The invention discloses a preparation method of nattokinase, which relates to the technical field of fermentation. The preparation method of nattokinase includes the following steps: centrifugal separation of fermentation broth of nattobacillus, filtration of supernatant, and preparation of crude enzyme solution; separation of crude enzyme solution through multistage membrane to remove impurities whose molecular weight is not within the molecular weight range of nattokinase, and preparation of concentrate; preliminary purification of the concentrate by macroporous adsorption resin method, obtaining eluent, and ultrafiltration of the eluent. The sperm enzymes were refined and purified to obtain nattokinase dried by vacuum low temperature microwave drying. In the technical scheme of the invention, nattokinase is prepared by continuous membrane separation, purification by macroporous adsorption resin method and vacuum low temperature microwave drying process, thus realizing industrialized production of high purity and high activity nattokinase.
【技术实现步骤摘要】
一种纳豆激酶的制备方法
本专利技术涉及发酵
，特别涉及一种纳豆激酶的制备方法。
技术介绍
纳豆激酶是由一条相对分子质量约为28kda单链肽构成的具有纤溶活性的碱性丝氨酸蛋白酶，具有显著的溶解血栓、抗血小板聚集、降血脂等功效，在预防及治疗心脑血管疾病方面有广泛的应用。随着纳豆激酶在高端保健食品和医药领域的更为广泛应用，对纳豆激酶的纯度和活性均提出了更高的要求，目前，纳豆激酶生产主要通过固态或液态发酵，然后通过盐析、凝胶柱层析等方法制备纯化纳豆激酶，但盐析法存在纳豆激酶回收率低、纯度不达标及酶活不高的缺陷，从而使得纳豆激酶在高端产品的应用中受到限制，而柱层析法存在操作步骤繁琐复杂、成本高、不易产业化等问题，也使得其很难在纳豆激酶的工业化生产中推广。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提出一种纳豆激酶的制备方法，旨在解决纳豆激酶生产存在的纯度低、酶活不高以及不易工业化生产的问题。为实现上述目的，本专利技术提出一种纳豆激酶的制备方法，所述纳豆激酶的制备方法包括以下步骤：将纳豆菌发酵液离心分离，取上清液过滤，得粗酶液；将所述粗酶液通过多级膜分离以清除分子量不在纳豆激酶分...
【技术保护点】
1.一种纳豆激酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将纳豆菌发酵液离心分离，取上清液过滤，得粗酶液；将所述粗酶液通过多级膜分离以清除分子量不在纳豆激酶分子量范围内的杂质，得浓缩液；用大孔吸附树脂法对所述浓缩液初步提纯，得洗脱液，将所述洗脱液用超滤法精细提纯，得精酶液；将所述精酶液进行真空低温微波干燥，得纳豆激酶干品。
【技术特征摘要】
1.一种纳豆激酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将纳豆菌发酵液离心分离，取上清液过滤，得粗酶液；将所述粗酶液通过多级膜分离以清除分子量不在纳豆激酶分子量范围内的杂质，得浓缩液；用大孔吸附树脂法对所述浓缩液初步提纯，得洗脱液，将所述洗脱液用超滤法精细提纯，得精酶液；将所述精酶液进行真空低温微波干燥，得纳豆激酶干品。2.如权利要求1所述的纳豆激酶的制备方法，其特征在于，所述将纳豆菌发酵液离心分离，取上清液过滤，得粗酶液的步骤中，所述离心时，转速为8000～12000r/min，离心时间为10～15min；所述过滤时，采用砂滤棒过滤。3.如权利要求1所述的纳豆激酶的制备方法，其特征在于，所述将所述粗酶液通过多级膜分离以清除分子量不在纳豆激酶分子量范围内的杂质，得浓缩液的步骤中，包括：将所述粗酶液通过陶瓷膜过滤，得一级透过液；将所述一级透过液通过一级超滤膜过滤，得二级透过液；将所述二级透过液通过二级超滤膜浓缩，得一级浓缩液；将所述一级浓缩液通过纳滤膜浓缩，得最后的浓缩液。4.如权利要求3所述的纳豆激酶的制备方法，其特征在于，所述陶瓷膜截留的分子量为90～100KDa；所述一级超滤膜截留的分子量为45～50KDa；所述一级超滤膜截留的分子量为15～10KDa；所述纳滤膜截留的分子量为1～5KDa。5.如权利要求1所述的纳豆激酶的制备方法，其特征在于，所述用大孔吸附树脂法对所述浓缩液初步提纯，得洗脱液，将所述洗脱液用超滤法精细提纯，得精酶液的步骤中，所述超滤法精细提纯包括：将所述洗脱液通过截留分子量为1～5KDa的超滤膜浓缩，收集浓缩液。6.如权利要求1所述的纳豆激酶的制备方法，其特征在于，所述将所述精酶液进行真空低温微波干燥，得纳豆激酶干品的步骤中，所述真空低温微波干燥的温度为30～40℃，干燥时间为24～48h。7.如权利要求1所述的纳豆激酶的制备方法，其特征在于，所述将纳豆菌发酵液离心分离，取上清...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘梁，乔斌，潘显虎，赵玲，陈新，燕宇剑，倪丹妮，关金涛，
申请(专利权)人：武汉轻工大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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