一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法技术

本发明专利技术公开了一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法，包括取脉络宁口服液供试品溶液以及标准品溶液进行HPLC检测，色谱条件：C18色谱柱，柱温25～40℃；以甲醇为流动相A，酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，记录色谱图，以脉络宁口服液指纹图谱为参照，由相似度软件计算供试品相似度，供试品指纹图谱应与标准指纹图谱相似；并用外标一点法计算脉络宁口服液中成分含量。本发明专利技术提方法具有良好的精密度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高，耐用性良好；本发明专利技术方法脉络宁口服液指纹图谱的分离度、重现性均较好，信息全面，标示出21个共有峰，各批次样品的相似度在0.95以上，能全面、客观、科学地评价脉络宁口服液的质量。

【技术实现步骤摘要】
一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法
本专利技术属于分析化学领域，特别涉及一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法。
技术介绍
中药复方成分极为复杂，仅仅使用定性鉴别和指标成分的含量测定方法，很难准确的判断其内在的质量。同时中药复方是多种化学成分综合作用的结果，因此以某种单一的成分作为质量控制的指标明显不适应中药复方质量控制的要求。脉络宁口服液是脉络宁注射液剂型改革而成的口服剂型，是脉络宁系列产品之一，具有清热养阴、活血祛瘀的功效。文献研究发现，脉络宁口服液的药学研究相对比较薄弱，仅见肉桂酸、哈巴俄苷的含量测定和薄层色谱鉴别。申请人采用脉络宁注射液指纹图谱的研究方法(CN200410008733.6实施例1色谱条件)，对脉络宁口服液和脉络宁注射液进行了比较，结果发现除原儿茶酸和原儿茶醛出峰不明显无法确定外，其余在注射液指纹图谱中存在的共有峰均能在口服液中找到，但是口服液中5-羟甲基糠醛(5-HMF)、肉桂酸的含量小于注射液，其余成分口服液均大于注射液；同时，由于脉络宁口服液的制备工艺与注射液不同，注射液中还含有其他新的成分，申请人采用注射液指纹图谱的色谱条件，发现口服液中出峰更为复杂，且部分成分无法完全分离，明显影响了分离效果。说明现行的质量控制技术标准已经不能满足脉络宁口服液应用发展之需要。只有对脉络宁口服液进行质量标准研究，才能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分的检测方法，该检测方法具有良好的精密度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高，耐用性良好；本专利技术确定脉络宁口服液共有峰共计21个，在指纹图谱研究的基础上，对可能含有的成分进行进一步指认，对比了5-HMF，原儿茶酸、原儿茶醛、新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、1,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸、石斛酚、木犀草苷、滨蒿内酯、杓唇石斛素、毛兰素、哈巴俄苷、没食子酸、阿魏酸、川续断皂苷乙、金丝桃苷、β-谷甾醇、齐墩果酸、槲皮素、木犀草苷、熊果酸、芦丁、对羟基肉桂酸、间羟基肉桂酸、栀子苷等几十种成分，比较保留时间和紫外吸收光谱确定了13个色谱峰，并对其中9种成分进行含量测定，该方法简便可行、快速准确，可以作为评价脉络宁口服液质量的有效方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：脉络宁口服液是由以下制备方法制得的：牛膝1～4重量份、玄参1～4重量份、石斛1～4重量份、金银花与山银花共1～4重量份，其中，以金银花与山银花重量之和为100％计，金银花与山银花的比例为80％:20％～50％:50％；5味药材加总重量4～8倍量水，浸泡1～3小时后，煎煮提取2～3次，每次1～3小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.30(80℃)，加乙醇使含醇量至60％～80％，静置，取上清液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25～1.45(80℃)，加乙醇至含醇量为70％～90％，静置，取上清液，回收除尽乙醇，加水适量冷藏，过滤，按常规工艺制备成口服液。作为所述的脉络宁口服液的优选技术方案，加水至口服液总体积的90％～95％，冷藏，过滤，加入甜菊甙、吐温-80使得口服液中甜菊甙的质量分数为0.1～0.15％、吐温-80的质量分数为4～6％，调pH至8.0-8.6，过滤，加余量水，灌封，灭菌，得脉络宁口服液。一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法，包括取脉络宁口服液供试品溶液以及标准品溶液进行HPLC检测，HPLC检测的色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱，柱温25～40℃；以甲醇为流动相A，酸的水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为0.8～1.2mL/min；检测波长为260nm～340nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000；记录色谱图，以脉络宁口服液的指纹图谱为参照，获得脉络宁口服液的成分，由相似度软件计算供试品相似度，供试品指纹图谱应与标准指纹图谱相似；并用外标一点法分别计算脉络宁口服液中9个成分含量。优选的，所述的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱，柱温35℃；以甲醇为流动相A，酸的水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为1.0mL/min；检测波长为280nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000。所述的C18色谱柱为小粒径色谱柱，优选为phenomenexLunaC18(4.6mm*250mm，粒径5μm)。所述的酸为磷酸、甲酸或冰乙酸中的一种或两种以上的混合；优选为磷酸。在所述的酸的水溶液中酸的体积百分数为0.05％～0.5％；优选为0.1％～0.5％。所述的供试品溶液的制备方法：取1mL脉络宁口服液，50％甲醇定容至10mL，过0.22μm滤膜，取续滤液，即得。所述的标准品溶液的制备方法：取标准品，精密称定，50％甲醇定容。所述的标准品溶液为5-羟甲基糠醛(5-HMF)、原儿茶酸、新绿原酸、原儿茶醛、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸、哈巴俄苷中的一种或两者以上的混合溶液，优选为5-羟甲基糠醛、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸的混合溶液，标准品溶液中各成分浓度：5-羟甲基糠醛5～500μg/mL、新绿原酸3～3000μg/mL、绿原酸30～1500μg/mL、隐绿原酸30～1500μg/mL、咖啡酸2～400μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸30～1500μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸15～1500μg/mL、4,5-二咖啡酰奎宁酸5～1000μg/mL、肉桂酸2～200μg/mL。优选的，标准品溶液中各成分浓度：5-羟甲基糠醛5.89～58.9μg/mL、新绿原酸3.64～36.4μg/mL、绿原酸53.2～532μg/mL、隐绿原酸47.8～478μg/mL、咖啡酸2.43～24.3μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸34.8～348μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸21～210μg/mL、4,5-二咖啡酰奎宁酸6.6～66μg/mL、肉桂酸3.13～31.3μg/mL。本专利技术提供的一些实施例中，标准品溶液中5-羟甲基糠醛81.12μg/mL、原儿茶酸28.625μg/mL、新绿原酸426μg/mL、原儿茶醛189μg/mL、绿原酸51.3μg/mL、隐绿原酸39.4μg/mL、咖啡酸21μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸179μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸241μg/mL、木犀草苷41.33μg/mL、4,5-二咖啡酰奎宁酸19.8μg/mL、肉桂酸465μg/mL、哈巴俄苷11本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法，其特征在于包括取脉络宁口服液供试品溶液以及标准品溶液进行HPLC检测，所述HPLC检测的色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱，柱温25～40℃；以甲醇为流动相A，酸水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为0.8～1.2mL/min；检测波长为260nm～340nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000；记录色谱图，以脉络宁口服液的指纹图谱为参照，由相似度软件计算供试品相似度；并用外标一点法计算脉络宁口服液中成分含量。

【技术特征摘要】
1.一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法，其特征在于包括取脉络宁口服液供试品溶液以及标准品溶液进行HPLC检测，所述HPLC检测的色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱，柱温25～40℃；以甲醇为流动相A，酸水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为0.8～1.2mL/min；检测波长为260nm～340nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000；记录色谱图，以脉络宁口服液的指纹图谱为参照，由相似度软件计算供试品相似度；并用外标一点法计算脉络宁口服液中成分含量。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱，柱温35℃；以甲醇为流动相A，酸水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为1.0mL/min；检测波长为280nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的C18色谱柱为phenomenexLunaC18(4.6mm*250mm，粒径5μm)。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的酸为磷酸、甲酸或冰乙酸中的一种或者两者以上的混合，优选为磷酸。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的酸水溶液中酸的体积百分数为0.05％～0.5％，优选为0.1％～0.5％。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的供试品溶液的制备方法：取脉络宁口服液，50％甲醇定容，过0.22μm滤膜，取续滤液，即得；所述的标准品溶液的制备方法：取5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、新绿原酸、原儿茶醛、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸、哈巴俄苷标准品中的至少一种，精密称定，50％甲醇定容。7.根据权利要求1或6所述的检测方法，其特征在于所述的标准品溶液为5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、新绿原酸、原儿茶醛、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：周红燕，张蕙，汤卫国，徐向阳，夏云，崔凌云，
申请(专利权)人：金陵药业股份有限公司技术中心，
类型：发明
国别省市：江苏,32