一种重组人纤溶酶原突变体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医疗技术领域，具体涉及一种重组人纤溶酶原突变体及其制备方法和应用。一种重组人纤溶酶原突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明专利技术重组人纤溶酶原突变体相对于野生型mPLG，可以直接在大肠杆菌发酵液上清中可溶表达。可溶性表达可以直接对发酵液进行层析获得目的蛋白，相比于包涵体变复性处理，其在工艺简单化、活性损失、时间成本和生产成本等方面都具有显著的优势。同时，经过纤维蛋白平板法和试剂盒法测试突变体蛋白活性，结果显示，目的蛋白的效价约为8UI/mg，与突变前变复性获得的蛋白mPLG和人血源获得的PLG的效价相差不多。总的来说，相对野生型，突变株的可溶性显著提高，同时活保持较高的蛋白活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药，更具体地，涉及了一种重组人纤溶酶原突变体及其制备方法和应用。

技术介绍

1、纤溶酶原（plasminogen，plg）是人血浆中存在的一种功能蛋白，主要由肝脏合成，但在所有主要的器官中都有表达，plg在血浆中浓度为0.06-0.25g/l，是一种稀缺的血浆蛋白。plg是一种无活性的酶原，在激活剂的作用下转化成纤溶酶（plm），从而发挥多种生理功能。作为广谱的蛋白酶，plg（plm）参与纤维蛋白降解、补体相互作用、细胞外基质降解、细胞迁移、缓解炎症、促胶原活性和溶解血栓等诸多生理过程。

2、plg是一种由791个氨基端组成的单链丝氨酸蛋白，相对分子量约为90kda，包括7个结构域：n-端多肽区（n-terminal preactivation peptide domain，pap）、5个高度重复的环状结构域（kringle domains，k1~k5）、丝氨酸蛋白酶结构域（serine proteasedomain，sp）。plg是纤溶系统中最基本最核心的组分，纤溶系统又称纤维蛋白溶解系统，是指纤溶酶原激活剂作用于plg的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组人纤溶酶原突变体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的重组人纤溶酶原突变体，其特征在于，在氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示的mPLG的序列上进行氨基酸定点突变获得重组人纤溶酶原突变体，其中氨基酸突变位点包括H569N、V577I、P609S、R637K、K645A、V657I、F681Y和Q721K。

3.根据权利要求1所述的重组人纤溶酶原突变体，其特征在于，所述重组人纤溶酶原突变体的分子量大小为30KDa。

4.一种编码如权利要求1所述的重组人纤溶酶原突变体的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸序...

【技术特征摘要】

1.一种重组人纤溶酶原突变体，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no.3所示。

2.根据权利要求1所述的重组人纤溶酶原突变体，其特征在于，在氨基酸序列如seq idno.2所示的mplg的序列上进行氨基酸定点突变获得重组人纤溶酶原突变体，其中氨基酸突变位点包括h569n、v577i、p609s、r637k、k645a、v657i、f681y和q721k。

3.根据权利要求1所述的重组人纤溶酶原突变体，其特征在于，所述重组人纤溶酶原突变体的分子量大小为30kda。

4.一种编码如权利要求1所述的重组人纤溶酶原突变体的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸序列如seq id no.4所示。

5.一种重组人纤溶酶原突变体的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：采用基因合成的方法合成...

【专利技术属性】
技术研发人员：王光远，王雪云，张运佳，罗姗，何智敏，梁琳琳，刘璐，舒蕊，黄荣杰，杨玄坤，
申请(专利权)人：深圳市卫光生物制品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：