用于检测肠道病毒的核酸试剂、试剂盒及系统技术方案

本公开涉及一种用于检测肠道病毒的核酸试剂、试剂盒及系统，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑36所示的引物和SEQ ID NO.39‑58所示的探针。本公开通过以上所述的引物和探针建立了检测22种易致病的肠道病毒的核酸试剂、试剂盒及系统，能够实现快速、全面、敏感、特异、自动的检测结果判定，显著提高了对多种肠道病毒同时进行检测的敏感性、特异性和简便性。

【技术实现步骤摘要】
用于检测肠道病毒的核酸试剂、试剂盒及系统
本公开涉及肠道病毒的检测，具体地，涉及一种用于检测肠道病毒的核酸试剂、试剂盒及系统。
技术介绍
肠道病毒属于小RNA病毒科肠道病毒属。能引起人类致病的肠道病毒有多种，包括人肠道病毒A、B、C、D组，有100多个血清型。人类常见的肠道病毒主要包括：柯萨奇病毒A组(CoxsackievirusA，CA，常见型别包括2、4、5、6、7、9、10、12、16型)、柯萨奇病毒B组(CoxsackievirusB，CB，常见型别包括1、2、3、4、5型)、人肠道致细胞病变孤儿病毒(简称埃可病毒)(EchovirusECHO)、新肠道病毒等。新肠道病毒为1969年后陆续分离到的，例如新型肠道病毒71型(EV71)等。目前国内对CA16及EV71亚型的分型研究也日趋增多，了解基因分型对手足口疾病的流行和预防有重要意义。CA16主要流行B1b亚型，也有部分区域为B1a亚型；EV71主要为C4a亚型，少数为C4b亚型。肠道病毒的传染源为患者和无症状的病毒携带者。传播途径主要是粪-口途径，也可通过呼吸道传播，夏秋季是一年之中的主要流行期。肠道病毒以上呼吸道、咽喉和肠道为侵入门户，先在局部黏膜和咽、扁桃体等淋巴组织和肠道集合淋巴结中初步增殖，然后释放入血，形成第一次病毒血症。扩散至带有受体的靶组织，再次增殖后，引起第二次病毒血症和临床症状。各年龄段人群均可感染肠道病毒。肠道病毒在肠道中增殖，但通常不引起肠道疾病。90％以上肠道病毒感染为隐性感染，或仅出现轻微的上呼吸道感染或流感样症状。不同肠道病毒可以引起相同的临床症状，同一种病毒可引起几种不同的临床疾病。肠道病毒所致的主要疾病有手足口病、无菌性脑膜炎、脊髓灰质炎、疱疹性咽峡炎、流行性胸痛、心肌炎和心包炎和眼病等等。此外，肠道病毒感染可能还与病毒感染后疲劳综合征、糖尿病相关。因此，建立一种快速、准确、一体化的肠道病毒的筛检方案对于快速诊断及指导临床用药和治疗具有非常重要的意义。当前肠道病毒检测方法主要包括三类：病毒分离培养、免疫学方法、分子生物学方法。病毒分离培养是病毒性疾病诊断的金标准，但其操作繁琐，检测时间长，且阳性率较低。免疫学方法为传统分型的主要方法，但抗血清的来源很有限，无法满足临床病原诊断的要求。而基于PCR等相关技术的分子生物学方法以其灵敏、快捷等优势得到极大发展。常用的PCR检测需要前期复杂的样本处理过程、繁琐的试验程序及复杂的结果判断。此外，RT-PCR所能覆盖的检测目标有限，需要通过多体系的设置才能实现多目标的检测，增加了操作的复杂性。
技术实现思路
本公开的目的是提供一种快速、准确、一体化的检测多种肠道病毒的核酸试剂、试剂盒及系统。为了实现上述目的，本公开第一方面：提供一种用于检测肠道病毒的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQIDNO.1-36所示的引物和SEQIDNO.39-58所示的探针。可选地，相对于1μM的SEQIDNO.1所示的引物，分别由SEQIDNO.2-36所示的引物的含量各自为0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.15～0.35μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.4～0.6μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.3～0.5μM、0.5～1.5μM、0.2～0.4μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.15～0.35μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.4～0.6μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.2～0.4μM、0.5～1.5μM和0.2～0.4μM，分别由SEQIDNO.39-58所示的探针的含量各自为0.1～0.3μM、0.05～0.15μM、0.2～0.4μM、0.05～0.15μM、0.05～0.15μM、0.2～0.4μM、0.05～0.15μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.05～0.15μM、0.2～0.4μM、0.1～0.3μM、0.05～0.15μM、0.2～0.4μM、0.05～0.15μM、0.05～0.15μM、0.2～0.4μM、0.05～0.15μM、0.1～0.3μM和0.1～0.3μM。可选地，所述核酸试剂还包括阳性内质控；所述的阳性内质控含有SEQIDNO.37-38所示的引物和SEQIDNO.59所示的探针，该引物和探针特异性的扩增人内源性核糖核酸酶基因。可选地，所述核酸试剂包括A管、B管、C管和D管；A管含有SEQIDNO.1-18,37-38所示的引物和SEQIDNO.39-47,59所示的探针；B管含有SEQIDNO.19-32,37-38所示的引物和SEQIDNO.48-54,59所示的探针；C管含有SEQIDNO.33-38所示的引物和SEQIDNO.55-59所示的探针；D管含有SEQIDNO.7-8,13-14,17-18,29-30,37-38所示的引物和SEQIDNO.42,45,47,53,59所示的探针。可选地，SEQIDNO.39-41、SEQIDNO.48-50和SEQIDNO.55-57所示的探针具有第一荧光标记；SEQIDNO.42-44、SEQIDNO.51-52和SEQIDNO.58所示的探针具有第二荧光标记；SEQIDNO.45-47和SEQIDNO.53-54所示的探针具有第三荧光标记；SEQIDNO.59所示的探针具有第四荧光标记；所述第一荧光标记、所述第二荧光标记、所述第三荧光标记和所述第四荧光标记各不相同，且各自独立地选自FAM荧光标记、JOE荧光标记、HEX荧光标记、VIC荧光标记、TAMRA荧光标记、ROX荧光标记、CY5荧光标记和Quasar670荧光标记中的一种。本公开第二方面：提供一种用于检测肠道病毒的试剂盒，该试剂盒含有本公开第一方面所述的核酸试剂，并且可选地，所述试剂盒还含有逆转录酶、反应体系缓冲液、DNA聚合酶、镁离子、RNA酶抑制剂、dNTP和水中的至少一种。本公开第三方面：提供本公开第一方面所述的核酸试剂在制备用于检测肠道病毒的试剂盒中的用途。可选地，所述肠道病毒包括肠道病毒CA2、肠道病毒CA4、肠道病毒CA5、肠道病毒CA6、肠道病毒CA7、肠道病毒CA9、肠道病毒CA10、肠道病毒CA12、肠道病毒CA16、肠道病毒CB1、肠道病毒CB2、肠道病毒CB3、肠道病毒CB4、肠道病毒CB5、肠道病毒EV71、肠道病毒ECHO、肠道病毒CA16-A亚型、肠道病毒CA16-B1a亚型、肠道病毒CA16-B1b亚型、肠道病毒EV71-B亚型、肠道病毒EV71-C4a亚型和肠道病毒EV71-C4b亚型。本公开第四方面：提供一种用于检测肠道病毒的系统，该系统包括进样器，具有A管检测器、B管检测器、C管检测器、和D管检测器的PCR仪，计算装置以及输出装置，所述进样器为容纳临床具有手足口症状的样本或核酸的容器，所述检测器为装载有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测肠道病毒的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑36所示的引物和SEQ ID NO.39‑58所示的探针。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测肠道病毒的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQIDNO.1-36所示的引物和SEQIDNO.39-58所示的探针。2.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，相对于1μM的SEQIDNO.1所示的引物，分别由SEQIDNO.2-36所示的引物的含量各自为0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.15～0.35μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.4～0.6μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.3～0.5μM、0.5～1.5μM、0.2～0.4μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.15～0.35μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.4～0.6μM、0.5～1.5μM、0.1～0.3μM、0.5～1.5μM、0.2～0.4μM、0.5～1.5μM和0.2～0.4μM，分别由SEQIDNO.39-58所示的探针的含量各自为0.1～0.3μM、0.05～0.15μM、0.2～0.4μM、0.05～0.15μM、0.05～0.15μM、0.2～0.4μM、0.05～0.15μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.05～0.15μM、0.2～0.4μM、0.1～0.3μM、0.05～0.15μM、0.2～0.4μM、0.05～0.15μM、0.05～0.15μM、0.2～0.4μM、0.05～0.15μM、0.1～0.3μM和0.1～0.3μM。3.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，所述核酸试剂还包括阳性内质控；所述的阳性内质控含有SEQIDNO.37-38所示的引物和SEQIDNO.59所示的探针。4.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括A管、B管、C管和D管；A管含有SEQIDNO.1-18,37-38所示的引物和SEQIDNO.39-47,59所示的探针；B管含有SEQIDNO.19-32,37-38所示的引物和SEQIDNO.48-54,59所示的探针；C管含有SEQIDNO.33-38所示的引物和SEQIDNO.55-59所示的探针；D管含有SEQIDNO.7-8,13-14,17-18,29-30,37-38所示的引物和SEQIDNO.42,45,47,53,59所示的探针。5.根据权利要求4所述的核酸试剂，其中，SEQIDNO.39-41,48-50,55-57所示的探针具有第一荧光标记；SEQIDNO.42-44,51-52,58所示的探针具有第二荧光标记；SEQIDNO.45-47,53-54所示的探针具有第三荧光标记；SEQIDNO.59所示的探针具有第四荧光标记；所述第一荧光标记、所述第二荧光标记、所述第三荧光标记和所述第四荧光标记各不相同，且各自独立地选自FAM荧光标记、JOE荧光标记、HEX荧光标记、VIC荧光标记、TAMRA荧光标记、ROX荧光标记、CY5荧光标记和Quasar670荧光标记中的一种。6.一种用于检测肠道病毒的试剂盒，该试剂盒含有权利要求1～5中任意一项所述的核酸试剂，并且可选地，所述试剂盒还含有逆转录酶、反应体系缓冲液、DNA聚合酶、镁离子、RNA酶抑制剂、dNTP和水中的至少一种。7.权利要求1～5中任意一项所述的核酸试剂在制备用于检测肠道病毒的试剂盒中的用途。8.根据权利要求7所述的用途，其中，所述肠道病毒包括肠道病毒CA2、肠道病毒CA4、肠道病毒CA5、肠道病毒CA6、肠道病毒CA7、肠道病毒CA9、肠道病毒CA10、肠道病毒CA12、肠道病毒CA16、肠道...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雷，王月，林笑冬，王晓艳，张志强，
申请(专利权)人：北京卓诚惠生生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11