【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及适用于测序分析的甲型流感病毒全基因组富集引物及试剂盒。
技术介绍
1、甲型流感病毒(influenza a virus)属正粘病毒科，是单股分节段的负链rna病毒。病毒基因组共有8个片段，其中血凝素(hemagglutinin,ha)与神经氨酸酶(neuraminidase，na)两种重要的表面糖蛋白，具很高的遗传多样性，目前已发现ha亚型18种以及na亚型11种，其中一些亚型具有高致病性。甲型流感病毒(influenza a virus)为最常见的流感病毒，对人类致病性极高。甲型流感病毒中发现能直接感染人的禽流感病毒亚型有：甲型h1n1、h5n1、h7n1、h7n2、h7n3、h7n7、h7n9、h9n2和h10n8，其中h1、h5、h7亚型为高致病性。甲型流感病毒也最容易发生变异，而人禽流行性感冒(简称人禽流感)是由禽甲型流感病毒某些亚型中的一些毒株引起的急性呼吸道传染病，病毒基因变异后能够感染人类，感染后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等，多数伴有严重的肺炎，严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡，病死率很高，因此针对流感病毒的变异监测对评估流感形势的变化至关重要。
2、目前流感的监测手段有多种，包括核酸检测、病毒分离培养，测序分析等。核酸检测和病毒分离培养仅能对病毒进行基础分型，并不能够获得更多的序列变异信息。因此甲流病毒的全基因组测序分析是目前对于病毒变异情况分析、新发突变类型、流行形势变化最有效的跟踪手段。目前此技术虽然已有部分部门开展，但是仍有很多难以突破的技术问题，甲型流
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种甲型流感病毒全基因组富集引物及试剂盒，不仅能够完整覆盖人及禽流感全部亚型，且能够一步完成全部的逆转录及扩增流程，均一度很高。
2、一方面，本专利技术提供了一种扩增甲型流感病毒全基因组的引物，所述的引物序列如seq id no.1-seq id no.2所示。
3、又一方面，本专利技术提供了一种扩增甲型流感病毒全基因组的试剂盒，所述的试剂盒包括前述的引物。
4、具体地，所述的试剂盒还包括rna提取试剂、rna反转录试剂和pcr扩增试剂。
5、优选地，所述的试剂盒还包括rna提取试剂和一步法rt-qpcr反应试剂。
6、进一步具体地，所述的rna提取试剂包括但不限于：细胞破碎缓冲液、溶血缓冲液、蛋白酶、rnase酶抑制剂、氯仿/异丙醇和乙醇。
7、所述的一步法rt-qpcr反应试剂包括但不限于：引物、dntps、逆转录酶、高保真酶、taq酶、多重扩增反应液。
8、进一步具体地，所述的pcr扩增试剂的反应程序为：
9、
10、优选地，所述的pcr扩增试剂的反应程序为：
11、
12、
13、具体地，所述的试剂盒还包括建库试剂用于建库及富集文库。
14、进一步具体地所述的建库试剂包括但不限于：片段化酶、磁珠、片段化反应液、片段化终止反应液、taq酶、taq酶反应液等。
15、又一方面，本专利技术提供了一种甲型流感病毒全基因组的扩增方法，具体包括以下步骤：
16、(1)提取样本中的甲型流感病毒rna；
17、(2)利用权利要求1所述的引物进行一步法rt-qpcr，获得扩增产物；
18、(3)将步骤(2)获得的扩增产物进行建库及测序。
19、具体地，步骤(1)所述的样本可以是鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液或气管吸取物。
20、具体地，步骤(2)所述的一步法rt-qpcr的反应体系由以下成分组成：
21、
22、优选地，步骤(2)所述的一步法rt-qpcr的反应体系由以下成分组成：
23、
24、
25、具体地，所述的反应体系的反应程序为：
26、
27、优选地，所述的反应体系的反应程序为：
28、
29、又一方面，本专利技术提供了前述的引物或试剂盒在甲型流感病毒全基因组测序中的应用。
30、具体地，所述的甲型流感病毒全基因组测序包括二代测序或三代测序。
31、具体地，所述的甲型流感病毒包括但不限于：h1n1、h2n2、h3n2、h5n1、h7n1、h7n2、h7n3、h7n7、h7n9、h9n2和h10n8。
32、本专利技术所取得的技术效果：本专利技术的甲型流感病毒全基因组富集引物及试剂盒针对各亚型覆盖度均≥99.9％，扩增效率均一。
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1.一种扩增甲型流感病毒全基因组的引物，其特征在于，所述的引物序列如SEQ IDNO.1-SEQ ID NO.2所示。
2.一种扩增甲型流感病毒全基因组的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求1所述的引物。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还包括RNA提取试剂、RNA反转录试剂和PCR扩增试剂；优选为RNA提取试剂和一步法RT-qPCR反应试剂。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括建库试剂用于建库及文库富集。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂由以下成分组成：逆转录酶、高保真酶、Taq酶、多重扩增反应液。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂的反应程序为：
7.一种甲型流感病毒全基因组的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的扩增方法，其特征在于，步骤(1)所述的样本包括鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液和/或气管吸取物。
9.根据权利要求7所述的
10.根据权利要求9所述的扩增方法，其特征在于，所述的反应体系的反应程序为：
11.权利要求1所述的引物或权利要求2-6任一项所述的试剂盒在甲型流感病毒全基因组测序中的应用。
12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述的甲型流感病毒全基因组测序包括二代测序或三代测序。
13.根据权利要求11或12所述的应用，其特征在于，所述的甲型流感病毒包括H1N1、H2N2、H3N2、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2和H10N8。
...【技术特征摘要】
1.一种扩增甲型流感病毒全基因组的引物，其特征在于，所述的引物序列如seq idno.1-seq id no.2所示。
2.一种扩增甲型流感病毒全基因组的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求1所述的引物。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还包括rna提取试剂、rna反转录试剂和pcr扩增试剂；优选为rna提取试剂和一步法rt-qpcr反应试剂。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括建库试剂用于建库及文库富集。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的pcr扩增试剂由以下成分组成：逆转录酶、高保真酶、taq酶、多重扩增反应液。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的pcr扩增试剂的反应程序为：
7.一种甲型流感病毒全基因组的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：
【专利技术属性】
技术研发人员：宋玉凤，田谷，王雷，张志强，
申请(专利权)人：北京卓诚惠生生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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