本发明专利技术提供了CD7嵌合抗原受体修饰的NK‑92MI细胞及其应用。具体地，本发明专利技术提供了一种工程化的NK细胞，所述的NK细胞表达嵌合抗原受体CAR，所述CAR的抗原结合结构域含有靶向CD7的纳米抗体VHH序列。本发明专利技术的NK细胞能够有效地杀伤肿瘤细胞，尤其是T细胞肿瘤，对T细胞白血病(如T‑ALL)的治疗效果非常好。
NK-92MI Cells Modified by CD7 Chimeric Antigen Receptor and Its Application
The present invention provides NK 92MI cells modified by CD7 chimeric antigen receptor and its application. Specifically, the present invention provides an engineered NK cell expressing a chimeric antigen receptor CAR whose antigen binding domain contains a nano-antibody VHH sequence targeting CD7. The NK cell of the present invention can effectively kill tumor cells, especially T cell tumors, and has a very good therapeutic effect on T cell leukemia (such as T_ALL).
【技术实现步骤摘要】
CD7嵌合抗原受体修饰的NK-92MI细胞及其应用
本专利技术属于生物医药领域，具体地，本专利技术涉及CD7嵌合抗原受体修饰的NK-92MI细胞及其应用。
技术介绍
T细胞恶性肿瘤代表一种类型的血液系统癌症，在儿童和成人的复发率和死亡率都很高，目前尚无有效或靶向治疗方法。T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)是一种高度异质性的血液系统恶性肿瘤，占成人急性淋巴细胞白血病病例的25％和小儿急性淋巴细胞白血病病例的15％。目前，T-ALL的治疗策略包括强化化疗，异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)，抗病毒治疗和分子靶向治疗。但是，强化化疗和allo-HSCT通常不能预防治疗难治性复发。对于那些在初始治疗后复发的患者，补救性化疗方案的缓解率大约是20-40％。虽然造血干细胞移植是唯一可以治愈的方案，但是会伴有死亡风险。近年来，嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)治疗已显示出非常有效的治疗效果，作为一种强大的新型过继免疫治疗技术，被用于治疗多种实体和血液癌症，最显著的是对于B细胞淋巴细胞白血病和淋巴瘤的治疗。CAR-T疗法利用经修饰的患者T淋巴细胞以主要组织相容性复合物非依赖性方式靶向和消除恶性肿瘤。有效应用该技术的关键是选择一个合适的CAR靶点。最佳的靶抗原应该只在肿瘤细胞表达，不在正常细胞表达，或者表达在那种正常细胞短暂缺失后，临床上有应对方案的细胞上。因此，B细胞来源的白血病和淋巴瘤可以用针对CD19或CD22的CAR靶向治疗，这是因为CD19和CD22仅由B淋巴样细胞表达。将表达抗CD19-CAR的自体T细胞输注到患有难治性B细胞白血病和淋巴瘤的患者中中会导致显著的临床反应。这些结果提供了无可争议的证据支持这项技术在临床应用中的巨大潜力。但是，设计针对T细胞肿瘤的CAR仍然面临着很大的挑战，这是因为在正常T细胞和T细胞恶性肿瘤上会表达相同的抗原，导致CAR-T细胞自相残杀。因此，本领域迫切需要开发能有效治疗T细胞肿瘤的药物和方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能有效治疗T细胞肿瘤的药物和方法。本专利技术的另一目的是提供一种CD7嵌合抗原受体修饰的NK-92MI细胞及其应用。本专利技术的第一方面，提供了一种工程化的NK细胞，所述的NK细胞表达嵌合抗原受体CAR，所述CAR的抗原结合结构域含有靶向CD7的纳米抗体VHH序列。在另一优选例中，所述抗原结合结构域含有n个靶向CD7的纳米抗体VHH序列，其中n为1-5的正整数，较佳地，n为1-3的正整数，更佳地，n为1或2。在另一优选例中，当n≥2时，所述抗原结合结构域还含有各靶向CD7的纳米抗体VHH序列之间的连接肽La。在另一优选例中，所述连接肽La的长度为5-25，较佳地10-20个氨基酸。在另一优选例中，所述抗原结合结构域的结构为VHH或VHH-I-VHH，其中所述VHH为靶向CD7的纳米抗体VHH序列，I为无或连接肽La。在另一优选例中，所述抗原结合结构域为1个或2个靶向CD7的纳米抗体VHH序列。在另一优选例中，所述靶向CD7的纳米抗体VHH序列如SEQIDNO.:1所示。在另一优选例中，所述VHH-I-VHH的序列如SEQIDNO.:2所示。在另一优选例中，所述连接肽La的序列如SEQIDNO.:5所示。在另一优选例中，所述抗原结合结构域包括如SEQIDNO.:1或2所示的序列。在另一优选例中，所述抗原结合结构域的序列如SEQIDNO.:1或2所示。在另一优选例中，所述抗原结合结构域的序列与SEQIDNO.:1或2所示的序列具有至少70％，优选地至少75％、80％、85％、90％，更优选地至少95％、96％、97％、98％或99％以上的序列相同性。在另一优选例中，所述抗原结合结构域靶向或结合于人CD7。在另一优选例中，所述CAR的结构如下式I所示：L-S-H-TM-C-CD3ζ(I)式中，各“-”独立地为连接肽或肽键；L为任选的信号肽序列；S为抗原结合结构域；H为任选的绞链区；TM为跨膜结构域；C为共刺激信号分子；CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列。在另一优选例中，所述CAR的结构为L-VHH-H-TM-C-CD3ζ或L-VHH-La-VHH-H-TM-C-CD3ζ，其中各元件定义如上所述，La为连接肽。在另一优选例中，所述L为选自下组的蛋白的信号肽：CD8、CD28、GM-CSF、或其组合。在另一优选例中，所述L为GM-CSF来源的信号肽。在另一优选例中，所述L的序列如SEQIDNO.:3中第1-22位所示。在另一优选例中，所述H为选自下组的蛋白的铰链区：CD8、CD28、CD137、Fc、或其组合。在另一优选例中，所述H为Fc来源的铰链区。在另一优选例中，所述H的序列如SEQIDNO.:3中第154-382位所示。在另一优选例中，所述TM为选自下组的蛋白的跨膜区：CD8、CD28、CD137、或其组合。在另一优选例中，所述TM为CD28来源的跨膜区。在另一优选例中，所述TM的序列如SEQIDNO.:3中第383-407位所示。在另一优选例中，所述C为选自下组的蛋白的共刺激信号分子：CD28、CD137(4-1BB)、ICOS(CD278)、或其组合。在另一优选例中，所述C包括CD28和/或4-1BB来源的共刺激信号分子。在另一优选例中，所述C由CD28来源的共刺激信号分子和4-1BB来源的共刺激信号分子组成。在另一优选例中，所述C的序列如SEQIDNO.:3中第408-493位所示。在另一优选例中，所述CAR具有如SEQIDNO.:3或4所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述NK细胞是离体。在另一优选例中，所述NK细胞是自体或异体的。在另一优选例中，所述NK细胞为人或非人哺乳细胞，较佳地为人细胞。在另一优选例中，所述NK细胞为NK92细胞，较佳地，为NK92MI细胞。本专利技术的第二方面，提供了一种嵌合抗原受体CAR，所述CAR的抗原结合结构域含有靶向CD7的纳米抗体VHH序列。在另一优选例中，所述抗原结合结构域含有n个靶向CD7的纳米抗体VHH序列，其中n为1-5的正整数，较佳地，n为1-3的正整数，更佳地，n为1或2。在另一优选例中，所述抗原结合结构域的结构为VHH或VHH-I-VHH，其中所述VHH为靶向CD7的纳米抗体VHH序列，I为无或连接肽La。在另一优选例中，所述抗原结合结构域为1个或2个靶向CD7的纳米抗体VHH序列。在另一优选例中，所述靶向CD7的纳米抗体VHH序列如SEQIDNO.:1所示。在另一优选例中，所述VHH-I-VHH的序列如SEQIDNO.:2所示。在另一优选例中，所述抗原结合结构域的序列如SEQIDNO.:1或2所示。在另一优选例中，所述抗原结合结构域靶向或结合于人CD7。在另一优选例中，所述CAR的结构如下式I所示：L-S-H-TM-C-CD3ζ(I)式中，各“-”独立地为连接肽或肽键；L、S、H、TM、C和CD3ζ的定义如上所述。在另一优选例中，所述CAR的结构为L-VHH-H-TM-C-CD3ζ或L-VHH-La-VHH-H-TM-C-CD3ζ，其中各元件定义如上所述。在另一优选例中，所述CAR具有如SEQIDNO.:3或4所示的氨基酸序列。本专利技术的第三方面，提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码如本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种工程化的NK细胞，其特征在于，所述的NK细胞表达嵌合抗原受体CAR，所述CAR的抗原结合结构域含有靶向CD7的纳米抗体VHH序列。
【技术特征摘要】
1.一种工程化的NK细胞，其特征在于，所述的NK细胞表达嵌合抗原受体CAR，所述CAR的抗原结合结构域含有靶向CD7的纳米抗体VHH序列。2.如权利要求1所述的NK细胞，其特征在于，所述抗原结合结构域的结构为VHH或VHH-I-VHH，其中所述VHH为靶向CD7的纳米抗体VHH序列，I为无或连接肽La。3.如权利要求1所述的NK细胞，其特征在于，所述抗原结合结构域包括如SEQIDNO.:1或2所示的序列。4.如权利要求1所述的NK细胞，其特征在于，所述CAR具有如SEQIDNO.:3或4所示的氨基酸序列。5.一种嵌合抗原受体CAR，其特征在于，所述CAR的抗原结合结构域含有靶向CD7的纳米抗体VHH序列。6.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨林，游凤涛，
申请(专利权)人：博生吉医药科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。