一种CAR-T细胞制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种CAR

【技术实现步骤摘要】
一种CAR
‑
T细胞制剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及细胞制剂领域，具体为一种CAR
‑
T细胞制剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]多发性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)是一种恶性浆细胞性肿瘤，可归为B细胞淋巴瘤范畴，多种机制参与疾病发生。特征为骨髓中恶性浆细胞浸润，常伴有单克隆免疫球蛋白或其片段(M蛋白)过度生成，导致靶器官损害。
[0003]目前普遍的治疗方法包括单克隆抗体、免疫调节类药物、激素类药物、蛋白酶体抑制剂联合自体造血干细胞移植治疗等，但由于遗传异质性和克隆演变等原因，多数患者短期内复发，复发/难治性患者RRMM及高危细胞遗传学患者预后尤其差。近年，随着生物治疗领域的飞速发展，RRMM患者有了更多的选择：靶向不同靶点的单克隆抗体、双特异性抗体、免疫检查点抑制剂、抗体药物偶联物、双特异性T细胞增殖剂、嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T，CAR
‑
T)细胞等治疗方法。
[0004]CAR
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T细胞在多种肿瘤治疗特别是血液系统肿瘤治疗中显示出良好疗效，是近年来抗肿瘤治疗领域最卓越的成果，然而，其在治疗多发性骨髓瘤时依然对肿瘤细胞杀伤力不足、增殖能力和表达能力仍有待提高。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种能对多发性骨髓瘤细胞有高杀伤力、对BCMA的CAR
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T细胞有高表达力的CAR
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T细胞制剂及其制备方法和应用。
[0006]本专利技术为了达到此目的，采用如下的技术方案：
[0007]一种CAR
‑
T细胞制剂，所述CAR
‑
T细胞制剂为微乳液；微乳液包括水、正丁酸乙酯、卵磷脂、免疫调节液、乙醇，其体积比为35
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45:4
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6：3
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8:2
‑
5:1
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3；免疫调节液按摩尔浓度包括0.01
‑
0.03mol/L淫羊藿苷、0.03
‑
0.06mol/L葛根素、0.02
‑
0.05mol/L大豆苷元、0.03
‑
0.08mol/L当归多糖。
[0008]微乳液是粒径在10
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100nm之间的一种液态溶液，主要是由水相、油相、表面活性剂组成的一种透明的混合溶液，是一种在热力学上相对稳定的体系，可以分为水包油型、油包水型、双连续相型。微乳液由于具有多相，能提高难溶于水的物质的溶解度，是一种新型的给药方法，其相对稳定性好，且药物分散性好，细胞对其的吸收率和增殖都具有良好的促进作用。本专利技术的CAR
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T细胞制剂主要为O/W水包油型。
[0009]CAR
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T疗法就是嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，英文全称Chimeric Antigen Receptor T
‑
Cell Immunotherapy。这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。
[0010]T细胞也叫T淋巴细胞，是人体白细胞的一种，来源于骨髓造血干细胞，在胸腺中成熟，然后移居到人体血液、淋巴和周围组织器官，发挥免疫功能。
[0011]CAR
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T细胞治疗实体瘤，得找到特异性高表达的靶点，这样可以最大程度上避免损伤其他正常的细胞。因此合适的靶点是相对重要的，这样能比通用型靶点疗效更好，也减少对细胞的毒性作用。本申请的CAR
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T细胞的抗原靶点主要为BCMA，这个靶点的高表达优于其他靶点。
[0012]本专利技术还公开一种上述的CAR
‑
T细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：
[0013]S1称取淫羊藿苷、葛根素、大豆苷元、当归多糖；
[0014]S2分别将淫羊藿苷、葛根素、大豆苷元、当归多糖溶于乙醇溶液中；
[0015]S3旋转蒸发以后离心；
[0016]S4冷冻干燥成纳米粉末；
[0017]S5将淫羊藿苷、葛根素、大豆苷元、当归多糖加入水溶液中加热溶解后冷却成免疫调节液；
[0018]S6将水、正丁酸乙酯、卵磷脂、免疫调节液、乙醇；按体积比为35
‑
45:4
‑
6：3
‑
8:2
‑
5:1
‑
3的比例混合均匀制成CAR
‑
T细胞制剂。
[0019]优选的，S2步骤中溶于乙醇溶液时加热。
[0020]优选的，S3步骤中旋转蒸发转速为40
‑
80rpm。
[0021]优选的，S4步骤中为真空冷冻干燥。
[0022]优选的，S5步骤中加热温度为40
‑
60℃。
[0023]优选的，S2步骤中还包括过滤步骤，乙醇溶液溶解后用微孔无菌器过滤。
[0024]优选的，S6步骤中混合均匀后避光保存。
[0025]本专利技术所述的CAR
‑
T细胞制剂主要应用在制备细胞制剂和对多发性骨髓瘤的治疗中。
[0026]本专利技术的有益效果：
[0027]1.本专利技术通过CAR
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T细胞制剂辅助修饰T细胞进行多发性骨髓瘤的治疗；
[0028]2.本专利技术的CAR
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T细胞制剂在体外能增强CAR
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T细胞的杀伤作用，提高CAR
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T细胞疗法在多发性骨髓瘤治疗中的抗肿瘤作用；
[0029]3、本专利技术的CAR
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T细胞制剂采用微乳化溶液，粒径小，稳定性高、活性物质细胞透过率高，能有效提高疗效；
[0030]4、本专利技术的CAR
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T细胞制剂能辅助提高CAR
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T细胞疗法的抑癌效果，有效提升了多发性骨髓瘤细胞的细胞凋亡率。
附图说明
[0031]图1为多发性骨髓瘤细胞活力实验检测中空白组细胞图；
[0032]图2为多发性骨髓瘤细胞活力实验检测中对照组细胞图；
[0033]图3为多发性骨髓瘤细胞活力实验检测中实施例四细胞图。
具体实施方式
[0034]为了使本领域的技术人员更好地理解专利技术的技术方案，下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的详细说明。
[0035]本专利技术公开了一种CAR
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T细胞制剂，所述CAR
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T细胞制剂为微乳液；微乳液包括水、
正丁酸乙酯、卵磷脂、免疫调节液、乙醇，其体积比为35
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45:4
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6：3
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8:2
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CAR
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T细胞制剂，其特征在于：所述CAR
‑
T细胞制剂为微乳液；微乳液包括水、正丁酸乙酯、卵磷脂、免疫调节液、乙醇，其体积比为35
‑
45:4
‑
6：3
‑
8:2
‑
5:1
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3；免疫调节液按摩尔浓度包括0.01
‑
0.03mol/L淫羊藿苷、0.03
‑
0.06mol/L葛根素、0.02
‑
0.05mol/L大豆苷元、0.03
‑
0.08mol/L当归多糖。2.根据权利要求1所述的CAR
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T细胞制剂，其特征在于：CAR
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T细胞的靶点为BCMA。3.一种权利要求1所述的CAR
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T细胞制剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1称取淫羊藿苷、葛根素、大豆苷元、当归多糖；S2分别将淫羊藿苷、葛根素、大豆苷元、当归多糖溶于乙醇溶液中；S3旋转蒸发以后离心；S4冷冻干燥成纳米粉末；S5将淫羊藿苷、葛根素、大豆苷元、当归多糖加入水溶液中加热溶解后冷却成免疫调节液；S6将水、正丁酸乙酯、卵磷脂、免疫调节液、乙醇；按体积...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐智峰，张新，李智耀，
申请(专利权)人：广州沙艾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：