本发明专利技术公开了一种天麻素或乙酰天麻素的应用，其特征是天麻素或乙酰天麻素可以有效的降低抑制tau蛋白的病理损伤，天麻素或乙酰天麻素通过抑制tau蛋白聚集和tau蛋白磷酸化程度两个途径减轻tau蛋白的病理损伤。本发明专利技术提供了一种tau蛋白有效的病理损伤的抑制剂，可以用于科研临床方面作为的标准品。
Application of Gastrodin or AcetylGastrodin in Improving the Pathological Damage of tau Protein
The invention discloses the application of gastrodin or acetylgastrodin, which is characterized by that gastrodin or acetylgastrodin can effectively reduce the pathological damage of tau protein, and gastrodin or acetylgastrodin can reduce the pathological damage of tau protein by inhibiting the aggregation of tau protein and the phosphorylation of tau protein. The invention provides an effective inhibitor of tau protein for pathological damage, which can be used as a standard in scientific research and clinical aspects.
【技术实现步骤摘要】
一种天麻素或乙酰天麻素在改善tau蛋白的病理损伤中应用
本专利技术属于改善蛋白的病理损伤
，具体涉及一种改善tau蛋白的病理损伤的分子领域。
技术介绍
微管系统是细胞骨架成分，可参与多种细胞功能。微管由微管蛋白及微管相关蛋白组成，Tau蛋白是含量最高的微管相关蛋白。正常Tau蛋白的细胞功能是与微管蛋白结合促进其聚合形成微管；与形成的微管结合，维持微管稳定性，降低微管蛋白分子的解离，并诱导微管成束。Tau蛋白基因位于17染色体长臂。正常人中由于Tau蛋白mRNA剪辑方式不同，可表达出6种同功异构体。Tau蛋白为含磷酸基蛋白，正常Tau蛋白分子含2～3个磷酸基。Tau蛋白异常折叠和过度磷酸化，可以导致蛋白质丧失正常生物功能，从而导致与之相关的病理改变，甚至是疾病的发生。天麻素英文为gastrodin，为一种植物提取物，具有多种药理作用,对血压、血小板聚集、自由基以及免疫功能等均有影响。乙酰天麻素英文为Acetylgastrodin，简称AG，为天麻素一种重要衍生物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种改善tau蛋白的病理损伤的物质。本专利技术的目的是这样实现的，包括天麻素或乙酰天麻素，用于改善tau蛋白的病理损伤，特别是改善人类tau蛋白的病理损伤，其通过抑制tau蛋白聚集特别是抑制humantau311蛋白聚集，以及抑制humantau441蛋白聚集的途径实现；或者通过抑制tau蛋白磷酸化的水平，抑制位点是tau蛋白396位点和tau蛋白231位点和tau蛋白199位点。本专利技术（优点）天麻素是天麻中众多成分的一种，毒性低，可以长时间服用，天麻素易于大规模生产，其可以减轻tau蛋白的病理损伤，通过抑制tau蛋白聚集和磷酸化实现。附图说明图1为天麻素对humantauAc-306VQIVYK311的干扰实验，即天麻素对Humantau311的干扰实验。图2为天麻素对Humantau441（abcam公司）的干扰实验。图3天麻素减轻转基因小鼠大脑中的tau蛋白磷酸化水平。图4WB实验证实，天麻素治疗后的转基因小鼠大脑中的tau磷酸化在病理位点396,231，199明显减轻。图5为乙酰天麻素对humantauAc-306VQIVYK311的干扰实验，即乙酰天麻素对Humantau311的干扰实验。图6为乙酰天麻素对Humantau441（abcam公司）的干扰实验。图7为乙酰天麻素减轻转基因小鼠大脑中的tau蛋白磷酸化水平。图8为WB实验证实，乙酰天麻素治疗后的转基因小鼠大脑中的tau磷酸化在病理位点396,231，199明显减轻。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作进一步的说明，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术教导所作的任何变换或替换，均属于本专利技术的保护范围。实施例1天麻素对tau蛋白聚集的抑制本部分的方法和对结果的判断使用了文献1和2和3的方法。在体外研究中，我们采用负染透射电镜实验观察天麻素，其中天麻素来源于昆明制药集团股份有限公司，天麻素对tau聚集后的螺旋丝状物的干扰。Tau331蛋白来源于成都凯捷生物医药科技发展有限公司。图1为天麻素对humantauAc-306VQIVYK311的干扰实验，即天麻素对Humantau311的干扰实验，图片G-H说明:Tau331(100μM)孵育4天后的电镜图片，tau为螺旋丝状；I-J：天麻素（20μM）与humantau331蛋白相互作用4天后的电镜图片，tau331蛋白的螺旋丝结构被破坏，比例尺为200纳米（Scalebar=200nm）。图2天麻素对Humantau441的干扰实验材料，来源于abcam公司，图片说明K-L:HumanTau441(4μM)孵育4天后的电镜图片，tau为螺旋丝状；I-J：天麻素（2.5μM）与tau蛋白共同孵育4天后的电镜图片，比例尺为200纳米（Scalebar=200nm）,tau纤维化被天麻素干扰变形。实施例1结论：天麻素与tau蛋白共同孵育后能够破坏tau蛋白的结构，对tau蛋白的聚集有抑制效果。实施例2天麻素减轻转基因小鼠大脑中的tau蛋白磷酸化水平。我们将人类tau蛋白转基因进入到小鼠中，其实验方案我们按照文献[4]的方法进行。图3中A:control(Tg)为转基因小鼠大脑的免疫组织化学的切片，图3中B:Gastrodin(Tg)为给予了天麻素的转基因小鼠大脑的免疫组织化学的切片，图3中C:WT为野生型小鼠大脑的免疫组织化学的切片，免疫组化试验结果表明：与未治疗组相比，天麻素明显减轻了转基因小鼠的tau磷酸化水平约56%（p<0.05），与WT正常组相比无显著性差异（p>0.05）。图4中A:control(Tg)为转基因小鼠大脑的tau蛋白磷酸化，图4中B:Gastrodin(Tg)为给予了天麻素的转基因小鼠大脑tau蛋白磷酸化。WB实验进一步证实，天麻素治疗后的转基因小鼠大脑中的tau磷酸化在病理位点396,231，199明显减轻。转基因小鼠为P301Ltau小鼠，其构建和鉴定方法如下：P301Ltau转基因小鼠的构建方法为参考文献5和6中的方法，简要概述如下：以C57Bl⁄6XDBA2F1为背景，与C57Bl⁄6背景的小鼠回交。在控制神经元特异性mThy1.2启动子的条件下，通过PCR介导的途径，人病理的P301L突变被插入到cDNA编码最长的人脑tau亚型，小鼠可以表达最长的人tau亚型FTDP-17P301L突变，转基因tau的亚型包括外显子2和3以及4个微管结合重叠(htau402+3+4R).P301L转基因小鼠的鉴定：转基因小鼠的鉴定用寡核苷酸：tau-I(O-100,59-GGAGTTCGAAGTGATGGAAG-39)tau-K(O-101,59-GGTTTTTGCTGGAATCCTGG-39)，经PCR扩增得到碱基对为500的扩增产物，通过SmaI证实P301L基因的存在，至少生成10个独立的转基因株系，通过免疫印迹分析七中4个有类似的表达水平。通过实施例1和2说明天麻素可以减轻小鼠大脑中的tau蛋白磷酸化水平，改善tau蛋白病理。实施例3乙酰天麻素(AG)对tau蛋白聚集的抑制。本部分的方法和对结果的判断使用了文献1和2和3的方法。在体外研究中，我们采用负染透射电镜实验观察乙酰天麻素（昆明制药集团股份有限公司提供）对tau(成都凯捷生物医药科技发展有限公司提供)聚集后的螺旋丝状物的干扰。图5为乙酰天麻素对humantauAc-306VQIVYK311的干扰实验，即乙酰天麻素对Humantau311的干扰实验。A-B:humanTau331(100μM)孵育4天后的电镜图片，tau为螺旋丝状；C-D：乙酰天麻素（20μM）与tau331蛋白相互作用4天后的电镜图片，tau331蛋白的螺旋丝结构被破坏变形，比例尺为200纳米（Scalebar=200nm）。图6乙酰天麻素对Humantau441（abcam公司）的干扰实验。E-F:HumanTau441(4μM)孵育4天后的电镜图片，tau为螺旋丝状；G-H：乙酰天麻素（2μM）与tau蛋白共同孵育4天后的电镜图片，tau螺旋丝状结构被乙酰天麻素干扰变形，比例尺为200纳米（Scalebar=200nm）。实本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种天麻素或乙酰天麻素的应用，其特征在于改善tau蛋白的病理损伤。
【技术特征摘要】
1.一种天麻素或乙酰天麻素的应用，其特征在于改善tau蛋白的病理损伤。2.根据权利要求1所述的天麻素或乙酰天麻素的应用，其特征在于改善人类tau蛋白的病理损伤。3.根据权利要求2所述的天麻素或乙酰天麻素的应用，其特征在于所述的改善人类tau蛋白的病理损伤是抑制tau蛋白聚集。4.根据权利要求3所述的天麻素或乙酰天麻素的应用，其特征在于所述的抑制tau蛋白聚集是抑制tau311蛋白聚集。5.根据权利要求3所述的天麻素或乙酰天麻素的应用，其特征在于所述的抑制tau...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾跃勤，谷涓华，周新富，周荣光，
申请(专利权)人：昆明医科大学，
类型：发明
国别省市：云南,53
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