瑞士乳杆菌H11及其应用制造技术

本发明专利技术涉及瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)H11及其用于制备褐色活性乳饮料的方法，包括MRS培养基制备、活化菌株、菌株培养、制备含葡萄糖的脱脂乳液与制备褐色活性乳酸菌饮料等步骤。本发明专利技术的优点在于所制备的褐色活性乳饮料能够降低发酵时间、缩短发酵成本，在贮藏期间口感、风味良好，并且具有较好稳定性；同时在发酵期间产生了具有降血压功能的ACE抑制活性和生物活性肽Val‑Pro‑Pro和Ile‑Pro‑Pro，增加了乳饮料产品的功能性和保健性。

【技术实现步骤摘要】
瑞士乳杆菌H11及其应用
本专利技术属于生物应用
特别涉及瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)H11及其制备具有降血压功能的益生菌褐色发酵乳饮料。
技术介绍
随着我国经济发展，人民生活改善和生活节奏加快，由此带来的众多不健康生活方式导致高血压患病人群趋于年轻化，发病率呈逐年上升趋势。目前，治疗高血压药物主要是化学合成的血管紧张素转化酶(Angiotensin-I-convertingenenzyme,ACE)抑制剂。它虽然能有效降低血压，但在临床使用中显现出血压过低、肾功能衰竭、咳嗽、皮肤过敏和血管性水肿等诸多毒副作用。因此，食源性天然ACE抑制肽引起众多科学家的浓厚兴趣，研制安全、无毒、高效的抗高血压功能性食品日益尤其成为治疗和预防高血压的研究热点。其中，乳源ACE抑制肽及其功能性食品备受瞩目。乳酸菌(LacticAcidBacteria,LAB)是目前通过发酵获得天然ACE抑制肽方面利用最多的微生物之一。乳酸菌作为公认的安全微生物，广泛用于发酵食品加工。在众多乳酸菌中，瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)以其蛋白水解能力强、生长迅速、产酸速度快著称，也是抗高血压活性研究最多的乳酸菌。目前，制作褐色活性乳饮料的发酵菌种以干酪乳杆菌为主，而瑞士乳杆菌在褐色活性乳饮料中的应用较少。褐色活性乳酸菌饮料是采用乳酸菌菌种，经37℃发酵原料乳，再经配料、均质等工艺制成的清新爽口、风味独特的低热量、富含有生物活性物质、蛋白质、维生素的发酵型乳酸菌饮料。为避免发酵期间杂菌污染，对用于发酵的脱脂乳液进行115℃灭菌15min，而导致发酵乳在高温下发生美拉德反应，故呈褐色。在日本、韩国、欧美等国家均已有工业化的产品，且市场前景良好。目前，制作褐色活性乳酸菌饮料的发酵菌种以干酪乳杆菌为主，因此，研究和选育一种发酵时间短、具有优良的感官品质及风味特性，开发产品的益生特性具有重要意义。
技术实现思路
[要解决的技术问题]本专利技术的目的是提供一种瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)H11及其用途。[技术方案]本专利技术是通过下述技术方案实现的。本专利技术所述的瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)H11，该菌株已于2018年8月30日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCCNo16405.。本专利技术还涉及瑞士乳杆菌H11在制备褐色活性乳饮料中的用途。根据本专利技术的一种优选实施方式，所述的褐色活性乳饮料制备步骤如下：A、MRS培养基制备按照20g/L葡萄糖、10g/L大豆蛋白胨、5g/L酵母粉、5g/L牛肉膏、5g/LNaAc、2g/LK2HPO4、2g/L柠檬酸三铵、200mg/LMgSO4·7H2O、50mg/LMnSO4·5H2O与1g/LTween-80称取这些原料，混合均匀，将得到的混合物混溶于去离子水中，得到的溶液在温度115℃下灭菌10min，得到所述的MRS培养基；B、活化菌株将冷冻保存的瑞士乳杆菌H11菌株接种到MRS培养基中，震荡混匀，在温度37℃的条件下恒温培养24h，以相同方式连续活化两代，再用灭菌生理盐水离心洗涤2～3次，然后把洗涤的菌体悬浮于4～8ml灭菌生理盐水中，制成一种菌悬液；C、菌株培养按照以MRS培养基重量计1～3％接种量，把步骤B得到的菌悬液添加到步骤A得到的MRS培养基中，在恒温培养箱中在温度37℃的条件下培养16～20h，得到瑞士乳杆菌H11培养液；D、制备含葡萄糖的脱脂乳液将8～16重量份脱脂乳粉与1.5～2.5重量份葡萄糖混合均匀，溶解于软化水中，再用这种软化水补充至总量为100重量份，加热至温度62～65℃，接着均质化处理与灭菌褐变处理，然后冷却至温度37℃以下，得到含葡萄糖的脱脂乳液；E、制备褐色活性乳酸菌饮料将步骤C得到的瑞士乳杆菌H11的培养液按照4～6×106cfu/ml接种于步骤D得到的含葡萄糖脱脂乳液中，混合均匀，在恒温培养箱中在温度37℃的条件下培养30～40h，然后取出急冷，再将其与白砂糖和软化水按照重量比25:10～15:56～68混合配制成褐色活性乳酸菌饮料。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在步骤D中，脱脂乳粉与葡萄糖的重量比是13：2。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在步骤D中，所述的脱脂乳粉是低热脱脂乳粉、中热脱脂乳粉或高热脱脂乳粉。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在步骤D中，含葡萄糖的脱脂乳粉溶液在均质压力16～25MPa的条件下均质化处理14～35min，接着在温度115℃的条件下灭菌褐变处理8～12min。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在步骤E中，接种的含葡萄糖脱脂乳液中在温度37℃的条件下培养35h。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在步骤E中，所述褐色活性乳酸菌饮料在35h到达发酵终点同时开始贮藏，贮藏期间的pH值是3.51～3.60，滴定酸度为56.10～63.53°T。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在步骤E中，所述褐色活性乳酸菌饮料在储藏期间的血管紧张素转换酶抑制率是60.97％～70.13％；生物活性肽Val-Pro-Pro的含量是1.10～1.34μM；Ile-Pro-Pro的含量是0.19～0.28μM。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在步骤E中，所述的褐色活性乳酸菌饮料在储藏期间含有1.72×108cfu/g～3.84×108cfu/ml瑞士乳杆菌H11。下面将更详细地描述本专利技术。本专利技术涉及一种瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)H11，该菌株已于2018年8月30日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCCNo.16405。本专利技术的瑞士乳杆菌H11是从新疆地区伊犁州酸马奶中分离获得的，它具有优异的发酵速率。它是按照下述筛选方法筛选得到的：I、菌株分离方法制备MRS培养基：按照20g/L葡萄糖、10g/L大豆蛋白胨、5g/L酵母粉、5g/L牛肉膏、5g/LNaAc、2g/LK2HPO4、2g/L柠檬酸三铵、200mg/LMgSO4·7H2O、50mg/LMnSO4·5H2O与1g/LTween-80称取这些原料，混合均匀，将得到的混合物混溶于去离子水中，得到的溶液在温度115℃下灭菌10min，得到所述的MRS培养基；往所述的MRS培养基中添加15g/L琼脂粉，在温度115℃下灭菌10min，得到MRS琼脂培养基。上述的酸马奶样品用涡旋振荡器混匀，称取0.5g或0.5ml样品放入4.5ml浓度为以重量计0.85％的灭菌生理盐水中，采用十倍稀释法对样品进行梯度稀释(10-4，10-5，10-6)，然后涂布在含有放线菌酮(浓度以重量计0.1％，OXID公司销售产品)和硫酸粘菌素(浓度以重量计0.1％，OXID公司销售产品)的MRS琼脂培养基或者M17琼脂平板培养基(OXID公司销售产品)上，在温度30℃下厌氧培养48h～72h，挑取单菌落，转接种于TPY增菌培养液(见下面的说明)中，在温度30℃下培养24h～48h，观察菌落形态和革兰氏染色细胞形态特本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)H11，该菌株已于2018年8月30日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCCNo 16405。

【技术特征摘要】
1.一种瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)H11，该菌株已于2018年8月30日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCCNo16405。2.根据权利要求1所述的瑞士乳杆菌H11在制备褐色活性乳饮料中的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述的褐色活性乳饮料制备步骤如下：A、MRS培养基制备按照20g/L葡萄糖、10g/L大豆蛋白胨、5g/L酵母粉、5g/L牛肉膏、5g/LNaAc、2g/LK2HPO4、2g/L柠檬酸三铵、200mg/LMgSO4·7H2O、50mg/LMnSO4·5H2O与1g/LTween-80称取这些原料，混合均匀，将得到的混合物混溶于去离子水中，得到的溶液在温度115℃下灭菌10min，得到所述的MRS培养基；B、活化菌株将冷冻保存的瑞士乳杆菌H11菌株接种到MRS培养基中，震荡混匀，在温度37℃的条件下恒温培养24h，以相同方式连续活化两代，再用灭菌生理盐水离心洗涤2～3次，然后把洗涤的菌体悬浮于4～8ml灭菌生理盐水中，制成一种菌悬液；C、菌株培养按照以MRS培养基重量计1～3％接种量，把步骤B得到的菌悬液添加到步骤A得到的MRS培养基中，在恒温培养箱中在温度37℃的条件下培养16～20h，得到瑞士乳杆菌H11培养液；D、制备含葡萄糖的脱脂乳液将8～16重量份脱脂乳粉与1.5～2.5重量份葡萄糖混合均匀，溶解于软化水中，再用这种软化水补充至总量为100重量份，加热至温度62～65℃，接着均质化处理与灭菌褐变处理，然后冷却至温度3...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈永福，张和平，王昊乾，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15