一种基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，A1:制备已知啶虫脒浓度的待测样液得A1品；A2：制备空白对照溶液得A2品；A3：取A1品和A2品分别用荧光光度计进行扫描测定437nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，获得其荧光发射光谱；A4：根据荧光发射光谱绘制得到啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线；B、根据标准曲线建立有关啶虫脒浓度与荧光强度之间相互关系的回归方程；C:制备未知啶虫脒浓度的待测溶液得C品；D:取C品用荧光光度计进行扫描测定437nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，计算C品与A2品的荧光强度差值，将该荧光强度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中啶虫脒的浓度。该方法具有构建方便、灵敏度高、特异性好等优势。

【技术实现步骤摘要】
一种基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法
本专利技术涉及一种啶虫脒农药检测方法，特别是一种基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法。
技术介绍
啶虫脒(N-(N-氰基-乙亚胺基)-N-甲基-2-氯吡啶-5-甲胺)是一种新型杀虫剂，作用于昆虫神经系统突触部位的烟碱乙酰胆碱受体，干扰昆虫神经系统的刺激传导，引起神经系统通路阻塞，造成神经递质乙酰胆碱在突触部位的积累，从而导致昆虫麻痹，最终死亡。啶虫脒用于防治水稻、蔬菜、果树、茶树的翅目及鞘翅目等害虫，因其活性高、用量少、杀虫速效、杀虫谱广、持效期长等特点，被人们广泛应用于农产品和肉制品的害虫防治。由于啶虫脒的广泛使用，它已经广泛存在于人类生活环境中，对人类的身体健康和生存环境造成了极大的潜在威胁。因此，有必要采取措施有效监测农产品和肉制品中啶虫脒农药的含量。目前啶虫脒农药的检测方法主要有仪器分析方法、酶抑制法、免疫分析法、比色法、化学发光技术、电化学法、荧光法等。仪器分析方法主要包括高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)等，仪器分析方法不足之处在于所需仪器设备价格昂贵，需要有专业人员操作，不适合在现场快速检测。酶抑制法的不足之处在于其敏感度和可重复性有待提高，灵敏度不如仪器法。免疫分析法的不足之处在于易产生假阳性。比色法缺陷在于眼睛观察存在主观误差，准确度比较低。利用纳米金比色检测的方法绝大多数是利用其聚集变色效应，容易受到非靶标引起的非特异性聚集影响，尽管最近报道了纳米金过氧化物酶活性来构建传感器检测啶虫脒，其酶作用容易受到环境的干扰。化学发光技术的不足之处在于其信号输出容易受环境的干扰，导致检测结果不可靠。电化学法虽然有很高的灵敏度和特异性，但通常需要对电极进行修饰和需要电化学工作站等一些复杂仪器。目前荧光法主要应用重金属量子点和有机染料作为荧光源，这对环境和人体都存在一定的危害。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法。本方法应用无毒的碳点作为信号分子，纳米金作为淬灭剂，都不需要任何的接枝和修饰，再结合适配体技术，既可以克服传统的缺陷，又可以简便可靠的构建荧光适配体传感器，提高检测的特异性和灵敏度。该方法具有构建方便、灵敏度高、特异性好等优势，可广泛应用于农产品、肉制品等中啶虫脒残留的快速检测。本专利技术的技术方案：一种基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，其特征在于：包括有以下步骤：A：绘制啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线A1：制备已知啶虫脒浓度的待测样液，得A1品；A2：制备空白对照溶液，得A2品；A3：取A1品和A2品分别用荧光光度计进行扫描测定437nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，获得其荧光发射光谱；A4：根据荧光发射光谱绘制得到啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线；B、根据啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线建立有关啶虫脒浓度与荧光强度之间相互关系的回归方程；C：制备未知啶虫脒浓度的待测溶液，得C品；D：取C品用荧光光度计进行扫描测定437nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，计算C品与A2品的荧光强度差值，将该荧光强度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中啶虫脒的浓度。前述的基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，所述A，绘制啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线的具体方法为：A1：取多支刻度离心管，每支刻度离心管加入一种已知浓度的啶虫脒标准液和啶虫脒适配体，混匀后孵育，然后加入AuNPs溶液混匀孵育，接着再加入CDs溶液继续孵育，最后加入HEPES缓冲液混匀即可制备得到待测样液，为A1品；A2：取1支刻度离心管，用二蒸水替代已知浓度的啶虫脒标准液，按照A1的方法即可制备得到空白对照溶液，为A2品；A3：取A1品和A2品分别用荧光光度计进行扫描测定437nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，获得其荧光发射光谱；A4：根据吸收光谱，将不同浓度的A1品与A2品之间的荧光强度差值作为纵坐标，啶虫脒浓度作为横坐标绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线；所述步骤B中，当啶虫脒浓度为5μg/L≤c≤100μg/L时，啶虫脒浓度与荧光强度之间相互关系的回归方程为：y＝2.31c+3.07；当啶虫脒浓度为100μg/L＜c≤4000μg/L时，y为荧光强度差值＝含啶虫脒的待测品的荧光强度-A2品的荧光强度；所述的制备未知啶虫脒浓度的待测溶液C品的具体方法为：C、用实际样液替代已知浓度的啶虫脒标准液，按照A1的方法即可制备得到未知啶虫脒浓度的待测溶液，为C品。前述的基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，所述的啶虫脒适配体的碱基组成为：5’-TGTAATTTGTCTGCAGCGGTTCTTGATCGCTGACACCATATTATGAAGA-3’，其浓度为25nM。前述的基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，所述的AuNPs溶液的浓度为3.2nM；CDs溶液的浓度为0.2mg·ml-1。前述的基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，所述的HEPES缓冲液pH值为8.0，其浓度为20mM。前述的基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，所述的步骤A3及步骤D中，获得荧光发射光谱的具体方法：取待测品置于石英皿中，用F-4600荧光光度计进行扫描测定437nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，获得其荧光发射光谱，波长扫描范围为380-600nm。前述的基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，所述的A1品、A2品或C品制备过程中：加入已知浓度的啶虫脒标准液、二蒸水或实际样液，和啶虫脒适配体混匀后置于25—35℃条件下孵育5—15min，然后加入AuNPs溶液，混匀后置于25—35℃条件下再孵育5—15min，之后加入CDs溶液，混匀后置于25—35℃条件下再孵育5—15min，最后再加入HEPES缓冲液混匀。前述的基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，所述的A1品、A2品或C品制备过程中：已知浓度的啶虫脒标准液、二蒸水或实际样液的用量为10.0μL；啶虫脒适配体的用量为5.0μL；AuNPs溶液的用量为100.0μL；CDs溶液的用量为20.0μL；HEPES缓冲液的用量为65.0μL，按照上述比例配制。前述的基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，所述待测样液A1品中啶虫脒浓度维持在5-4000μg/L。本专利技术的有益效果：本方法检测原理为：HEPES缓冲液体系中，啶虫脒适配体可以吸附和包裹在纳米金表面上，使纳米金表面的负电荷浓度升高并抑制其过氧化物酶活性，加入啶虫脒后，由于适配体与啶虫脒结合并离开纳米金表面，纳米金的过氧化物酶活性得到恢复，在437nm处出现产物特征吸收峰，且荧光强度变化与啶虫脒的浓度成正比，因而该方法可以用于啶虫脒检测。本方法对啶虫脒的最低检测限为1.08μg·L-1，具有灵敏度高，特异性好等优点。本检测法构建方便，且操作简单快速，可广泛应用于农产品、肉制品等中啶虫脒残留的快速检测。如附图4所示，用本专利技术方法测定当地超市购买的西红柿、黄瓜和白菜，往样品中分别加入100μg/L、1000μg/L、2000μg/L的啶虫脒，得到的回收率为92.6％-105.1％,，证明本方法可靠性。而从附图3中可以看出，本专利技术建立的方法可以特异性地检测出啶虫脒，其他竞争性的靶标对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，其特征在于：包括有以下步骤：A：绘制啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线A1：制备已知啶虫脒浓度的待测样液，得A1品；A2：制备空白对照溶液，得A2品；A3：取A1品和A2品分别用荧光光度计进行扫描测定437nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，获得其荧光发射光谱；A4：根据荧光发射光谱绘制得到啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线；B、根据啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线建立有关啶虫脒浓度与荧光强度之间相互关系的回归方程；C：制备未知啶虫脒浓度的待测溶液，得C品；D：取C品用荧光光度计进行扫描测定437nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，计算C品与A2品的荧光强度差值，将该荧光强度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中啶虫脒的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，其特征在于：包括有以下步骤：A：绘制啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线A1：制备已知啶虫脒浓度的待测样液，得A1品；A2：制备空白对照溶液，得A2品；A3：取A1品和A2品分别用荧光光度计进行扫描测定437nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，获得其荧光发射光谱；A4：根据荧光发射光谱绘制得到啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线；B、根据啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线建立有关啶虫脒浓度与荧光强度之间相互关系的回归方程；C：制备未知啶虫脒浓度的待测溶液，得C品；D：取C品用荧光光度计进行扫描测定437nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，计算C品与A2品的荧光强度差值，将该荧光强度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中啶虫脒的浓度。2.根据权利要求1所述的基于碳点荧光内滤效应的啶虫脒农药检测方法，其特征在于：所述A，绘制啶虫脒浓度与荧光强度变化量标准曲线的具体方法为：A1：取多支刻度离心管，每支刻度离心管加入一种已知浓度的啶虫脒标准液和啶虫脒适配体，混匀后孵育，然后加入AuNPs溶液混匀孵育，接着再加入CDs溶液继续孵育，最后加入HEPES缓冲液混匀即可制备得到待测样液，为A1品；A2：取1支刻度离心管，用二蒸水替代已知浓度的啶虫脒标准液，按照A1的方法即可制备得到空白对照溶液，为A2品；A3：取A1品和A2品分别用荧光光度计进行扫描测定437nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，获得其荧光发射光谱；A4：根据吸收光谱，将不同浓度的A1品与A2品之间的荧光强度差值作为纵坐标，啶虫脒浓度作为横坐标绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线；所述步骤B中，当啶虫脒浓度为5μg/L≤c≤100μg/L时，啶虫脒浓度与荧光强度之间相互关系的回归方程为：y＝2.31c+3.07；当啶虫脒浓度为100μg/L＜c≤4000μg/L时，y为荧光强度差值＝含啶虫脒的待测品的荧光强度-A2品的荧光强度；所述的制备未知啶虫脒浓度的待测溶液C品的具体方法为：C、用实际样液替代已知浓度的啶虫脒标准液，按照A1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴远根，王金龙，杨文平，陶菡，冯才伟，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52