产多巴胺神经祖细胞的制备方法技术

本发明专利技术通过下述步骤(1)及(2)制备包含Corin和/或Lrtm1阳性细胞的细胞群体，并使用与Corin结合的物质和/或与Lrtm1结合的物质从得到的细胞群体中收集Corin和/或Lrtm1阳性细胞，通过将该Corin和/或Lrtm1阳性细胞在包含1个或多个神经营养因子的培养液中悬浮培养，从而制备产多巴胺神经祖细胞。(1)将多能干细胞在无饲养层细胞存在下，在包含Sonic hedgehog(SHH)信号刺激剂及未分化维持因子的未分化维持培养基中，在细胞外基质的存在下进行贴壁培养的步骤，及(2)将步骤(1)中得到的细胞群体在包含1种以上的诱导分化因子的培养液中培养的步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】产多巴胺神经祖细胞的制备方法
本专利技术涉及产多巴胺神经祖细胞的制备方法、以及包含可使其向产多巴胺神经祖细胞分化的Corin和/或Lrtm1阳性细胞的细胞群体的制备方法。
技术介绍
帕金森氏病是由于中脑黑质的产生多巴胺的神经细胞的脱落而发生的神经变性疾病，目前全世界约有400万患者。作为帕金森氏病的治疗，已经进行了基于L-DOPA或多巴胺激动剂的药物治疗、基于定位脑手术的凝固术或深层电刺激治疗及胎儿中脑移植等。胎儿中脑移植存在其供应源的组织的伦理问题，并且感染的危险性也高。因此，提出了使用从胚胎干细胞(ES细胞)、人工多能干细胞(iPS细胞)等多能干细胞所诱导分化成的神经细胞的治疗法(非专利文献1)。但是已有人指出，经诱导分化的神经细胞在移植时有可能形成良性肿瘤，而且认为产多巴胺神经细胞以外的细胞可能导致运动障碍，因此，人们追求选择植活并且安全的细胞进行移植。作为产多巴胺神经祖细胞的制备方法，提出了包括通过作为产生多巴胺的神经细胞或产多巴胺神经祖细胞的标记的基因而筛选适于移植的细胞的步骤的方法(专利文献1)，但为了减少由含有生物来源成分所导致的批次差异的影响、提高产生效率，进一步的改本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.包含Corin和/或Lrtm1阳性细胞的细胞群体的制备方法，包括下述步骤(1)及(2)：(1)在无饲养层细胞存在下、在包含Sonic hedgehog(SHH)信号刺激剂及未分化维持因子的未分化维持培养基中，在细胞外基质的存在下对多能干细胞进行贴壁培养的步骤，及(2)将步骤(1)中得到的细胞在包含1种以上的诱导分化因子的培养基中进行培养的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.22 JP 2016-0864991.包含Corin和/或Lrtm1阳性细胞的细胞群体的制备方法，包括下述步骤(1)及(2)：(1)在无饲养层细胞存在下、在包含Sonichedgehog(SHH)信号刺激剂及未分化维持因子的未分化维持培养基中，在细胞外基质的存在下对多能干细胞进行贴壁培养的步骤，及(2)将步骤(1)中得到的细胞在包含1种以上的诱导分化因子的培养基中进行培养的步骤。2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，SHH信号刺激剂为：SAG(N-甲基-N’-(3-吡啶基苄基)-N’-(3-氯代苯并[b]噻吩-2-羰基)-1,4-二氨基环己烷)、shh蛋白质或其片段、Purmorphamine或它们的组合。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中，步骤(1)中的未分化维持培养基是还包含TGFβ抑制剂或BMP抑制剂的培养基。4.根据权利要求3所述的制备方法，其中，TGFβ抑制剂为A83-01，BMP抑制剂为LDN193189。5.根据权利要求1～4中任一项所述的制备方法，其中，未分化维持因子至少包含FGF信号传导通路作用物质。6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，FGF信号传导通路作用物质为bFGF。7.根据权利要求1～6中任一项所述的制备方法，其中，在上述步骤(1)中，对多能干细胞进行不超过48小时的培养。8.根据权利要求1～7中任一项所述的制备方法，其中，诱导分化因子为选自下组中的1种或多种因子：BMP抑制剂、TGFβ抑制剂、SHH信号刺激剂、FGF8及GSK3β抑制剂。9.根据权利要求1～8中任一项所述的制备方法，其中，步骤(2)为在细胞外基质上进行贴壁培养的步骤。10.根据权利要求9所述的制备方法，其中，细胞外基质为层粘连蛋白或其片段。11.根据权利要求10所述的制备方法，其中，细胞外基质为层粘连蛋白511E8。12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，步骤(2)包括以下步骤：(a)在细胞外基质的存在下，在包含BMP抑制剂及TGFβ抑制剂的培养基中将步骤(1)中得到的细胞进行贴壁培养的步骤；(b)在包含BMP抑制剂、TGFβ...

【专利技术属性】
技术研发人员：高桥淳，土井大辅，吉田贤司，桑原笃，高桥政代，
申请(专利权)人：国立大学法人京都大学，大日本住友制药株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP