The invention relates to the field of medical cosmetology of adipose mesenchymal stem cells, and discloses a method for isolation, culture and preparation of adipose mesenchymal stem cells. The present invention deals with autologous adipose tissue by physical method, without introducing collagenase and long-term cumbersome treatment, and retains and makes full use of extracellular matrix. The present invention further utilizes autologous platelet-rich factor plasma to amplify autologous adipose mesenchymal stem cells, and obtains sufficient amounts of autologous adipose mesenchymal stem cells and stem cell factors, adipose mesenchymal stem cells and extracellular factors. Matrix has good effects on wrinkle removal, soft tissue repair and facial rejuvenation. Stem cell factor can be widely used in skin repair.
【技术实现步骤摘要】
一种脂肪间充质干细胞分离培养及制剂制备方法
本专利技术涉及一种脂肪间充质干细胞分离培养及制剂制备方法。本专利技术属于脂肪间充质干细胞医疗美容领域。
技术介绍
干细胞是一类具有自我更新、自我复制能力的多潜能细胞。间充质干细胞是干细胞家族的重要成员,来源于发育早期的中胚层,在体内或体外特定的诱导条件下,可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞,是再生医学理想的种子细胞。间充质干细胞存在于骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织等多种组织中。脂肪间充质干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。近年来,脂肪来源的干细胞已经成为组织工程和再生医学最受欢迎的干细胞之一。自体脂肪源性干细胞来源广泛,能够分泌出大量的生长因子,如表皮、血管、内皮以及成纤维等生长因子,能够促进人体胶原合成,增加血管,更易成活,使得人体皮肤质地产生变化,减少面部斑点,淡化面部皱纹,改善面部凹陷,从而达到面部年轻化的改变。但是只有足够数量、活性强的细胞才能发挥持久的疗效,并且细胞外基质对细胞的植入和功能的发挥具有重要的作用。尽管骨髓、脐带、胎盘、牙髓等组织中均可分离出间充质干细胞,但是其来源受限,或者自体采集损伤较大。虽然间充质干细胞免疫原性低,但是异体输注依然存在排斥反应。自体脂肪来源丰富、易于采集,且间充质干细胞含量高、增殖活性强、自体来源无排斥,且脂肪组织中可提炼出适用于填充的细胞外基质,是医疗美容领域最合适的种子来源。间充质干细胞体外培养存在外源污染的风险,如培养体系中牛源血清的使用可能引入牛源支原体、病毒等病原微生物污染的风 ...
【技术保护点】
1.一种脂肪间充质干细胞分离培养及制剂制备方法,其特征在于包括以下步骤:1)血小板分离和富血小板因子血浆制备;2)脂肪间充质干细胞的分离、培养;3)脂肪间充质干细胞制剂制备;4)干细胞因子制备。
【技术特征摘要】
1.一种脂肪间充质干细胞分离培养及制剂制备方法,其特征在于包括以下步骤:1)血小板分离和富血小板因子血浆制备;2)脂肪间充质干细胞的分离、培养;3)脂肪间充质干细胞制剂制备;4)干细胞因子制备。2.根据权利要求1所述的血小板分离和富血小板因子血浆制备,其特征在于,用密度梯度离心法和差速离心法获得血小板,用自体血浆重悬血小板后,经过3次反复冻融,2000g离心,上清液过滤至洁净容器中。3.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞和细胞外基质的分离,其特征在于,对洗涤后的脂肪依次通过1.2mm、1.0mm、0.8mm、0.6mm孔径的纳米脂肪乳化器反复推注20次、0.1-0.2mm筛网过滤、300g离心细胞沉淀用含富血小板因子血浆的培养基重悬、接种培养,上清收集置于冷冻冰箱保存,制剂时解冻后转移每10ml至50ml密封注射器中,反复抽拉注射器栓的同时震荡摇晃,待细胞外基质从油脂析出,将混合物置于50ml离心管,3000g离心弃上清取细胞外基质沉淀。4.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞制剂的制备,其特征在于,待脂肪间充质干细胞生长融合至80%,用重组胰蛋白酶消化,待细胞缩小用胰酶抑制剂终止消化,离心洗涤两遍,将收获的脂肪间充...
【专利技术属性】
技术研发人员:王振坤,罗赛,朱轶,刘小龙,
申请(专利权)人:王振坤,
类型:发明
国别省市:黑龙江,23
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