【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞分化，具体涉及一种定向ipsc分化为ink的方法。
技术介绍
1、自然杀伤（nk）细胞作为先天免疫系统的核心效应细胞，通过非mhc限制性机制识别并杀伤肿瘤细胞，具有直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的能力，且不易诱发移植物抗宿主病（gvhd），因此在癌症免疫治疗中展现出巨大潜力。传统的nk细胞来源包括外周血单个核细胞（pbmcs）、脐带血（ucb）和nk细胞系，但这些来源存在一定的局限性，如供体依赖性、细胞异质性和扩增效率低下等。近年来，诱导多能干细胞（ipsc）作为一种可无限扩增且具有高均质性与基因编辑灵活性及遗传稳定性的细胞来源，有望突破传统pbmc/ucb来源的供体限制和批次异质性瓶颈，成为“现货型”nk细胞疗法的核心来源。未来需聚焦分化机制优化与安全性提升，以加速其临床应用转化。现有ipsc向ink的分化方案存在周期长（>30天）、功能成熟度不足等问题。
2、因此，如何提供一种能显著提高ipsc向ink的定向分化效率的方法，成为本行业研究的热点和痛点。
技术实现思路b>
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【技术保护点】
1.一种定向iPSC分化为iNK的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种定向iPSC分化为iNK的方法，其特征在于，所述第一阶段，前1天时，用细胞解离试剂将细胞消化成单细胞，1200rpm离心5min后用mTeSR重悬并以1×105~1×106细胞数/mL的密度，将细胞接种于低吸附的六孔板中，并加入15μM Y27632，随后置于5% CO2，37℃恒温培养箱中，在摇床上，80rpm培养细胞24小时，以形成拟胚体。
3.根据权利要求2所述的一种定向iPSC分化为iNK的方法，其特征在于，所述第二阶段，0天时，基础为EB分...
【技术特征摘要】
1.一种定向ipsc分化为ink的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种定向ipsc分化为ink的方法，其特征在于，所述第一阶段，前1天时，用细胞解离试剂将细胞消化成单细胞，1200rpm离心5min后用mtesr重悬并以1×105~1×106细胞数/ml的密度，将细胞接种于低吸附的六孔板中，并加入15μm y27632，随后置于5% co2，37℃恒温培养箱中，在摇床上，80rpm培养细胞24小时，以形成拟胚体。
3.根据权利要求2所述的一种定向ipsc分化为ink的方法，其特征在于，所述第二阶段，0天时，基础为eb分化培养基，加入6~10μm chir99021，将细胞离心换液，置于5% co2，37℃恒温培养箱中，在摇床上，80rpm培养细胞24~48小时；
4.根据权利要求3所述的一种定向ipsc分化为ink的方法，其特征在于，所述第三阶段，在1天—3天间中胚层细胞诱导分化形成cd34+生...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈英，林家会，马士棋，陈旭，陈刚，
申请(专利权)人：苏州依科赛生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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