一种提高细胞存活率冻存液及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种提高细胞存活率冻存液及其应用，冻存液按质量份数包括如下组分：丙二醇4

【技术实现步骤摘要】
一种提高细胞存活率冻存液及其应用


[0001]本专利技术涉及细胞冻存液领域，具体为一种提高细胞存活率冻存液及其应用。

技术介绍

[0002]低温冻存是将生物细胞置于深低温条件下，使细胞处于休眠状态，降低细胞的代谢率，延长细胞的保存时间。
[0003]在细胞复苏的升温过程中，细胞内外环境的改变，以致胞内pH和离子强度改变、蛋白质失活等，降低细胞活性甚至破碎死亡。现有的冻存液主要采用渗透压调节保护和亲水性结合水分子，减缓水分子的氢键对冰晶形成的加速作用，作用效果相对有限。

技术实现思路

[0004]本专利技术为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种利用多种两性化合物减少水分子影响，并提高细胞抗氧化性和修复功能的提高细胞存活率冻存液及其应用。
[0005]本专利技术为了达到此目的，采用如下的技术方案：
[0006]一种提高细胞存活率冻存液，按质量份数包括如下组分：丙二醇4
‑
7份、甘油2
‑
5份、葡萄糖1
‑
3份、乙酰胺4
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7份、富硒螺旋藻提取液5
‑
17份、甘露糖赤癣糖醇脂5
‑
12份、复合海藻多糖8
‑
20份、基础培养液50
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100份。
[0007]本专利技术还提供如下优选方案：
[0008]进一步的优选配方，按质量份数包括如下组分：丙二醇5
‑
7份、甘油2
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4份、葡萄糖1
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2份、乙酰胺4
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6份、富硒螺旋藻提取液10
‑
12份、甘露糖赤癣糖醇脂10
‑
12份、复合海藻多糖12
‑
16份、基础培养液60
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80份。
[0009]实验中最佳的组分配比为，按质量份数包括如下组分：丙二醇7份、甘油4份、葡萄糖2份、乙酰胺4份、富硒螺旋藻提取液10份、甘露糖赤癣糖醇脂10份、复合海藻多糖12份、基础培养液80份。
[0010]优选的，所述细胞为肝细胞。
[0011]优选的，复合海藻多糖提取自蓝藻、绿藻、红藻、褐藻其中两种或两种以上。
[0012]更优选的，复合海藻多糖提取自巨藻和马尾藻。
[0013]基础培养液采用现有的基础培养液，优选为DMEM/F12培养液。
[0014]优选的，所述复合海藻多糖的提取方法为：将复合海藻粉进行浸润后，超声破碎得到初步提取液，并加入絮凝剂电场絮凝提取并离心过滤后，过分子筛柱洗脱后得到复合海藻多糖。
[0015]优选的，所述富硒螺旋藻提取液的提取方法为：将富硒螺旋藻加入丁二醇溶液，进行超声破碎，再高压蒸汽过滤，取滤液进行离心得富硒螺旋藻提取液。
[0016]本专利技术还公开一种提高细胞存活率冻存液的应用，主要应用于细胞冻存液的制备。
[0017]本专利技术采用多种渗透型保护剂，丙二醇、甘油、乙酰胺进行常规的渗透保护。再辅
助以多种糖类对冻存液进行调整，糖类的浓度和种类对细胞冻存的影响明显，多种糖类替代水分子，形成玻璃态，减少水分子冰晶对细胞复苏过程中的细胞损伤。并增加甘露糖赤藓糖醇脂，增加细胞膜表面通透性，促进细胞对多种糖类的吸收，并辅助海藻类多糖增加细胞的抗氧化性能。
附图说明
[0018]图1为对比例2的红细胞解冻后的显微图；
[0019]图2为实施例5的红细胞解冻后的显微图；
[0020]图3为实施例5的肝细胞解冻后的甲苯胺蓝染色显微图；
[0021]图4为对比例2的肝细胞解冻后的甲苯胺蓝染色显微图。
具体实施方式
[0022]为了使本领域的技术人员更好地理解专利技术的技术方案，下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的详细说明。
[0023]本专利技术的提高细胞存活率冻存液，按质量份数包括如下组分：丙二醇4
‑
7份、甘油2
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5份、葡萄糖1
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3份、乙酰胺4
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7份、富硒螺旋藻提取液5
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17份、甘露糖赤癣糖醇脂5
‑
12份、复合海藻多糖8
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20份、基础培养液50
‑
100份。
[0024]在相对更佳的实施例中，按质量份数包括如下组分：丙二醇5
‑
7份、甘油2
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4份、葡萄糖1
‑
2份、乙酰胺4
‑
6份、富硒螺旋藻提取液10
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12份、甘露糖赤癣糖醇脂10
‑
12份、复合海藻多糖12
‑
16份、基础培养液60
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80份。
[0025]根据实验结果，最佳的组分配比为，按质量份数包括如下组分：丙二醇7份、甘油4份、葡萄糖2份、乙酰胺4份、富硒螺旋藻提取液10份、甘露糖赤癣糖醇脂10份、复合海藻多糖12份、基础培养液80份。
[0026]所述细胞为肝细胞。肝细胞对于抗氧化性能相对比较敏感，对于富硒螺旋藻的敏感度远高于其他人体细胞，实验证明其对于此种冻存液的优化最为明显。
[0027]复合海藻多糖提取自蓝藻、绿藻、红藻、褐藻其中两种或两种以上。可获取的海藻种类大多为蓝藻、绿藻、红藻、褐藻，自然环境中也基本以此类藻类居多。
[0028]复合海藻多糖提取自巨藻和马尾藻。
[0029]巨藻的细胞壁主要由结构复杂的水溶性硫酸化多糖组成。这些多糖具有独特的分子量和结构特性(拥有多种结构,包括分支构象)以及硫酸化,同时含有多种糖和罕见的糖(木糖和鼠李糖),这使藻类多糖具有独特的生物活性。由于这些结构特性,巨藻多糖具有与动物的糖胺聚糖(Glycosaminoglycanes,GAGs),如肝素,类似的结构。
[0030]马尾藻多糖的分子量多在10000以上,根据其分子骨架可分为分枝多糖和支链多糖。在多糖的水解液中常见半乳糖、木糖、葡萄糖、古洛糖以及糖醛酸、硫酸酯等。不分枝多糖与分枝多糖的全链均为β(1
‑
>4)连接，支链为1
‑
2和1
‑
3连接。马尾藻中的多糖包括最外层的骨架多糖,细胞间粘多糖及原生质内贮存多糖。马尾藻多糖是从马尾藻中提取出来的一种易溶于水、粘度较高的多糖复合物。
[0031]所述基础培养液为DMEM/F12培养液。
[0032]所述复合海藻多糖的提取方法为：将复合海藻粉进行浸润后，超声破碎得到初步
提取液，并加入絮凝剂电场絮凝提取并离心过滤后，过分子筛柱洗脱后得到复合海藻多糖。
[0033]所述富硒螺旋藻提取液的提取方法为：将富硒螺旋藻加入丁二醇溶液，进行超声破碎，再高压蒸汽过滤，取滤液进行离心得富硒螺旋藻提取液。
[0034]本专利技术还公开了将提高细胞存活率冻存液应用于细胞冻存液的制备。
[0035]以上为本专利技术的专利技术内本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高细胞存活率冻存液，其特征在于：按质量份数包括如下组分：丙二醇4
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7份、甘油2
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5份、葡萄糖1
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3份、乙酰胺4
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7份、富硒螺旋藻提取液5
‑
17份、甘露糖赤癣糖醇脂5
‑
12份、复合海藻多糖8
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20份、基础培养液50
‑
100份。2.根据权利要求1所述的提高细胞存活率冻存液，其特征在于：按质量份数包括如下组分：丙二醇5
‑
7份、甘油2
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4份、葡萄糖1
‑
2份、乙酰胺4
‑
6份、富硒螺旋藻提取液10
‑
12份、甘露糖赤癣糖醇脂10
‑
12份、复合海藻多糖12
‑
16份、基础培养液60
‑
80份。3.根据权利要求1所述的提高细胞存活率冻存液，其特征在于：按质量份数包...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐智峰，张新，李智耀，
申请(专利权)人：广州沙艾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：