The present invention relates to a rapid screening method for galactose ceramide transferase inhibitors, which includes the following steps: (1) synthesizing human galactose ceramide transferase ribonucleic acid artificially, then transforming galactose ceramide transferase ribonucleic acid into mammalian cell expression vector pDNA 3.1(+) to obtain human galactose ceramide transferase overexpression vector; (2) Human galactose ceramide transferase overexpression vectors were transfected into non-human cells, then lysed cells and extracted cell lysis proteins; (3) Cell lysis proteins and reaction substrates were extracted and placed in reaction buffers, and the selected galactose ceramide transferase inhibitors were added to detect substrates and reaction products after reaction. The content of galactose ceramide transferase inhibitors to be screened was determined. Compared with the prior art, the invention establishes a fast and stable screening method.
【技术实现步骤摘要】
一种半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物的快速筛选方法
本专利技术涉及药物筛选
,具体涉及一种半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物的快速筛选方法。
技术介绍
克拉伯病又称为Krabbe病,由丹麦儿科医师Krabbe于1916年首先报道。依据其临床特点,亦称为婴儿家族性弥漫性硬化。克拉伯病为常染色体隐性遗传代谢性疾病,突变基因位于14p。克拉伯病的基因缺陷引起半乳糖脑苷-β-半乳糖苷酶缺乏,是导致脑白质内有许多半乳糖脑苷的沉积而发病的遗传代谢性疾病。本病预后极差,婴儿型患者常于1岁之内病故。晚发者可生存至10岁左右。由于半乳糖神经酰胺转移酶能将神经酰胺转变为半乳糖脑苷,抑制半乳糖神经酰胺转移酶的活力,减少半乳糖脑苷在脑白质内累积沈淀成为克拉伯病的可能治疗方法之一,如专利AU2017278057A1就公开了一种神经酰胺半乳糖基转移酶抑制剂及其应用。但是,现有的神经酰胺半乳糖基转移酶抑制剂药物的效果评价较为复杂,使得高效神经酰胺半乳糖基转移酶抑制剂药物的筛选很慢,因此,半乳糖神经酰胺转移酶(CGT)抑制剂的快速筛选方法因此显得尤为重要。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物的快速筛选方法。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现:一种半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物的快速筛选方法,包括以下步骤:(1)人工合成人类的半乳糖神经酰胺转移酶的核醣核酸,然后将半乳糖神经酰胺转移酶的核醣核酸转建构在哺乳细胞表达载体pDNA3.1(+)上,得到人类半乳糖神经酰胺转移酶过表达载体;(2)将步骤(1)制备得到的人类半乳糖 ...
【技术保护点】
1.一种半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物的快速筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)人工合成人类的半乳糖神经酰胺转移酶的核醣核酸,然后将半乳糖神经酰胺转移酶的核醣核酸转建构在哺乳细胞表达载体pDNA3.1(+)上,得到人类半乳糖神经酰胺转移酶过表达载体;(2)将步骤(1)制备得到的人类半乳糖神经酰胺转移酶过表达载体在非人源细胞上进行细胞转染,然后进行裂解细胞并提取细胞裂解蛋白;(3)将提取获得的细胞裂解蛋白以及反应底物置于反应缓冲液中,加入待筛选的半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物,进行反应后,检测底物及反应产物的含量,然后确定待筛选的半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物的抑制效果。
【技术特征摘要】
1.一种半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物的快速筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)人工合成人类的半乳糖神经酰胺转移酶的核醣核酸,然后将半乳糖神经酰胺转移酶的核醣核酸转建构在哺乳细胞表达载体pDNA3.1(+)上,得到人类半乳糖神经酰胺转移酶过表达载体;(2)将步骤(1)制备得到的人类半乳糖神经酰胺转移酶过表达载体在非人源细胞上进行细胞转染,然后进行裂解细胞并提取细胞裂解蛋白;(3)将提取获得的细胞裂解蛋白以及反应底物置于反应缓冲液中,加入待筛选的半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物,进行反应后,检测底物及反应产物的含量,然后确定待筛选的半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物的抑制效果。2.根据权利要求1所述的一种半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物的快速筛选方法,其特征在于,所述的非人源细胞选自仓鼠卵巢细胞。3.根据权利要求1所述的一种半乳糖神经酰胺转移酶抑制剂药物的快速筛选方法,其特征在于,所述的缓冲液包括HEPES、二烯酰基磷酰胆碱、MgCl2、MnCl2、牛血清白蛋白、KCl、EGTA和CHAPS,其中,所述HEPES的浓度为8~12nM,所述二烯酰基磷酰胆碱的浓度为30~40μM,所述MgCl2的浓度为3~6mM,所述MnCl2的浓度为3~6mM,所述牛血清白蛋白的质量分数为0.8%~1.5%,所...
【专利技术属性】
技术研发人员:白艳秋,吴治昊,王朝弘,刘豫屏,
申请(专利权)人:辉源生物科技上海有限公司,
类型:发明
国别省市:上海,31
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