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一种检测发酵饲料中乳酸菌数量的方法技术

技术编号:20931853 阅读:79 留言:0更新日期:2019-04-20 13:27
本发明专利技术公开了一种检测发酵饲料中乳酸菌数量的方法,以乳酸菌为研究对象,建立乳酸菌数量与CT值的标准曲线,通过Q‑PCR检测样品CT值,计算样品中的乳酸菌量;用叠氮溴乙锭来消除死菌DNA扩增造成的误差,提高检测结果的准确性。本发明专利技术提供的EMA‑QPCR法,与传统的平板计数法相比,EMA‑QPCR法能将检测时间从近30h,缩减至5h,在缩减了检测时间的同时,还在很大程度上减少了检测的工作量,极大提高了检测效率。

A Method for Detecting the Number of Lactic Acid Bacteria in Fermented Feed

The invention discloses a method for detecting the number of lactic acid bacteria in fermented feed, taking lactic acid bacteria as the research object, establishes a standard curve between the number of lactic acid bacteria and CT value, detects the CT value of the sample by Q-PCR, calculates the amount of lactic acid bacteria in the sample, and eliminates the error caused by DNA amplification of dead bacteria by ethyl azide to improve the accuracy of the test result. Compared with the traditional plate counting method, the EMA QPCR method provided by the invention can reduce the detection time from nearly 30 hours to 5 hours, reduce the detection time, at the same time, reduce the detection workload to a large extent, and greatly improve the detection efficiency.

【技术实现步骤摘要】
一种检测发酵饲料中乳酸菌数量的方法
本专利技术涉及生物
,更具体的说是涉及一种利用EMA-QPCR法检测发酵饲料中乳酸菌数量的方法。
技术介绍
传统生猪养殖过程中,饲料中添加抗生素虽然能促进猪的生长,并预防疾病,但抗生素的长期使用,造成细菌耐药性和食品安全问题。随着人们生活水平的提高,对食品安全的要求越来越高。为了生产出绿色健康高品质的肉制品,越来越多的企业尝试利用发酵饲料进行生猪养殖。发酵饲料具有较好的适口性,能有效维持猪群肠道微生态平衡,降低猪群腹泻率和死亡率,提高猪肉品质,是饲料业发展的趋势。发酵饲料养猪具有很多优点,但由于发酵饲料成分比较复杂,在我国尚没有一个完善的发酵饲料品质评定体系。当前人们普遍认为乳酸菌含量是评定发酵饲料品质的一项重要指标。乳酸菌能够提高母猪的繁殖性能,显著提高哺乳仔猪的生长性能,降低母猪的发病率,对仔猪腹泻具有明显的改善作用,但是起主要作用的是活乳酸菌,因此通常用发酵饲料中活乳酸菌量评价发酵饲料品质。目前常用的检测发酵饲料含菌量的方法是平板计数法。平板计数法虽然准确,但是操作过程比较繁琐,用时较长。因此,提供一种操作简便,用时短且结果准确的检测发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测发酵饲料中乳酸菌数量的方法,其特征在于,具体步骤如下:(1)设计特异性引物;(2)建立标准曲线;(3)计算乳酸菌数量:A、将待测发酵饲料样品溶解,加入EMA溶液,室温避光孵育5‑10min;B、将孵育完成的样品置于冰上,用碘钨灯照射,使EMA与DNA充分结合,且未结合的EMA完全光解;C、提取样品DNA;D、Q‑PCR扩增细菌基因组DNA,获得CT值;E、根据获得的CT值,利用标准曲线计算乳酸菌数量。

【技术特征摘要】
1.一种检测发酵饲料中乳酸菌数量的方法,其特征在于,具体步骤如下:(1)设计特异性引物;(2)建立标准曲线;(3)计算乳酸菌数量:A、将待测发酵饲料样品溶解,加入EMA溶液,室温避光孵育5-10min;B、将孵育完成的样品置于冰上,用碘钨灯照射,使EMA与DNA充分结合,且未结合的EMA完全光解;C、提取样品DNA;D、Q-PCR扩增细菌基因组DNA,获得CT值;E、根据获得的CT值,利用标准曲线计算乳酸菌数量。2.根据权利要求1所述的一种检测发酵饲料中乳酸菌数量的方法,其特征在于,步骤(1)所述特异性引物的引物序列为:上游引物F:5’-TCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGA-3’;SEQIDNO.1;下游引物R:5’-TCGAATTAAACCACATGCTCCA-3’;SEQIDNO.2。3.根据权利要求1所述的一...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘兴友胡会龙闫艺婷张秀林李鹏刘长忠魏小兵
申请(专利权)人:新乡学院
类型:发明
国别省市:河南,41

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