白酒草皂苷R用于制备造血干细胞动员剂的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种造血干细胞动员剂，其包括：白酒草皂苷R。其还可以进一步包括地塞米松，HS6101等。CD34选择性的表达于早期造血干/祖细胞表面，是造血干细胞分离纯化的主要标记。如果外周血中造血干细胞数量增加，白细胞数量也会增加。因此，外周血白细胞数量可以作为反映外周血造血干细胞含量的一个指标。实验发现注射白酒草皂苷R或地塞米松均可显著增加外周血中白细胞含量，联合用药具有协同作用。发现了一种全新的造血细胞动员剂，毒副作用低，动效果好，和其他药物还具有显著的协同作用。

Hematopoietic Stem Cell Mobilizer and Its Application

The invention discloses a hematopoietic stem cell mobilizer, which comprises liquor grass saponin R. It can further include dexamethasone, HS6101 and so on. The selective expression of CD34 on the surface of early hematopoietic stem/progenitor cells is the main marker for the isolation and purification of hematopoietic stem cells. If the number of hematopoietic stem cells in peripheral blood increases, the number of white blood cells will also increase. Therefore, the number of white blood cells in peripheral blood can be used as an index to reflect the content of hematopoietic stem cells in peripheral blood. It was found that injection of liquor saponin R or dexamethasone could significantly increase the white blood cell content in peripheral blood, and the combination of drugs had a synergistic effect. A new kind of hematopoietic cell mobilization agent has been found, which has low toxicity and side effects, good action effect and remarkable synergistic effect with other drugs.

【技术实现步骤摘要】
造血干细胞动员剂及其应用
本专利技术涉及一种造血干细胞动员剂及其应用，属于生物工程

技术介绍
造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，其尚未发育成熟，是造血细胞和免疫细胞的起源，可以分化为红细胞、白细胞和血小板，还可跨系统分化为多种组织器官的细胞，具有自我更新、多向分化和归巢(即定向迁移至造血组织器官)潜能。造血干细胞是多功能干细胞，又称其为“万用细胞”，它是人体的始祖细胞。造血干细胞移植指的是将异体或自体的造血干细胞移植到受体的体内，担负起相应的功能，包括红细胞系统、白细胞系统、巨核细胞系统及免疫功能的重建。多能造血干细胞存在于骨髓、外周血、脐带等组织中，因此造血干细胞也包含在广义的“骨髓移植”中，国际骨髓移植登记处、欧洲骨髓移植协作组及亚太骨髓移植协作组均以骨髓移植命名上述造血干细胞移植的内容。正常状态下外周血中的干细胞数量很低，将供者骨髓中的造血干细胞动员到外周血是造血干细胞移植的关键。粒细胞集落刺激因子是最常用的造血干细胞动员剂之一，但是作用时间短暂，价格高昂，另外还有约1/3的患者不能动员出足够的造血干细胞。所以需要寻找其他有效的造血干细胞动员方法满足临床应用的需要。本专利技术旨在提供一种造血干细胞动员剂及其应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种造血干细胞动员剂及其应用效。地塞米松是糖皮质激素类药物，常用来促进造血干细胞的动员。研究表明，外周血造血干细胞采集前3h给与静注地塞米松10mg，可以促进骨髓中的造血干细胞释放到外周血中。另外，地塞米松和其他药物联合作用，可促进造血干细胞的动员，联用的药物有沙利度胺、粒细胞集落刺激因子、环磷酰胺、硼替佐米等。地塞米松和糖基化的粒细胞集落刺激因子联合应用，可缩短不良反应的时间。HS6101(6101)是浙江海正药业股份有限公司自主研发的一种小分子脂肽，具有类似rhG-CSF等细胞因子的造血刺激活性。现有技术里有人从白酒草全草的乙醇提取物中分离鉴定2个新的三萜皂苷，分别命名为白酒草皂苷R(conyzasaponinR，1)和白酒草皂苷S(conyzasaponinS，2)，在本申请人的在先申请中，先后发现了上述2个新的三萜皂苷在免疫细胞中的应用，本申请人进一步研究，发现白酒草皂苷R具有动员效果，而且和其他药物联合应用，还具有更好的协同作用，可以大幅度降低不良反应的程度和发生时间，其分子结构式如下：本申请人第一次将白酒草皂苷R用于造血细胞动员，并且发现其和其他药物联合使用具有显著的协同作用。本专利技术所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。一种造血干细胞动员剂，其包括：白酒草皂苷R。作为优选，其还可以进一步包括地塞米松，HS6101。本专利技术的研究方法：材料：SPF级C57BL/6小鼠90只，8-12周龄，雌雄各半，体质量18-24g，购自中科院上海实验动物中心。HS6101购自浙江海正药业股份有限公司。Ficoll-Hypague、地塞米松、甲基纤维素购自Sigma公司；Ficoll-PaquePlus淋巴细胞分离液购自美国GE公司；牛血清白蛋白、胎牛血清、谷氨酰胺、青霉素、链霉素购自Gibco公司；IMDM培养液购自HyClone公司。分组给药方法：90只C57BL/6小鼠随机分为6组：对照组、HS6101组、地塞米松组、白酒草皂苷R组、酒草皂苷R+地塞米松组，酒草皂苷R+HS6101，每组15只。依次按HS61018mg/kg，地塞米松0.2mg/kg，酒草皂苷R1mg/kg的剂量皮下注射，对照组注射等体积的生理盐水。注射后0，4，12h采集外周血和骨髓血，每个时间点5只。CD34选择性的表达于早期造血干细胞表面，是造血干细胞分离纯化的主要标记。流式细胞仪检测发现，白酒草皂苷R动员后小鼠骨髓和外周血CD34+细胞明显高于对照组，表明白酒草皂苷R可以促进造血干细胞的动员，与单用HS6101或地塞米松比起来，白酒草皂苷R和其联合应用可以显著增加循环外周血中CD34+细胞含量，提高造血干细胞的动员能力。如果外周血中造血干细胞数量增加，白细胞数量也增加。外周血白细胞数量间接反映了外周血造血干细胞含量。实验发现注射白酒草皂苷R可显著增加外周血中白细胞含量，联合用药具有协同作用。HS6101、地塞米松能够刺激骨髓的造血功能，使骨髓中中性粒细胞释放到外周血中。注射白酒草皂苷R后的小鼠外周血白细胞含量升高更明显，间接表明白酒草皂苷R可以促进造血干细胞的动员。注射地塞米松或HS6101的小鼠集落形成数量与对照组差异不大，注射白酒草皂苷R的小鼠集落形成数量明显增高，联合注射形成的集落数更高单独注射组，表明白酒草皂苷R可以促进造血干细胞的动员，并且白酒草皂苷R与其他药物有协同作用。本专利技术通过观察上述两个因素来研究动员效果。本专利技术的优点：发现了一种全新的造血细胞动员剂，毒副作用低，动员效果好，和其他药物还具有显著的协同作用。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。本专利技术的具体实施例如以下说明。实施例1一种造血干细胞动员剂，其包括：白酒草皂苷R。其还可以进一步包括地塞米松，HS6101。本实施例的研究方法：材料：SPF级C57BL/6小鼠90只，8-12周龄，雌雄各半，体质量18-24g，购自中科院上海实验动物中心。HS6101购自浙江海正药业股份有限公司。Ficoll-Hypague、地塞米松、甲基纤维素购自Sigma公司；Ficoll-PaquePlus淋巴细胞分离液购自美国GE公司；牛血清白蛋白、胎牛血清、谷氨酰胺、青霉素、链霉素购自Gibco公司；IMDM培养液购自HyClone公司。分组给药方法：90只C57BL/6小鼠随机分为6组：对照组、HS6101组、地塞米松组、白酒草皂苷R组、酒草皂苷R+地塞米松组，酒草皂苷R+HS6101，每组15只。依次按HS61018mg/kg，地塞米松0.2mg/kg，酒草皂苷R1mg/kg的剂量皮下注射，对照组注射等体积的生理盐水。注射后0，4，12h采集外周血和骨髓血，每个时间点5只。实施例2外周血造血干细胞采集小鼠眼眶静脉丛采血，Ficoll-Hypague密度梯度离心，获取的外周血单个核细胞用PBS洗涤2次，制成悬液。骨髓造血干细胞的采集采外周血后即刻颈椎脱臼处死小鼠，然后使用75％乙醇中消毒1min，IMDM冲出骨髓细胞，吹打成细胞悬液，用70μm孔径的过滤器滤除其中的凝集物，Ficoll-PaquePlus淋巴细胞分离液分离单个核细胞。4℃，1000×g离心8min，制成单个核细胞悬液。以1×109L-1的细胞浓度接种于含体积分数为15％胎牛血清的IMDM培养基(含青、链霉素)中，置于37℃，体积分数为5％CO2培养箱，培养48h后收集悬浮细胞。外周血和骨髓造血干细胞表型CD34的检测吸取200μL细胞悬液，分为2组，一组加入FITC标记的大鼠抗小鼠CD34抗体，另一组加入FITC标记的大鼠IgG2a作为对照，室温避光孵育30min，流式细胞仪检测CD34+细胞百分比。外周血白细胞计数利用细胞计数板进行白细胞计数。外周血和骨髓造血干细胞集落形成的检测将细胞悬液以1×108L-1的细胞浓度接种于半固体培养基中，培养基的成分为0.1g/mL去离子牛血清白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种造血干细胞动员剂，其包括：白酒草皂苷R。

【技术特征摘要】
1.一种造血干细胞动员剂，其包括：白酒草皂苷R。2.权利要求1所述的造血干细胞动员剂，其还可以进一步包括地塞米松。3.权利要求1所述的造血干细胞动员剂，其还可以进一步包括HS6101。4.权利要求1-3任一项所述的造血...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐智峰，张新，
申请(专利权)人：广州沙艾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44