一种泪腺干细胞、泪腺干细胞的培养体系和培养方法技术

本发明专利技术涉及一种泪腺干细胞、泪腺干细胞的培养体系和培养方法，涉及细胞工程领域。本发明专利技术的泪腺干细胞的培养体系以DMEM/F12为基础培养基，添加以下组分构成培养液：细胞培养添加剂、非必需氨基酸、L‑丙氨酰‑L‑谷氨酰胺、丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路配体、成纤维细胞生长因子、Wnt信号通路配体和ROCK信号通路抑制剂的组合物，并以基质胶作为立体培养的支架。本发明专利技术的培养方法为，将小鼠泪腺组织消化成单细胞接种到基质胶中，待其凝固后，加入上述泪腺干细胞培养液中进行原代培养。采用本发明专利技术的方法培养的小鼠泪腺干细胞，数量较多，够稳定持续传代，并且具备恢复泪腺分泌功能的作用，可有效治疗干眼症。

A culture system and method of lacrimal gland stem cells and lacrimal gland stem cells

The invention relates to a culture system and a culture method of lacrimal gland stem cells and lacrimal gland stem cells, and relates to the field of cell engineering. The culture system of lacrimal gland stem cells of the present invention is based on DMEM/F12 and is composed of the following components: cell culture additive, nonessential amino acid, L alanyl L glutamine, mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase signal pathway ligand, fibroblast growth factor, Wnt signal pathway ligand and ROCK signal pathway inhibitor. The matrix glue is used as a scaffold for stereo culture. The cultivation method of the present invention is that the lacrimal gland tissue of mice is digested into single cells and inoculated into matrix gel. After coagulation, the lacrimal gland stem cells are added to the culture medium for primary culture. The mouse lacrimal gland stem cells cultured by the method of the invention have a large number, stable and continuous passage, and the function of restoring lacrimal gland secretion, and can effectively treat dry eye.

【技术实现步骤摘要】
一种泪腺干细胞、泪腺干细胞的培养体系和培养方法
本专利技术涉及细胞工程领域，特别是涉及一种三维立体培养体系及采用此培养体系培养的小鼠泪腺干细胞(LGSC)。
技术介绍
泪腺是眼部重要器官，主要由分泌腺泡和分泌管组成。泪腺受到交感神经和副交感神经调节，其中大部分是胆碱能神经，少部分是肾上腺素能神经。交感神经源自颈上神经节，副交感神经则与翼腭神经节和睫状神经节相连接，并且泪腺的某些感觉神经与三叉神经相连。泪腺中有多种乙酰胆碱受体，包括毒蕈硷受体、I型和II型血管活性肠肽受体及去甲肾上腺素受体α1、β。神经调节下泪腺能分泌溶菌酶，乳铁传递蛋白，脂质运载蛋白，免疫球蛋白A等。泪腺分泌眼泪，形成泪膜，使眼睛保持湿润，以保护眼睛。一旦泪腺病变或受到损伤，眼泪分泌不足，人就会患上干眼症(DryeyeDisease,DED)。人的衰老、自身免疫系统的紊乱、眼部的放疗、以及雄性激素水平的降低都会引起泪腺功能失调。干眼症患者所分泌形成的泪膜比正常泪膜渗透压高，从而引起角膜炎症，导致角膜细胞受损、形成溃疡，最终导致患者视力下降，严重影响其生活质量。对于干眼症患者，目前的药物治疗方案主要有点滴等渗或低渗的眼本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种泪腺干细胞的培养体系，其特征在于，以DMEM/F12为基础培养基，添加以下组分构成培养液：细胞培养添加剂、非必需氨基酸、L‑丙氨酰‑L‑谷氨酰胺、丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路配体、成纤维细胞生长因子、Wnt信号通路配体和ROCK信号通路抑制剂的组合物，并以基质胶作为立体培养的支架。

【技术特征摘要】
1.一种泪腺干细胞的培养体系，其特征在于，以DMEM/F12为基础培养基，添加以下组分构成培养液：细胞培养添加剂、非必需氨基酸、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路配体、成纤维细胞生长因子、Wnt信号通路配体和ROCK信号通路抑制剂的组合物，并以基质胶作为立体培养的支架。2.根据权利要求1所述的泪腺干细胞的培养体系，其特征在于，所述细胞培养添加剂为N2和B27的混合物。3.根据权利要求1所述的泪腺干细胞的培养体系，其特征在于，所述细胞培养添加剂为9F，所述9F为β-巯基乙醇、2-氨基乙醇、亚硒酸钠、肝素、转铁蛋白、维生素C、胰岛素、牛血清白蛋白-油酸和成纤维细胞生长因子-2的混合物。4.根据权利要求2所述的泪腺干细胞的培养体系，其特征在于，所述细胞培养添加剂中N2体积浓度为0.5％-1％，B27体积浓度为1％-2％；所述非必需氨基酸体积浓度为1％，所述L-丙氨酰-L-谷氨酰胺体积浓度为1％。5.根据权利要求3所述的泪腺干细胞的培养体系，其特征在于，所述细胞培养添加剂9F中各组分浓度为：β-巯基乙醇5-10μM、2-氨基乙醇5-10μM、亚硒酸钠10-20μM、肝素50-150n...

【专利技术属性】
技术研发人员：张雁，肖洒，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44