8565031位核苷酸为T，或第8565187位核苷酸为G，或第8565217位核苷酸为G，或第8565235位核苷酸为T，或在第8565220位核苷酸与第8565221位核苷酸之间不存在7bp的插入片段AAACTAA；若是，则所述遗传雌鱼不发生性逆转；若否，则进一步检测所述遗传雌鱼Z染色体上第6676874位核苷酸的碱基类型；若第6676874位核苷酸的碱基类型为A，则所述遗传雌鱼不发生性逆转。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的第一引物序列扩增涵盖所述性逆...

【专利技术属性】
技术研发人员：李恒德，蒋丽，崔瑜，王伟峰，王悦玲，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11