基于双相分离获得高质量虫黄藻细胞核的提取方法技术

本发明专利技术属于生物分离技术领域，具体公开了基于双相分离获得高质量虫黄藻细胞核的提取方法。本发明专利技术通过优化超声参数实现α‑1,3‑葡聚糖‑硅酸盐复合细胞壁的高效解离，同时避免核膜破裂。在聚乙二醇/葡聚糖双相系统中，细胞核和叶绿体的分离行为由其表面亲疏水性、密度及相分配系数共同决定。基于双相极性调控削弱核与叶绿体间的物理连接，能显著降低叶绿体DNA污染率。该方法的优势在于首次实现虫黄藻核的高纯度、低损伤提取，克服传统机械法核膜破损率高、酶解法裂解效率不足及离心分离污染严重等缺陷。完整保留细胞核的完整形态和组分，为解析虫黄藻核内共生基因动态调控机制提供关键技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物分离，具体涉及基于双相分离获得高质量虫黄藻细胞核的提取方法。

技术介绍

1、虫黄藻科是一类与珊瑚虫共生的单细胞海洋甲藻，是珊瑚虫主要的能量来源，它对环境胁迫因子的不耐受被认为是珊瑚白化的主要原因。因此，揭示虫黄藻的胁迫响应机制是全球努力减轻珊瑚白化和减少气候变化对珊瑚礁影响的优先事项。虫黄藻除了在生态学方面扮演着特殊的角色之外，在系统生物学、遗传学和基因组学上都拥有非常高的研究价值。

2、与高等植物和其他真核藻类相比，虫黄藻(symbiodiniumspp.)的细胞核具有显著独特性。虫黄藻具有一个高度特异的细胞核，即所谓的甲藻核(dinokaryon)。虫黄藻有明确的细胞核和核仁，核糖体基因呈串重复排列，它有许多甲藻细胞共有的非真核生物特征，其中包括：1)缺乏组蛋白和核小体；2)染色体结构较为特别，不同于其它真核生物，在细胞各个生长阶段都不会经历螺旋与解螺旋的过程，而是始终保持高度浓缩，有永久浓缩的染色质；3)有持久的核膜和封闭型的有丝分裂，在封闭型有丝分裂中，局部核膜的拆解机制与开放型有丝分裂中的核包膜的拆卸紧密相关，这揭示本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.基于双相分离获得高质量虫黄藻细胞核的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.据权利要求1所述的基于双相分离获得高质量虫黄藻细胞核的提取方法，其特征在于，所述S1中超声参数为功率200W，破碎时间10分钟，工作3秒、间歇4秒，全程冰上操作。

3.据权利要求2所述的基于双相分离获得高质量虫黄藻细胞核的提取方法，其特征在于，所述S1中碱性裂解液成分包括：蔗糖0.25M、Tris-HCl(pH8.0)20mM、NaCl 40mM、MgCl220mM、MOPS20mM、Triton X-1000.1％、EGTA(pH8.0)1mM、DTT 5mM、1×蛋白酶抑制剂，用...

【技术特征摘要】

1.基于双相分离获得高质量虫黄藻细胞核的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.据权利要求1所述的基于双相分离获得高质量虫黄藻细胞核的提取方法，其特征在于，所述s1中超声参数为功率200w，破碎时间10分钟，工作3秒、间歇4秒，全程冰上操作。

3.据权利要求2所述的基于双相分离获得高质量虫黄藻细胞核的提取方法，其特征在于，所述s1中碱性裂解液成分包括：蔗糖0.25m、tris-hcl(ph8.0)20mm、nacl 40mm、mgcl220mm、mops20mm、triton x-1000.1％、egta(ph8.0)1mm、dtt 5mm、1×蛋白酶抑制剂，用1m koh调节ph至7.5-7.7。

4.据权利要求3所述的基于双相分离获得高质量虫黄藻细胞核的提取方法，其特征在于，所述s2中peg6000/葡聚糖t-40双相系统的组成为：5％peg-6000、12％葡聚糖t40、...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒杨，骆观正，钟振东，兰烨琳，张璋，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：