【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及组织工程，具体涉及一种干细胞及其在制备具有生物组织修复作用的产品中的应用。
技术介绍
1、生物材料会影响相邻细胞之间的细胞间通讯，加速组织再生，支架作为exos和携带生物因子的载体，在极大程度上影响着多种因子的活性，为细胞黏附、迁移、增殖、分化提供适当的生物力学支持和生化环境。
2、cn108187142a公开了一种干细胞在生物组织修复中的应用，其通过利用诱导分化后的脂肪干细胞在三维生物材料支架上进行增殖以加速受损皮肤愈合，缩短愈合时间，使创面更加平整，减少皮肤褶皱，达到皮肤痊愈后的美化效果，为皮肤的生长恢复提供了一个较好的愈合条件，为干细胞用于临床治疗皮肤创伤提供参考，但其支架孔隙率不足，难以为细胞提供适当的生物力学支持和生化环境。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种干细胞及其在制备具有生物组织修复作用的产品中的应用，具有优异的组织修复作用。
2、本专利技术解决其技术问题采用以下技术方案：
3、一种干细胞在制备具有生物组织修复作用的产品中的应用，包括以下步骤：
4、将脂肪干细胞细胞悬液注于生物支架上，培养增殖，得到具有生物组织修复作用的产品；
5、所述生物支架的材料为透明质酸-改性壳聚糖-聚己内酯。
6、本专利技术的生物支架孔隙率高，强度高，能够为细胞黏附、迁移、增殖、成骨分化提供适当的生物力学支持和生化环境，进而提高组织修复作用，且其具有极佳的生物相容性。
7、作为本专利技术的优
8、取sd大鼠皮下股沟处脂肪组织，冲洗，剪碎，消化，离心，pbs重悬沉淀，得到细胞初悬液；
9、将细胞初悬液置于培养基中培养，培养2~4天后，换液，去除非贴壁细胞，在培养4~8天，得到p1代脂肪干细胞；
10、将p1代脂肪干细胞传至5代，得到脂肪干细胞细胞悬液。
11、本专利技术通过对sd大鼠皮下股沟处脂肪组织，冲洗，剪碎，消化，离心，而后进行培养，得到了分化程度优异，单位体积内细胞数量丰富的脂肪干细胞细胞悬液，细胞收率高、细胞活率高，接种于生物支架后，能够大量扩增，存活率高。
12、作为本专利技术的优选实施方案，所述冲洗采用hanks液；和/或
13、所述消化采用ⅱ 型胶原酶。
14、作为本专利技术的优选实施方案，所述培养基包括以下组分：60~100ml/l灭活牛血清、600~1000 iu/ml白介素-5、1~5 g/l白灵芝多糖、1~5 g/l金雀异黄酮、10~100mg/l谷胱甘肽、20~100 mg/ld-半乳糖醛酸、10~50 mg/l鼠李聚糖半乳糖醛酸、0.1~1mg/l乙酰氨基酚、1~10mg/l碱性成纤维细胞生长因子、1~10mg/l的tgf-β、100~500 mg/l的hepes、20~200ml/l的fbs和余量的deme培养基。特别是选用本专利技术的培养基，细胞收率高、细胞活率高。
15、作为本专利技术的优选实施方案，所述培养基包括以下组分：80ml/l灭活牛血清、800iu/ml白介素-5、2 g/l白灵芝多糖、3 g/l金雀异黄酮、40mg/l谷胱甘肽、80 mg/ld-半乳糖醛酸、40 mg/l鼠李聚糖半乳糖醛酸、0.5mg/l乙酰氨基酚、8mg/l碱性成纤维细胞生长因子、8mg/l的tgf-β、400 mg/l的hepes、50ml/l的fbs和余量的deme培养基。特别是选用此原料用量下的培养基，细胞收率高、细胞活率高。
16、作为本专利技术的优选实施方案，所述培养在35℃，5%co2浓度条件下进行。
17、作为本专利技术的优选实施方案，所述生物支架的制备方法，包括以下步骤：
18、（1）将透明质酸加入到水中，配制成浓度为5~20%的透明质酸溶液，将改性壳聚糖加入到水中，分散均匀，超声处理，得到前驱体；
19、（2）将聚己内酯溶于氯仿中，配成浓度为15~25％的聚己内酯溶液，加入前驱体，搅拌均匀，再加入氯化钠，搅拌均匀，超声脱泡，注入到聚四氟乙烯模具中，静置36～48小时，随后脱模，再静置18～36小时，最后真空干燥24～36小时，得到生物支架。
20、作为本专利技术的优选实施方案，所述生物支架的制备方法，所述透明质酸、改性壳聚糖的质量比为1：（2~5）；和/或
21、所述聚己内酯和前驱体的质量比为（70~85）：（15~30）。
22、作为本专利技术的优选实施方案，所述改性壳聚糖的制备方法，包括以下步骤：
23、将壳聚糖经过等离子体处理，得到预处理壳聚糖；
24、将3-缩水甘油醚氧基丙基三乙氧基硅烷、苯基三(二甲基硅氧烷基)硅烷加入到丙酮中，混合均匀，得到改性液；
25、将预处理壳聚糖、3-羟基-3-甲基丁酸钙加入到改性液中，在55~80℃水浴下搅拌均匀，超声处理，过滤，干燥，得到改性壳聚糖。
26、作为本专利技术的优选实施方案，述等离子体处理的功率为400~1200w，时间为0.5~5min；和/或
27、所述预处理壳聚糖、3-羟基-3-甲基丁酸钙、3-缩水甘油醚氧基丙基三乙氧基硅烷、苯基三(二甲基硅氧烷基)硅烷的质量比为1：（0.1~0.4）：（0.01~0.05）：（0.01~0.05）。
28、本专利技术创造性的将壳聚糖进行改性处理，并加入了3-羟基-3-甲基丁酸钙，使支架相容性更好，孔隙率更佳，能够更好的为细胞黏附、迁移、增殖、成骨分化提供适当的生物力学支持和生化环境。
29、本专利技术的有益效果：（1）本专利技术的生物支架孔隙率高，强度高，能够为细胞黏附、迁移、增殖、成骨分化提供适当的生物力学支持和生化环境，进而提高组织修复作用，且其具有极佳的生物相容性；（2）本专利技术通过对sd大鼠皮下股沟处脂肪组织，冲洗，剪碎，消化，离心，而后进行培养，得到了分化程度优异，单位体积内细胞数量丰富的脂肪干细胞细胞悬液，细胞收率高、细胞活率高，接种于生物支架后，能够大量扩增，存活率高。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种干细胞在制备具有生物组织修复作用的产品中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脂肪干细胞细胞悬液的制备方法，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述冲洗采用Hanks液；和/或
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述培养基包括以下组分：60~100mL/L灭活牛血清、600~1000 IU/mL白介素-5、1~5 g/L白灵芝多糖、1~5 g/L金雀异黄酮、10~100mg/L谷胱甘肽、20~100 mg/LD-半乳糖醛酸、10~50 mg/L鼠李聚糖半乳糖醛酸、0.1~1mg/L乙酰氨基酚、1~10mg/L碱性成纤维细胞生长因子、1~10mg/L的TGF-β、100~500 mg/L的HEPES、20~200mL/L的FBS和余量的DEME培养基。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述培养基包括以下组分：80mL/L灭活牛血清、800 IU/mL白介素-5、2 g/L白灵芝多糖、3 g/L金雀异黄酮、40mg/L谷胱甘肽、80 mg/LD-
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述培养在35℃，5%CO2浓度条件下进行。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物支架的制备方法，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述生物支架的制备方法，所述透明质酸、改性壳聚糖的质量比为1：（2~5）；和/或
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述改性壳聚糖的制备方法，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述等离子体处理的功率为400~1200W，时间为0.5~5min；和/或
...【技术特征摘要】
1.一种干细胞在制备具有生物组织修复作用的产品中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脂肪干细胞细胞悬液的制备方法，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述冲洗采用hanks液；和/或
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述培养基包括以下组分：60~100ml/l灭活牛血清、600~1000 iu/ml白介素-5、1~5 g/l白灵芝多糖、1~5 g/l金雀异黄酮、10~100mg/l谷胱甘肽、20~100 mg/ld-半乳糖醛酸、10~50 mg/l鼠李聚糖半乳糖醛酸、0.1~1mg/l乙酰氨基酚、1~10mg/l碱性成纤维细胞生长因子、1~10mg/l的tgf-β、100~500 mg/l的hepes、20~200ml/l的fbs和余量的deme培养基。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述培养基包括以下组分：80ml/l灭活牛血清...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐智峰，张新，李智耀，
申请(专利权)人：广州沙艾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。