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一种对映选择性提高的宇佐美曲霉环氧化物水解酶突变体制造技术

技术编号:20857513 阅读:39 留言:0更新日期:2019-04-13 11:19
本发明专利技术公开了一种对映选择性提高的宇佐美曲霉环氧化物水解酶突变体,属于酶工程和生物催化技术领域。本发明专利技术基于理性设计对宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)环氧化物水解酶(AuEH2)进行分子改造,结合基因的定点饱和突变方法,获得多个对映选择性提高的环氧化物水解酶突变体。本发明专利技术获得的9个对映选择性提高的突变体催化外消旋对甲基苯基缩水甘油醚(rac‑pMPGE)的对映体比率(E值)相比野生型,从12.7分别提高至32.4、31.1、27.8、25.8、23.5、22.4、20.2、14.1、13.6。

【技术实现步骤摘要】
一种对映选择性提高的宇佐美曲霉环氧化物水解酶突变体
本专利技术涉及一种对映选择性提高的宇佐美曲霉环氧化物水解酶突变体,属于酶工程和生物催化

技术介绍
手性环氧化物和邻二醇是合成手性药物、农业、香料及精细化工等行业各种活性物质的重要中间体,具有广阔的应用前景和市场需求。光活性的手性化合物具有不同于外消旋体的独特性质,其在生物体内的代谢途径、代谢速率、药理及毒性等方面的差异,使其在化学和生命科学产业有着崭新和特殊的用途。20世纪60年代,震惊世界的“反应停事件”已经充分说明获得光学纯化合物的必要性。传统的化学法拆分环氧化物往往需要重金属类有毒物质作为催化剂,不仅面临着环境的巨大挑战,且很难获得高产率的手性纯化合物。环氧化物水解酶(Epoxidehydrolases,EHs)是一类催化水分子立体选择性的加成环氧化物水解为相应1,2-二醇的水解酶类,是一种典型α/β折叠型水解酶。然而,不同来源的EHs的性质均存在很大的差异,自然界筛选到的具有EHs活性的微生物往往存在产酶活低、对映选择性较低及稳定性差等缺陷,往往不能满足工业化应用的需求。目前,研究较多的微生物EH主要来自于黑曲霉(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对映选择性提高的环氧化物水解酶AuEH2突变体,其特征在于,所述突变体是(a)或(b):(a)在SEQ ID NO.1所示序列基础上,将第250位丙氨酸(A)突变为组氨酸(H)、精氨酸(R)、甘氨酸(G)、赖氨酸(K)、天冬酰胺(N)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、谷氨酰胺(Q)、或脯氨酸(P);(b)在(a)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有环氧化物水解酶活性的由(a)衍生的蛋白质。

【技术特征摘要】
1.一种对映选择性提高的环氧化物水解酶AuEH2突变体,其特征在于,所述突变体是(a)或(b):(a)在SEQIDNO.1所示序列基础上,将第250位丙氨酸(A)突变为组氨酸(H)、精氨酸(R)、甘氨酸(G)、赖氨酸(K)、天冬酰胺(N)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、谷氨酰胺(Q)、或脯氨酸(P);(b)在(a)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有环氧化物水解酶活性的由(a)衍生的蛋白质。2.编码权利要求1所述突变体的基因。3.携带权利要求2所述基因的载体或表达权利要求1所述突变体的细胞。4.一种基因工程菌,其特征在于,以pET系列质粒为载体,以大肠杆菌为宿主,表达权利要求1所述环氧化物水解酶AuEH2突变体。5.含有权利要求1所述环氧化...

【专利技术属性】
技术研发人员:苏永君王婷婷徐雄峰文正胡博醇胡蝶李剑芳邬敏辰
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:江苏,32

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