一种新型PD1单域抗体的开发制造技术

一种新型PD1单域抗体的开发。本发明专利技术提供了抗PD1单域抗体。具体地，本发明专利技术通过实验筛选获得了多个抗PD

【技术实现步骤摘要】
一种新型PD1单域抗体的开发


[0001]本专利技术涉及生物医药领域。具体地说，本专利技术涉及抗PD1单域抗体。

技术介绍

[0002]T细胞的特异性免疫应答是由T细胞受体与抗原肽MHC复合物结合后形成的第一刺激信号所激发的；同时T细胞介导的免疫应答的强度和幅度则是被免疫检验点蛋白(包括共抑制因子和共刺激分子)所调节。经过20多年的研究，免疫检验点的分子被发现在调节T细胞免疫应答中发挥了关键作用，这些分子包括：细胞毒性淋巴细胞抗原4(Cytotoxic lymphocyte antigen
‑
4,CTLA
‑
4)，程序性死亡蛋白1(Programmed death
‑
1,PD
‑
1)，T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构
‑
3(Tcell immunoglobulin and mucin domain 3,TIM
‑
3)，T细胞免疫球蛋白和ITIM结构(T cell Ig and ITIM domain,TIGIT)等。
[0003]正常生理状况下，免疫检验点的主要功能是维持自身耐受和保护正常组织免受免疫系统损伤。在肿瘤微环境中，由于长时间接触肿瘤抗原，淋巴细胞会异常表达某些共抑制因子，从而造成肿瘤特异性T细胞发生功能紊乱。大量的临床数据显示针对共抑制信号的抗体能够提高肿瘤特异性T细胞的应答。因此，这些免疫检验点蛋白成为了抗肿瘤免疫治疗的潜在靶点，而且，CAR
‑
T细胞也可以通过共表达PD1抗体来进一步改善对实体肿瘤的治疗疗效。
[0004]然而，目前的抗体的性能尚难以令人满意。因此本领域需要开发新的、性能优异针对上述靶点的抗体药物，以满足临床上的需求。
[0005]目前大部分抗体还是以单克隆抗体来源的，阻断活性有限，而且由于单克隆抗体的分子量较大，不易于CAR
‑
T细胞同时进行PD1抗体的共表达。
[0006]因此，本领域有需要开发一种新型的PD1纳米抗体。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种针对PD
‑
1的单域抗体及其应用。
[0008]在本专利技术的第一方面，提供了一种抗PD
‑
1单域抗体，其特征在于，所述抗PD
‑
1单域抗体的VHH链的互补决定区CDR为选自下组的一种或多种：
[0009](1)SEQ ID NO:5所示的CDR1、SEQ ID NO:6所示的CDR2、和SEQ ID NO:7所示的CDR3；
[0010](2)SEQ ID NO:5所示的CDR1、SEQ ID NO:6所示的CDR2、和SEQ ID NO:8所示的CDR3；
[0011](3)SEQ ID NO:5所示的CDR1、SEQ ID NO:9所示的CDR2、和SEQ ID NO:10所示的CDR3；和
[0012](4)SEQ ID NO:11所示的CDR1、SEQ ID NO:12所示的CDR2、和SEQ ID NO:13所示的CDR3。
[0013]在另一优选例中，所述的抗PD
‑
1单域抗体能够与PD
‑
1特异性结合。
[0014]在另一优选例中，所述的抗PD
‑
1单域抗体能够阻断PD
‑
1和PD
‑
L1的结合。
[0015]在另一优选例中，所述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个(如1
‑
3个，较佳地1
‑
2个，更佳地1个)氨基酸并能保留与PD
‑
1特异性结合能力的衍生序列。
[0016]在另一优选例中，所述抗PD
‑
1单域抗体还包括框架区FR。
[0017]在另一优选例中，所述的CDR1、CDR2和CDR3由VHH链的框架区FR1、FR2、FR3和FR4所隔开。
[0018]在另一优选例中，所述的框架区FR1、FR2、FR3和FR4具有衍生自SEQ ID NO:1、2、3或4的序列。
[0019]在另一优选例中，所述的抗PD
‑
1单域抗体的VHH链的氨基酸序列选自SEQ ID NO:1、2、3或4所示的序列。
[0020]在另一优选例中，所述的抗PD
‑
1的单域抗体包括单体、二价体(二价抗体)、和/或多价抗体。
[0021]在另一优选例中，所述的多价体包含2个以上的本专利技术第一方面所述的单域抗体的VHH链，优选为2个、3个或4个。
[0022]在另一优选例中，所述的抗PD
‑
1的单域抗体为二价体。
[0023]在另一优选例中，所述抗PD
‑
1的单域抗体从N端至C端方向具有如式I所示的结构：
[0024]P1
‑
L
‑
P2
ꢀꢀꢀ
式I
[0025]其中，
[0026]“‑”
为肽键；
[0027]L为连接肽，
[0028]P1、P2各自为VHH链。
[0029]在另一优选例中，所述的L的序列为(G4S)n，其中，n为正整数(例如1、2、3、4、5或6)，优选地，n＝3。
[0030]在另一优选例中，所述P1、P2各自独立地包含如SEQ ID NO:1、2、3或4所示的序列。
[0031]在另一优选例中，P1具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，P2具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
[0032]在另一优选例中，P1具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，P2具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
[0033]在另一优选例中，P1具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，P2具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
[0034]在另一优选例中，所述的抗PD
‑
1单域抗体包括人源化抗体、骆驼源抗体、嵌合抗体。
[0035]在本专利技术的第二方面，提供了一种抗PD
‑
1的抗体，所述抗体包括一个或多个如本专利技术第一方面所述的抗PD1的单域抗体的VHH链。
[0036]在另一优选例中，所述的抗PD
‑
1单域抗体的VHH链的氨基酸序列选自SEQ ID NO:1、2、3或4所示的序列。
[0037]在另一优选例中，所述的抗PD
‑
1的抗体包括单体、二价体(二价抗体)、和/或多价抗体。
[0038]在本专利技术的第三方面，提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸编码选自下组的蛋白质：如本专利技术第一方面所述的抗PD
‑
1单域抗体、或如本专利技术第二方面所述的抗体。
[0039]在另一优选例中，本专利技术涉及编码本专利技术的抗PD
‑
1单域抗体的核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗PD
‑
1单域抗体，其特征在于，所述抗PD
‑
1单域抗体的VHH链的互补决定区CDR为选自下组的一种或多种：(1)SEQ ID NO:5所示的CDR1、SEQ ID NO:6所示的CDR2、和SEQ ID NO:7所示的CDR3；(2)SEQ ID NO:5所示的CDR1、SEQ ID NO:6所示的CDR2、和SEQ ID NO:8所示的CDR3；(3)SEQ ID NO:5所示的CDR1、SEQ ID NO:9所示的CDR2、和SEQ ID NO:10所示的CDR3；和(4)SEQ ID NO:11所示的CDR1、SEQ ID NO:12所示的CDR2、和SEQ ID NO:13所示的CDR3。2.如权利要求1所述的抗PD
‑
1单域抗体，其特征在于，所述的抗PD
‑
1单域抗体的VHH链的氨基酸序列选自SEQ ID NO:1、2、3或4所示的序列。3.如权利要求1所述的抗PD
‑
1单域抗体，其特征在于，所述的抗PD
‑
1单域抗体为单体、二价体或多价体。4.如权利要求1所述的抗PD
‑
1单域抗体，其特征在于，所述的抗PD
‑
1单域抗体为二价体，并且从N端至C端方向具有如式I所示的结构：P1
‑
L
‑
P2式I其中，

【专利技术属性】
技术研发人员：杨林，游凤涛，
申请(专利权)人：博生吉医药科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：